試驗(yàn)原理(lǐ)：
TFPI試(shì)劑(jì)盒是固(gù)相夾心(xīn)法(fǎ)酶聯免疫(yì)吸附(fù)實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已(yǐ)知TFPI濃度(dù)的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)，未(wèi)知濃度(dù)的(dí)樣(yàng)品(pǐn)加入微孔(kǒng)酶(méi)標板(bǎn)內進行檢(jiǎn)測。先將TFPI和(hé)生物(wù)素(sù)標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌後，加入(rù)親(qīn)和素標記(jì)過(guò)的HRP。再(zài)經過溫育和(hé)洗(xǐ)滌，去除未結合的(dí)酶結合(hé)物，然(rán)後加入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B，和(hé)酶(méi)結合物同時作用。產(chǎn)生(shēng)顏(yán)色。顏(yán)色的(dí)深(shēn)淺和樣品(pǐn)中TFPI的濃度呈比例關(guān)係。

試劑盒(hé)內(nèi)容及其(qí)配(pèi)製
試劑盒成份（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔(kǒng)配(pèi)置 48孔(kǒng)配(pèi)置(zhì) 配製(zhì)
96/48人份酶標板 1塊(kuài)板（96T） 半(bàn)塊(kuài)板（48T） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
塑(sù)料膜板(bǎn)蓋(gài) 1塊 半塊 即(jí)用型(xíng)
標(biāo)準(zhǔn)品：400pmol/L 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說明書(shū)進行稀稀
空(kōng)白(bái)對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用型
生物(wù)素標記(jì)的抗(kàng)TFPI抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
親(qīn)和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即用型(xíng)
洗滌緩(huǎn)衝(chōng)液(yè) 1瓶(píng)（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說明書進行稀釋(shì)
底(dǐ)物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底(dǐ)物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

自備(bèi)材料(liào)
1． 蒸餾水(shuǐ)。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200ul，500ul，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器(qì)及磁力攪拌(bàn)器等。

安全(quán)性(xìng)
1． 避(bì)免直接(jiē)接觸終止液和底(dǐ)物A，B。一旦接(jiē)觸到這(zhè)些液體(tǐ)，請盡(jìn)快用(yòng)水(shuǐ)衝洗(xǐ)。
2． 實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)要吃喝(hē)，抽煙或(huò)使用化(huà)妝品(pǐn)。
3． 不要用嘴吸(xī)取試劑盒裏(lǐ)的(dí)任(rèn)何成(chéng)份(fèn)。

操作(zuò)注意事(shì)項(xiàng)
1． 試(shì)劑應(yīng)按(àn)標簽(qiān)說(shuō)明書儲(chǔ)存(cún)，使(shǐ)用前恢復到室(shì)溫(wēn)。稀(xī)稀(xī)過後的標準品應丟棄(qì)，不可保(bǎo)存。
2． 實(shí)驗中不(bù)用的(dí)板(bǎn)條(tiáo)應立即(jí)放回(huí)包(bāo)裝袋中(zhōng)，密(mì)封保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免(miǎn)變(biàn)質(zhì)。
3． 不用的(dí)其它試(shì)劑應(yīng)包(bāo)裝好(hǎo)或(huò)蓋好。不同批(pī)號的試劑(jì)不要混(hùn)用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一(yī)次(cì)性(xìng)的吸(xī)頭以(yǐ)免(miǎn)交叉汙(wū)染(rǎn)，吸(xī)取終止液和(hé)底物A，B液時，避免使用(yòng)帶(dài)金(jīn)屬(shǔ)部分的加(jiā)樣器。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹(gān)淨的塑料(liào)容(róng)器(qì)配置洗滌液。使(shǐ)用(yòng)前(qián)充(chōng)分(fēn)混(hùn)匀試劑(jì)盒裏(lǐ)的各種成(chéng)份及(jí)樣(yàng)品。
6． 洗滌酶標(biāo)板(bǎn)時應(yīng)充分拍(pāi)幹，不要(yào)將(jiāng)吸水紙(zhǐ)直接放(fàng)入酶(méi)標(biāo)反應孔中(zhōng)吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發，避免(miǎn)長時(shí)間打(dǎ)開蓋子。底物B對光敏感(gǎn)，避免長時間(jiān)暴露於光(guāng)下。避免用手接觸，有(yǒu)毒。實(shí)驗完成後應(yīng)立(lì)即讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試(shì)劑的順(shùn)序應(yīng)一(yī)致，以保證所(suǒ)有反應(yīng)板孔溫育(yù)的時間一(yī)樣(yàng)。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時間，加液(yè)的量及(jí)順(shùn)序(xù)進行(háng)溫育(yù)操作。

樣品收(shōu)集，處理(lǐ)及保(bǎo)存(cún)方法(fǎ)
1， 血清-----操(cāo)作(zuò)過程中避(bì)免任何細(xì)胞刺激。使用不(bù)含熱原和(hé)內毒素(sù)的(dí)試管(guǎn)。收集血液後，1000×g離心(xīn)10分鐘(zhōng)將血清(qīng)和紅(hóng)細胞迅(xùn)速小心(xīn)地分離。
2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬酸鹽，肝素(sù)血漿可(kě)用(yòng)於(yú)檢測。1000×g離心(xīn)30分(fēn)鐘去(qù)除顆粒。
3， 細(xì)胞上清(qīng)液---1000×g離心10分鐘去除顆粒(lì)和(hé)聚合物。
4， 保(bǎo)存------如果(guǒ)樣(yàng)品(pǐn)不立(lì)即(jí)使用(yòng)，應將其分(fēn)成(chéng)小部分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反復(fù)冷凍(dòng)。盡(jìn)可能(néng)的(dí)不要使用溶(róng)血(xiě)或高血脂(zhī)血。如果血(xiě)清中大(dà)量(liáng)顆(kē)粒，檢(jiǎn)測前先離心或過(guò)濾。不要在(zài)37℃或更(gēng)高的(dí)溫度(dù)加熱解(jiě)凍(dòng)。應(yīng)在室(shì)溫下解(jiě)凍並(bìng)確保樣品(pǐn)均匀(yún)地充分(fēn)解凍(dòng)。

