大(dà)鼠 （Rat） 巨噬細胞(bāo)炎性(xìng)蛋白(bái)-1β（MIP-1β）ELISA 檢測試劑(jì)盒
本試劑(jì)僅(jǐn)供(gōng)研究(jiū)使用(yòng) 標本(běn)：血清或血漿(jiāng)

試驗原(yuán)理(lǐ)：
MIP-1β試(shì)劑盒是(shì)固(gù)相夾心法酶聯(lián)免疫吸附(fù)實驗（ELISA）.已知MIP-1β濃(nóng)度的(dí)標(biāo)準品(pǐn)，未知(zhī)濃度的(dí)樣品加入微孔酶標(biāo)板內進(jìn)行(háng)檢測(cè)。先將MIP-1β和生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的抗體(tǐ)同(tóng)時溫(wēn)育(yù)。洗滌(dí)後，加入親(qīn)和(hé)素標記過的HRP。再(zài)經過(guò)溫(wēn)育(yù)和洗滌(dí)，去(qù)除(chú)未結合的酶結合物(wù)，然(rán)後加(jiā)入底物A，B，和(hé)酶結合物同時作用(yòng)。產生顏色(sè)。顏(yán)色的(dí)深淺和樣品中(zhōng)MIP-1β的濃度(dù)呈比(bǐ)例(lì)關係。

試劑盒內容(róng)及(jí)其(qí)配(pèi)製
試劑(jì)盒成份（2-8℃保存） 96孔(kǒng)配(pèi)置(zhì) 48孔(kǒng)配置(zhì) 配(pèi)製
96/48人(rén)份酶標板 1塊板（96T） 半塊板(bǎn)（48T） 即(jí)用(yòng)型
塑料(liào)膜(mó)板蓋 1塊(kuài) 半(bàn)塊 即(jí)用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說明書進(jìn)行稀稀(xī)
空白(bái)對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用型
標準品(pǐn)稀(xī)釋緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用(yòng)型
生物素標(biāo)記(jì)的抗MIP-1β抗體 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈(liàn)酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用(yòng)型
洗滌緩衝(chōng)液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書(shū)進行稀(xī)釋(shì)
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
底(dǐ)物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終(zhōng)止液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)

自備材料
1． 蒸餾(liù)水。
2． 加(jiā)樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器及(jí)磁力(lì)攪(jiǎo)拌器(qì)等(děng)。

安全(quán)性(xìng)
1． 避(bì)免(miǎn)直(zhí)接(jiē)接觸終止(zhǐ)液和底物(wù)A，B。一旦接(jiē)觸(chù)到(dào)這(zhè)些液體(tǐ)，請盡快用水衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實(shí)驗中不(bù)要(yào)吃(chī)喝，抽煙(yān)或使用化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不(bù)要用(yòng)嘴吸取(qǔ)試劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的任何成份。

