大鼠(shǔ) （Rat） 遊(yóu)離(lí)脂肪酸(suān)（FFA）ELISA 檢測試(shì)劑(jì)盒
本(běn)試劑僅供(gōng)研究使用(yòng) 標本：血清(qīng)或血漿

試(shì)驗原理：
FFA試劑盒(hé)是固相(xiāng)夾心法酶聯免疫吸附實驗(yàn)（ELISA）.已知FFA濃(nóng)度的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)，未知(zhī)濃度的樣品加(jiā)入(rù)微孔(kǒng)酶標板內進行檢(jiǎn)測。先將FFA和生物(wù)素(sù)標記(jì)的(dí)抗體同時溫育(yù)。洗滌(dí)後(hòu)，加(jiā)入親和素標記(jì)過(guò)的HRP。再經(jīng)過溫(wēn)育(yù)和(hé)洗(xǐ)滌，去除未結合(hé)的酶(méi)結合(hé)物，然(rán)後(hòu)加入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B，和(hé)酶(méi)結(jié)合物同時作用。產生顏色。顏(yán)色的深(shēn)淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品中(zhōng)FFA的(dí)濃度呈比(bǐ)例關(guān)係(xì)。

試劑盒內容(róng)及其配製
試(shì)劑盒(hé)成(chéng)份（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置 48孔配置 配製(zhì)
96/48人份酶標板 1塊板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊板（48T） 即用型(xíng)
塑(sù)料(liào)膜板(bǎn)蓋 1塊 半(bàn)塊(kuài) 即用(yòng)型
標準(zhǔn)品：800umol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀(xī)稀(xī)
空(kōng)白對(duì)照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
標準品稀釋緩衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
生物(wù)素(sù)標記的抗FFA抗體 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗滌緩衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書進(jìn)行(háng)稀釋(shì)
底(dǐ)物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
底物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
終止(zhǐ)液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自(zì)備材(cái)料
1． 蒸(zhēng)餾(liù)水。
2． 加(jiā)樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及磁力(lì)攪(jiǎo)拌(bàn)器(qì)等(děng)。

安全(quán)性(xìng)
1． 避(bì)免直(zhí)接(jiē)接(jiē)觸終止液(yè)和底(dǐ)物(wù)A，B。一(yī)旦接觸(chù)到這(zhè)些液體，請(qǐng)盡快(kuài)用水衝(chōng)洗。
2． 實(shí)驗中不要(yào)吃喝，抽煙(yān)或(huò)使(shǐ)用化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要用(yòng)嘴吸(xī)取(qǔ)試劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的(dí)任何成份。

操(cāo)作注意事項
1． 試劑(jì)應(yīng)按標簽說明書儲存(cún)，使用前(qián)恢復(fù)到(dào)室(shì)溫。稀稀(xī)過後的標準(zhǔn)品(pǐn)應(yīng)丟棄(qì)，不可(kě)保存。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條(tiáo)應(yīng)立即(jí)放回包裝袋中(zhōng)，密(mì)封(fēng)保存，以(yǐ)免(miǎn)變(biàn)質。
3． 不(bù)用(yòng)的其它試(shì)劑應包(bāo)裝(zhuāng)好或蓋好(hǎo)。不(bù)同批(pī)號(hào)的試劑不要混(hùn)用(yòng)。保質(zhì)前使(shǐ)用(yòng)。
4． 使(shǐ)用一(yī)次(cì)性的吸(xī)頭以免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染，吸取(qǔ)終止(zhǐ)液(yè)和(hé)底(dǐ)物(wù)A，B液時(shí)，避(bì)免使(shǐ)用帶(dài)金屬部(bù)分的加(jiā)樣器。
5． 使用幹淨(jìng)的(dí)塑料容(róng)器配(pèi)置洗滌液(yè)。使(shǐ)用前充(chōng)分混(hùn)匀試劑盒裏的各(gè)種成份(fèn)及(jí)樣品(pǐn)。
6． 洗滌酶標板時(shí)應充分(fēn)拍幹，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙直接放入酶(méi)標反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物(wù)A應(yīng)揮(huī)發，避(bì)免(miǎn)長(cháng)時(shí)間(jiān)打(dǎ)開(kāi)蓋(gài)子。底物(wù)B對光敏感，避(bì)免長時間(jiān)暴露於光下(xià)。避(bì)免用手(shǒu)接觸(chù)，有毒。實驗完成後應立即讀(dú)取OD值。
8． 加(jiā)入(rù)試劑(jì)的順序(xù)應一(yī)致(zhì)，以保證所(suǒ)有反(fǎn)應板(bǎn)孔(kǒng)溫育的(dí)時間(jiān)一樣。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標明(míng)的(dí)時(shí)間(jiān)，加液(yè)的量及(jí)順(shùn)序(xù)進行溫(wēn)育(yù)操作。