試(shì)劑(jì)的準備
1． 標準品：標(biāo)準品(pǐn)的係列稀釋(shì)應在(zài)實(shí)驗時準備(bèi)，不能(néng)儲存(cún)。稀(xī)釋(shì)前(qián)將(jiāng)標(biāo)準品振(zhèn)蕩混匀。稀(xī)釋(shì)比例(lì)按下表中(zhōng)進(jìn)行：
400 pmol/L （6號標準(zhǔn)品(pǐn)） 原倍(bèi)濃(nóng)度不用稀釋(shì)直(zhí)接(jiē)加入50ul。
200 pmol/L （5號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的原(yuán)倍(bèi)標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
100 pmol/L （4號標(biāo)準品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
50 pmol/L （3號(hào)標準品） 100ul的(dí)4號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋液
25 pmol/L （2號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)3號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
12.5 pmol/L （1號標準品） 100ul的2號標準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋液
0 pmol/L （空白(bái)對照(zhào)） 原始濃(nóng)度不用稀釋直接(jiē)加(jiā)入50ul。

2． 洗滌緩衝液（50×）的稀(xī)釋：蒸(zhēng)餾水50倍(bèi)稀(xī)釋。

操作步驟(zhòu)
1． 使用前，將(jiāng)所有試劑充分混匀(yún)。不要使(shǐ)液(yè)體產(chǎn)生大(dà)量的(dí)泡沫(mò)，以免加樣時加入(rù)大(dà)量的(dí)氣泡(pào)，產(chǎn)生(shēng)加樣上(shàng)的(dí)誤差(chà)。
2． 根據(jù)待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)數量(liáng)加上標(biāo)準品的數量決(jué)定(dìng)所需(xū)的板條數。每個(gè)標準品和空白孔(kǒng)建議做復(fù)孔(kǒng)。每(měi)個樣(yàng)品根(gēn)據(jù)自己的數量來定，能(néng)使(shǐ)用復(fù)孔(kǒng)的盡(jìn)量做(zuò)復孔。
3． 加入稀釋好(hǎo)後的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)50ul於反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)，加入(rù)待測樣品(pǐn)50ul於反應(yīng)孔內。立(lì)即(jí)加(jiā)入(rù)50ul的生(shēng)物素標記(jì)的(dí)抗(kàng)體。蓋(gài)上膜板，輕(qīng)輕振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育1小(xiǎo)時。
4． 甩(shuǎi)去(qù)孔內液(yè)體，每(měi)孔加滿洗(xǐ)滌液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸(xī)水紙拍幹。重復(fù)此操(cāo)作3次(cì)。如(rú)果用(yòng)洗板機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次(cì)數(shù)增加一(yī)次。
5． 每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)80ul的親(qīn)和(hé)鏈酶素-HRP，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔(kǒng)內液(yè)體(tǐ)，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒(miǎo)，甩去洗滌液，用吸(xī)水紙拍幹。重復(fù)此(cǐ)操作3次。如(rú)果(guǒ)用洗板機洗滌，洗(xǐ)滌次數(shù)增加一(yī)次(cì)。
7． 每孔加入底(dǐ)物A，B各50ul，輕(qīng)輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)10分鐘(zhōng)。避免光照。
8． 取(qǔ)出酶標(biāo)板，迅速(sù)加入50ul終止(zhǐ)液(yè)，加入終(zhōng)止液後應(yīng)立即測(cè)定結果。
9． 在450nm波長(cháng)處(chǔ)測(cè)定(dìng)各孔的(dí)OD值。

建議使用的實驗(yàn)方(fāng)案
 標準品(pǐn)濃度（pmol/L） 
A 400 400 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 200 200 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
C 100 100 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
D 50 50 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
E 25 25 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
F 12.5 12.5 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
G 0 0 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
H 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)

局(jú)限(xiàn)
6號(hào)標準(zhǔn)品以上(shàng)的結果(guǒ)為非綫性的，根(gēn)據(jù)此標(biāo)準曲(qū)綫無法得到的(dí)結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度(dù)：zui小的檢測(cè)濃度小(xiǎo)於1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)。稀釋(shì)度(dù)的(dí)綫(xiàn)性(xìng)。樣(yàng)品綫性(xìng)回(huí)歸與預(yù)期(qī)濃(nóng)度相(xiāng)關(guān)係(xì)數(shù)R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特異(yì)性：不(bù)與其它(tā)細胞(bāo)因(yīn)子反(fǎn)應。
3. 重復性：板內(nèi)，板間(jiān)變異係(xì)數均小於10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1，儀器(qì)值：於波長450nm的酶標(biāo)儀(yí)上讀(dú)取(qǔ)各孔(kǒng)的(dí)OD值

2，以(yǐ)吸(xī)光度OD值為縱坐標（Y），相應的(dí)TFPI標準品濃度為橫坐(zuò)標(biāo)（X），做得相(xiāng)應的曲(qū)綫(xiàn)，樣(yàng)品(pǐn)的(dí)TFPI含(hán)量(liáng)可根據(jù)其(qí)OD值(zhí)由(yóu)標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)換(huàn)算(suàn)出(chū)相(xiāng)應的濃度。

3，檢(jiǎn)測值(zhí)範(fàn)圍：0-400pmol/L

4，敏感度(dù)： 1.0 pmol/L