操(cāo)作注意(yì)事項(xiàng)
1． 試(shì)劑(jì)應按標簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使(shǐ)用前(qián)恢復(fù)到(dào)室(shì)溫(wēn)。稀稀(xī)過(guò)後(hòu)的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)應(yīng)丟棄，不可(kě)保(bǎo)存。
2． 實驗中不(bù)用的(dí)板條應立(lì)即放(fàng)回(huí)包裝(zhuāng)袋中(zhōng)，密封(fēng)保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免變質(zhì)。
3． 不(bù)用(yòng)的其(qí)它(tā)試劑應包裝(zhuāng)好(hǎo)或蓋好(hǎo)。不同(tóng)批號(hào)的(dí)試劑(jì)不要(yào)混用(yòng)。保(bǎo)質前(qián)使用。
4． 使(shǐ)用一(yī)次(cì)性(xìng)的(dí)吸(xī)頭以免交叉汙染，吸(xī)取終止液(yè)和(hé)底物A，B液時(shí)，避免使(shǐ)用帶金屬(shǔ)部分(fēn)的加樣(yàng)器。
5． 使用(yòng)幹(gān)淨的塑(sù)料容(róng)器配置洗滌液。使用前(qián)充(chōng)分混匀(yún)試(shì)劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的各種(zhǒng)成(chéng)份及樣品。
6． 洗(xǐ)滌(dí)酶標板(bǎn)時應充分拍(pāi)幹，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水紙(zhǐ)直(zhí)接放入酶(méi)標(biāo)反(fǎn)應孔中吸水(shuǐ)。
7． 底物(wù)A應(yīng)揮發，避(bì)免(miǎn)長時(shí)間(jiān)打(dǎ)開(kāi)蓋(gài)子。底(dǐ)物B對光敏(mǐn)感(gǎn)，避免(miǎn)長時間暴露於光下。避免(miǎn)用(yòng)手接觸(chù)，有(yǒu)毒(dú)。實驗完(wán)成後應立即(jí)讀(dú)取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試(shì)劑(jì)的順(shùn)序應一致(zhì)，以保證(zhèng)所有反應板孔溫(wēn)育的時間(jiān)一樣(yàng)。
9． 按(àn)照說(shuō)明(míng)書(shū)中標明(míng)的(dí)時(shí)間，加液(yè)的量(liáng)及(jí)順序進行(háng)溫(wēn)育操(cāo)作。

樣(yàng)品收集，處(chǔ)理及保(bǎo)存方(fāng)法
1， 血(xiě)清-----操作過程中(zhōng)避(bì)免任何細(xì)胞(bāo)刺激(jī)。使用不(bù)含(hán)熱原(yuán)和(hé)內毒素(sù)的(dí)試(shì)管。收集(jí)血液後(hòu)，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘將血清(qīng)和(hé)紅細(xì)胞迅速小心(xīn)地分(fēn)離。
2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬酸(suān)鹽，肝素血(xiě)漿(jiāng)可用(yòng)於(yú)檢測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆粒。
3， 細(xì)胞上(shàng)清液(yè)---1000×g離(lí)心10分鐘去(qù)除(chú)顆粒和聚合物。
4， 保存------如(rú)果樣(yàng)品(pǐn)不立即使(shǐ)用，應將(jiāng)其分成小(xiǎo)部分-70 ℃保存(cún)，避免反復(fù)冷凍。盡(jìn)可能(néng)的不(bù)要(yào)使(shǐ)用溶血(xiě)或高血脂血(xiě)。如(rú)果血(xiě)清(qīng)中大量顆粒，檢測前先離心或(huò)過濾(lǜ)。不要(yào)在(zài)37℃或更(gēng)高(gāo)的(dí)溫度加熱(rè)解凍。應(yīng)在室溫(wēn)下解(jiě)凍並(bìng)確(què)保(bǎo)樣品均匀(yún)地(dì)充(chōng)分解凍。

試劑的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標準(zhǔn)品(pǐn)：標(biāo)準品(pǐn)的係列稀(xī)釋應(yīng)在實(shí)驗時準備，不能(néng)儲(chǔ)存(cún)。稀(xī)釋前(qián)將標準品振蕩(dàng)混(hùn)匀。稀釋比例按下(xià)表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標準(zhǔn)品） 原倍(bèi)濃(nóng)度(dù)不用稀(xī)釋直接加入50ul。
400 pg/ml （5號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)原(yuán)倍(bèi)標準品加入100ul的標準品(pǐn)稀釋液
200 pg/ml （4號標準品） 100ul的(dí)5號標準(zhǔn)品加入100ul的標準品稀釋液(yè)
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準品加(jiā)入(rù)100ul的標準品稀釋液(yè)
50 pg/ml （2號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)3號(hào)標準品(pǐn)加入100ul的標準品稀釋(shì)液(yè)
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的2號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液
0 pg/ml （空白對照） 原(yuán)始濃度不用(yòng)稀釋直(zhí)接(jiē)加(jiā)入50ul。

2． 洗滌緩(huǎn)衝液(yè)（50×）的稀釋(shì)：蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)50倍(bèi)稀(xī)釋。