樣(yàng)品(pǐn)收(shōu)集(jí)，處理(lǐ)及保存方(fāng)法(fǎ)
1， 血清-----操作過(guò)程中(zhōng)避免任何細(xì)胞刺激。使用(yòng)不含(hán)熱原(yuán)和(hé)內(nèi)毒素(sù)的試(shì)管。收集(jí)血液後，1000×g離心(xīn)10分鐘(zhōng)將(jiāng)血清和紅細(xì)胞迅速小(xiǎo)心地分離。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸(níng)檬(méng)酸鹽(yán)，肝素血漿可用(yòng)於檢測。1000×g離心30分鐘去(qù)除顆粒(lì)。
3， 細胞上清液---1000×g離心(xīn)10分鐘去除顆粒(lì)和聚合物。
4， 保(bǎo)存------如(rú)果樣品不立即使用，應將(jiāng)其(qí)分成小部(bù)分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免反(fǎn)復冷(lěng)凍(dòng)。盡(jìn)可能(néng)的(dí)不要(yào)使用(yòng)溶血(xiě)或高血(xiě)脂(zhī)血(xiě)。如(rú)果(guǒ)血(xiě)清中大量顆(kē)粒(lì)，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾(lǜ)。不(bù)要在37℃或(huò)更高(gāo)的溫度加熱解(jiě)凍(dòng)。應(yīng)在室溫下(xià)解凍並確(què)保樣品均匀(yún)地充(chōng)分解凍。

試(shì)劑(jì)的(dí)準備(bèi)
1． 標準品(pǐn)：標準品的係(xì)列稀(xī)釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備，不(bù)能儲存。稀(xī)釋(shì)前將標準(zhǔn)品振(zhèn)蕩(dàng)混匀。稀釋比(bǐ)例按下表(biǎo)中(zhōng)進行(háng)：
800 umol/L （6號標(biāo)準品） 原倍濃(nóng)度不用(yòng)稀釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入50ul。
400 umol/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)原(yuán)倍標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標準品稀釋(shì)液
200 umol/L （4號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的5號標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液
100 umol/L （3號(hào)標準品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)
50 umol/L （2號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的3號(hào)標準品(pǐn)加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
25 umol/L （1號標準品(pǐn)） 100ul的2號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
0 umol/L （空白(bái)對照(zhào)） 原始濃(nóng)度(dù)不用(yòng)稀(xī)釋直(zhí)接加入(rù)50ul。

2． 洗滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)（50×）的(dí)稀釋：蒸(zhēng)餾(liù)水50倍(bèi)稀(xī)釋。

