試(shì)驗原理：
TGF-β1試劑盒(hé)是固(gù)相(xiāng)夾心(xīn)法酶聯免疫(yì)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已(yǐ)知TGF-β1濃度(dù)的標準(zhǔn)品，未知濃(nóng)度(dù)的樣(yàng)品加(jiā)入微(wēi)孔(kǒng)酶標(biāo)板內進行檢測。先將TGF-β1和生(shēng)物素標記的(dí)抗(kàng)體同(tóng)時溫育。洗滌(dí)後(hòu)，加(jiā)入親和(hé)素(sù)標記(jì)過(guò)的HRP。再(zài)經(jīng)過(guò)溫育和洗(xǐ)滌，去(qù)除未結(jié)合(hé)的酶結合物，然後加(jiā)入底(dǐ)物A，B，和酶(méi)結合物(wù)同(tóng)時作用。產(chǎn)生顏色。顏(yán)色的深淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)TGF-β1的濃(nóng)度(dù)呈(chéng)比例關(guān)係(xì)。

試劑(jì)盒(hé)內(nèi)容及其配製(zhì)
試(shì)劑盒成份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配置 48孔配(pèi)置(zhì) 配製(zhì)
96/48人份酶(méi)標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型(xíng)
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即(jí)用(yòng)型
標(biāo)準(zhǔn)品：400pmol/L 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說(shuō)明書(shū)進行(háng)稀(xī)稀
空白對照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用型(xíng)
標準品(pǐn)稀(xī)釋緩衝液 1瓶(píng)（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即(jí)用(yòng)型
生(shēng)物(wù)素標記(jì)的(dí)抗TGF-β1抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
親(qīn)和(hé)鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型(xíng)
洗滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明書進行(háng)稀釋(shì)
底(dǐ)物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
底物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
終止(zhǐ)液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型

自(zì)備材料(liào)
1． 蒸餾(liù)水。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200ul，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及磁力(lì)攪拌器等。

安全(quán)性
1． 避免(miǎn)直接(jiē)接(jiē)觸終(zhōng)止液(yè)和底(dǐ)物(wù)A，B。一(yī)旦接觸到(dào)這些(xiē)液體，請盡(jìn)快用(yòng)水衝(chōng)洗。
2． 實驗中(zhōng)不(bù)要(yào)吃(chī)喝，抽(chōu)煙或使用(yòng)化妝品(pǐn)。
3． 不要用(yòng)嘴(zuǐ)吸取試劑(jì)盒裏的(dí)任何成(chéng)份。

操(cāo)作注(zhù)意事項
1． 試(shì)劑應(yīng)按標簽說(shuō)明(míng)書(shū)儲存(cún)，使用(yòng)前恢復(fù)到(dào)室溫。稀(xī)稀(xī)過(guò)後(hòu)的標(biāo)準品(pǐn)應丟棄，不(bù)可保存。
2． 實驗(yàn)中不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條應(yīng)立(lì)即(jí)放回包(bāo)裝(zhuāng)袋(dài)中，密(mì)封保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免變質。
3． 不用(yòng)的其(qí)它(tā)試劑應包裝好(hǎo)或蓋(gài)好(hǎo)。不同批號的(dí)試(shì)劑不要(yào)混用。保質(zhì)前使(shǐ)用。
4． 使用(yòng)一(yī)次性的(dí)吸頭以(yǐ)免(miǎn)交叉汙染(rǎn)，吸(xī)取(qǔ)終(zhōng)止(zhǐ)液和(hé)底物A，B液(yè)時，避(bì)免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)帶(dài)金屬部分(fēn)的(dí)加(jiā)樣器。
5． 使用(yòng)幹淨的(dí)塑料容(róng)器(qì)配置(zhì)洗(xǐ)滌液。使(shǐ)用前(qián)充分(fēn)混匀試劑盒(hé)裏的各(gè)種成份(fèn)及樣品。
6． 洗滌酶標板時應(yīng)充(chōng)分(fēn)拍(pāi)幹(gān)，不(bù)要將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙(zhǐ)直接放入酶標反(fǎn)應(yīng)孔中(zhōng)吸水。
7． 底(dǐ)物A應(yīng)揮發，避(bì)免(miǎn)長時間打(dǎ)開蓋(gài)子。底物(wù)B對光敏感，避免(miǎn)長(cháng)時(shí)間(jiān)暴露於光下。避免用手接(jiē)觸，有毒(dú)。實(shí)驗(yàn)完成後(hòu)應(yīng)立即讀(dú)取OD值。
8． 加入試劑(jì)的順(shùn)序應一致(zhì)，以保證(zhèng)所有(yǒu)反(fǎn)應(yīng)板孔溫育的時間一(yī)樣(yàng)。
9． 按照(zhào)說明(míng)書中標明(míng)的時間(jiān)，加(jiā)液的(dí)量(liáng)及順序(xù)進行溫(wēn)育(yù)操作(zuò)。