操(cāo)作(zuò)步驟(zhòu)
1． 使用(yòng)前(qián)，將(jiāng)所(suǒ)有(yǒu)試劑充(chōng)分(fēn)混匀。不要使(shǐ)液體產(chǎn)生大量的泡沫，以(yǐ)免(miǎn)加樣(yàng)時加(jiā)入大(dà)量的(dí)氣(qì)泡，產生加(jiā)樣上的(dí)誤差。
2． 根(gēn)據待測(cè)樣品數量加上(shàng)標(biāo)準品的數量(liáng)決定所需的(dí)板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和(hé)空白孔建(jiàn)議做復(fù)孔。每個(gè)樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據自(zì)己的(dí)數量來定，能使用(yòng)復(fù)孔的盡(jìn)量做復(fù)孔。
3． 加入(rù)稀(xī)釋(shì)好後(hòu)的標準(zhǔn)品50ul於反(fǎn)應孔(kǒng)，加入待測(cè)樣(yàng)品50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)內(nèi)。立(lì)即加(jiā)入(rù)50ul的生(shēng)物(wù)素(sù)標記(jì)的抗體(tǐ)。蓋上膜(mó)板(bǎn)，輕(qīng)輕振蕩混匀，37℃溫育1小(xiǎo)時(shí)。
4． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液體(tǐ)，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去(qù)洗(xǐ)滌液(yè)，用(yòng)吸水紙拍幹。重復(fù)此(cǐ)操(cāo)作3次(cì)。如(rú)果用(yòng)洗板機(jī)洗滌，洗滌次(cì)數增加一次(cì)。
5． 每孔(kǒng)加(jiā)入80ul的親(qīn)和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育(yù)30分鐘(zhōng)。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，振(zhèn)蕩30秒(miǎo)，甩去(qù)洗(xǐ)滌液，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹。重復(fù)此操(cāo)作3次(cì)。如果(guǒ)用洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次數增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)底物A，B各50ul，輕輕振(zhèn)蕩混(hùn)匀，37℃溫育10分鐘。避(bì)免(miǎn)光照(zhào)。
8． 取出酶標板(bǎn)，迅速加(jiā)入50ul終止液，加(jiā)入終止(zhǐ)液後(hòu)應(yīng)立(lì)即(jí)測(cè)定結果。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處測定(dìng)各(gè)孔(kǒng)的OD值(zhí)。

建議(yì)使用(yòng)的(dí)實驗方(fāng)案
 標準品濃度(dù)（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
B 400 400 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品
C 200 200 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
D 100 100 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
F 25 25 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
G 0 0 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品
H 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)

局限
6號標準品(pǐn)以上(shàng)的結果為非(fēi)綫性(xìng)的，根(gēn)據此標準(zhǔn)曲綫無(wú)法得(dé)到的(dí)結果。

試(shì)劑盒性能
1. 靈敏(mǐn)度(dù)：zui小的(dí)檢測濃度(dù)小於(yú)1號(hào)標準(zhǔn)品。稀(xī)釋度的綫(xiàn)性。樣品(pǐn)綫(xiàn)性回(huí)歸與預(yù)期(qī)濃度相(xiāng)關(guān)係(xì)數(shù)R值為0.990。
2. 特(tè)異(yì)性：不與(yǔ)其它細胞因(yīn)子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)，板(bǎn)間變異係數(shù)均小(xiǎo)於(yú)10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析(xī)
1，儀(yí)器(qì)值：於波(bō)長450nm的酶(méi)標儀上(shàng)讀取各孔(kǒng)的(dí)OD值

2，以(yǐ)吸光度OD值為縱坐(zuò)標（Y），相(xiāng)應(yīng)的MIP-1β標準品濃(nóng)度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲綫，樣品的(dí)MIP-1β含(hán)量可(kě)根據其OD值由標準曲綫換算(suàn)出(chū)相(xiāng)應的(dí)濃(nóng)度。

3，檢測值(zhí)範圍：0-800pg/ml

4，敏感(gǎn)度(dù)： 1.0 pg/ml