操(cāo)作步驟
1． 使(shǐ)用前，將所(suǒ)有試(shì)劑(jì)充(chōng)分(fēn)混(hùn)匀。不要使液(yè)體(tǐ)產生(shēng)大量(liáng)的(dí)泡沫(mò)，以(yǐ)免加樣時加入(rù)大(dà)量的氣泡(pào)，產生加樣上(shàng)的誤(wù)差。
2． 根據待測(cè)樣品(pǐn)數量(liáng)加上標準品的數量(liáng)決(jué)定(dìng)所需的(dí)板(bǎn)條(tiáo)數。每(měi)個(gè)標準品和空(kōng)白孔(kǒng)建(jiàn)議(yì)做復孔。每個樣品根(gēn)據自己的數量來定(dìng)，能(néng)使用復(fù)孔的盡量(liáng)做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入稀釋(shì)好後(hòu)的標(biāo)準品(pǐn)50ul於反應孔(kǒng)，加入(rù)待測樣(yàng)品50ul於反應孔內。立(lì)即(jí)加入50ul的(dí)生物素(sù)標記(jì)的(dí)抗(kàng)體。蓋上(shàng)膜(mó)板，輕輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫育1小(xiǎo)時(shí)。
4． 甩去孔內液體(tǐ)，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液(yè)，振蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗滌液，用吸(xī)水紙拍(pāi)幹(gān)。重復此操作(zuò)3次。如(rú)果用洗(xǐ)板(bǎn)機洗滌(dí)，洗滌(dí)次(cì)數(shù)增加(jiā)一次。
5． 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)80ul的(dí)親和鏈酶(méi)素-HRP，輕(qīng)輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀，37℃溫育(yù)30分鐘。
6． 甩去(qù)孔(kǒng)內液體，每孔加(jiā)滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè)，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸水(shuǐ)紙拍幹(gān)。重復(fù)此操作(zuò)3次。如(rú)果用洗板(bǎn)機(jī)洗(xǐ)滌，洗(xǐ)滌次數增(zēng)加一(yī)次(cì)。
7． 每(měi)孔加入底物(wù)A，B各(gè)50ul，輕(qīng)輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育(yù)10分鐘。避(bì)免光(guāng)照。
8． 取出酶(méi)標板(bǎn)，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止(zhǐ)液，加(jiā)入終(zhōng)止(zhǐ)液後應立即(jí)測定(dìng)結(jié)果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長處(chǔ)測定(dìng)各(gè)孔的OD值。

建(jiàn)議使用(yòng)的實(shí)驗方案(àn)
 標(biāo)準品(pǐn)濃(nóng)度(dù)（umol/L） 
A 800 800 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 400 400 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn)
C 200 200 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
D 100 100 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
E 50 50 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
F 25 25 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
G 0 0 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
H 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品

局(jú)限(xiàn)
6號標準(zhǔn)品以上的(dí)結果為(wéi)非(fēi)綫(xiàn)性的，根據(jù)此標準曲綫(xiàn)無法得到的(dí)結(jié)果。

試(shì)劑盒(hé)性能
1. 靈(líng)敏度(dù)：zui小的檢測(cè)濃(nóng)度小(xiǎo)於1號標準品。稀釋(shì)度的綫性(xìng)。樣品(pǐn)綫(xiàn)性回歸(guī)與(yǔ)預期濃度相(xiāng)關係數R值為0.990。
2. 特(tè)異性：不與其(qí)它(tā)細胞因(yīn)子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復(fù)性(xìng)：板(bǎn)內，板(bǎn)間變異係數均小於(yú)10%。

結(jié) 果 判 斷(duàn) 與 分(fēn) 析
1，儀器(qì)值：於波長450nm的酶標(biāo)儀上讀(dú)取各(gè)孔(kǒng)的OD值(zhí)

2，以吸光度OD值為縱(zòng)坐標(biāo)（Y），相應的(dí)FFA標(biāo)準品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐標(biāo)（X），做得相應的曲(qū)綫，樣品的FFA含(hán)量可(kě)根據(jù)其OD值由(yóu)標準曲(qū)綫換(huàn)算(suàn)出相應的(dí)濃(nóng)度。

3，檢(jiǎn)測(cè)值範(fàn)圍：0-800umol/L

4，敏(mǐn)感(gǎn)度： 1.0 umol/L