樣品收集(jí)，處理及(jí)保存方(fāng)法
1， 血清-----操(cāo)作過程中避免(miǎn)任何細胞(bāo)刺激。使用不(bù)含熱(rè)原和內(nèi)毒素的(dí)試管。收(shōu)集血液後，1000×g離心10分(fēn)鐘(zhōng)將血(xiě)清(qīng)和紅細(xì)胞迅速(sù)小心(xīn)地分離。
2， 血(xiě)漿(jiāng)-----EDTA，檸(níng)檬酸鹽(yán)，肝素血漿可用於檢測。1000×g離(lí)心30分(fēn)鐘去(qù)除顆(kē)粒。
3， 細胞(bāo)上(shàng)清(qīng)液---1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘去(qù)除顆粒和(hé)聚(jù)合物。
4， 保存(cún)------如果樣品不立即(jí)使用(yòng)，應將其分(fēn)成(chéng)小部分-70 ℃保存，避(bì)免反(fǎn)復冷(lěng)凍。盡(jìn)可(kě)能(néng)的不(bù)要使用(yòng)溶(róng)血或(huò)高血(xiě)脂血。如果血清中大量(liáng)顆粒(lì)，檢測前先(xiān)離(lí)心或過(guò)濾。不(bù)要在(zài)37℃或更高的(dí)溫度(dù)加熱(rè)解凍。應在(zài)室溫下解(jiě)凍(dòng)並確(què)保樣品(pǐn)均(jūn)匀地充分(fēn)解(jiě)凍。

試(shì)劑的(dí)準備(bèi)
1． 標準品：標準(zhǔn)品的(dí)係(xì)列稀(xī)釋(shì)應(yīng)在實(shí)驗時準(zhǔn)備(bèi)，不能(néng)儲存。稀釋前將(jiāng)標(biāo)準品(pǐn)振蕩混匀。稀釋比(bǐ)例按(àn)下表中進(jìn)行：
400 pmol/L （6號標(biāo)準品(pǐn)） 原(yuán)倍濃(nóng)度(dù)不(bù)用(yòng)稀(xī)釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入50ul。
200 pmol/L （5號標(biāo)準品） 100ul的原倍標(biāo)準品加入100ul的(dí)標(biāo)準品稀釋液(yè)
100 pmol/L （4號標準(zhǔn)品） 100ul的5號標準(zhǔn)品加入100ul的標準品稀釋(shì)液
50 pmol/L （3號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)4號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀釋液
25 pmol/L （2號標準(zhǔn)品） 100ul的3號標準品加入(rù)100ul的標準品稀(xī)釋液
12.5 pmol/L （1號標準品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準品加(jiā)入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋液
0 pmol/L （空白對照(zhào)） 原(yuán)始濃度(dù)不用(yòng)稀釋直接加入50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩衝液（50×）的(dí)稀(xī)釋(shì)：蒸餾水50倍(bèi)稀(xī)釋(shì)。

操(cāo)作步驟
1． 使(shǐ)用(yòng)前，將(jiāng)所有試劑充(chōng)分(fēn)混匀。不(bù)要使液(yè)體產生大量(liáng)的泡(pào)沫(mò)，以免(miǎn)加(jiā)樣(yàng)時(shí)加入大量(liáng)的氣(qì)泡，產生加樣上的(dí)誤(wù)差。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品(pǐn)數(shù)量加上(shàng)標準(zhǔn)品的(dí)數(shù)量(liáng)決定所需的板(bǎn)條數。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空(kōng)白孔(kǒng)建議(yì)做(zuò)復孔。每(měi)個樣(yàng)品根據(jù)自己(jǐ)的數(shù)量來定，能(néng)使(shǐ)用復孔的盡(jìn)量(liáng)做復孔。
3． 加入(rù)稀釋好(hǎo)後(hòu)的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)50ul於反(fǎn)應孔(kǒng)，加入待測樣品(pǐn)50ul於反應孔內。立即加(jiā)入50ul的生(shēng)物素標(biāo)記(jì)的(dí)抗體(tǐ)。蓋(gài)上膜(mó)板，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀，37℃溫育(yù)1小(xiǎo)時。
4． 甩(shuǎi)去(qù)孔內液(yè)體，每孔加滿洗(xǐ)滌液，振(zhèn)蕩30秒，甩去(qù)洗(xǐ)滌液(yè)，用吸水(shuǐ)紙拍幹。重(zhòng)復(fù)此操(cāo)作(zuò)3次。如果(guǒ)用洗板(bǎn)機(jī)洗滌，洗(xǐ)滌次數增(zēng)加一次。
5． 每孔加入80ul的親(qīn)和(hé)鏈酶(méi)素(sù)-HRP，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀，37℃溫育(yù)30分(fēn)鐘。
6． 甩去(qù)孔(kǒng)內液體，每孔加滿洗滌(dí)液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗(xǐ)滌液(yè)，用吸水紙拍幹。重復此(cǐ)操作(zuò)3次。如(rú)果用洗板機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次數增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔加入底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫育(yù)10分(fēn)鐘(zhōng)。避免光(guāng)照(zhào)。
8． 取(qǔ)出(chū)酶標(biāo)板，迅速(sù)加入50ul終(zhōng)止液，加入終止(zhǐ)液後(hòu)應(yīng)立(lì)即(jí)測(cè)定結果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波(bō)長(cháng)處測(cè)定各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值。

建議(yì)使(shǐ)用(yòng)的(dí)實驗方案
 標準品(pǐn)濃(nóng)度（pmol/L） 
A 400 400 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
B 200 200 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
C 100 100 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品
D 50 50 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
E 25 25 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
F 12.5 12.5 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品
G 0 0 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
H 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品

局限(xiàn)
6號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)以(yǐ)上(shàng)的結(jié)果(guǒ)為非綫性(xìng)的，根據(jù)此(cǐ)標(biāo)準(zhǔn)曲綫無法得到(dào)的結果。

試劑(jì)盒性(xìng)能
1. 靈敏(mǐn)度：zui小(xiǎo)的(dí)檢測(cè)濃度小於(yú)1號標準(zhǔn)品。稀釋(shì)度(dù)的(dí)綫性(xìng)。樣(yàng)品綫性回歸(guī)與(yǔ)預(yù)期濃(nóng)度(dù)相關(guān)係數R值為0.990。
2. 特異(yì)性(xìng)：不與(yǔ)其(qí)它(tā)細胞因(yīn)子反應(yīng)。
3. 重(zhòng)復性：板(bǎn)內，板(bǎn)間變異(yì)係(xì)數均(jūn)小於10%。

結 果(guǒ) 判(pàn) 斷 與 分(fēn) 析
1，儀器值：於波長(cháng)450nm的(dí)酶標儀上讀取各(gè)孔的OD值

2，以吸(xī)光(guāng)度OD值(zhí)為縱(zòng)坐(zuò)標（Y），相(xiāng)應(yīng)的TGF-β1標準(zhǔn)品(pǐn)濃度為(wéi)橫坐標（X），做得相應的(dí)曲綫，樣(yàng)品的(dí)TGF-β1含量可(kě)根(gēn)據其OD值(zhí)由(yóu)標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)換算(suàn)出相應的濃(nóng)度。

3，檢測值(zhí)範(fàn)圍：0-400pmol/L

4，敏感度(dù)： 1.0 pmol/L