大鼠(shǔ) （Rat） 五-羥色胺(àn)（5-HT）ELISA 檢測試劑(jì)盒
本(běn)試(shì)劑(jì)僅供研究使(shǐ)用 標(biāo)本(běn)：血清(qīng)或(huò)血(xiě)漿(jiāng)

試驗(yàn)原理：
5-HT試劑盒(hé)是固相(xiāng)夾心法酶聯(lián)免(miǎn)疫(yì)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知5-HT濃(nóng)度的標(biāo)準品(pǐn)，未(wèi)知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣品加入(rù)微(wēi)孔(kǒng)酶標板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將(jiāng)5-HT和生物(wù)素標(biāo)記(jì)的(dí)抗體(tǐ)同時(shí)溫(wēn)育。洗滌後(hòu)，加(jiā)入親和素(sù)標記過(guò)的HRP。再經(jīng)過溫育和洗(xǐ)滌(dí)，去除未(wèi)結(jié)合(hé)的(dí)酶結(jié)合(hé)物，然後(hòu)加入底(dǐ)物A，B，和酶(méi)結(jié)合物(wù)同時作用(yòng)。產生顏(yán)色。顏色的深淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品中(zhōng)5-HT的濃度(dù)呈比(bǐ)例關係(xì)。

試劑盒內容及其配(pèi)製
試劑盒(hé)成份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配(pèi)置 48孔(kǒng)配置 配(pèi)製
96/48人份酶標(biāo)板 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半塊板（48T） 即(jí)用型(xíng)
塑(sù)料(liào)膜(mó)板(bǎn)蓋 1塊 半塊(kuài) 即(jí)用型
標(biāo)準品：40umol/L 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)緩(huǎn)衝液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用(yòng)型
生(shēng)物素(sù)標(biāo)記(jì)的(dí)抗5-HT抗體(tǐ) 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
親和鏈酶(méi)素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗(xǐ)滌(dí)緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說明書進行稀釋
底物(wù)A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
終止(zhǐ)液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型

自(zì)備材(cái)料
1． 蒸餾水。
2． 加樣(yàng)器：5ul，10ul，50ul，100ul，200ul，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁(cí)力(lì)攪拌器等。

安全(quán)性(xìng)
1． 避免(miǎn)直(zhí)接接觸終止(zhǐ)液(yè)和底物A，B。一(yī)旦接(jiē)觸(chù)到(dào)這些液體(tǐ)，請盡快用水衝洗(xǐ)。
2． 實驗(yàn)中不要吃喝，抽煙(yān)或使(shǐ)用(yòng)化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要用嘴吸取(qǔ)試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的任何成份。

操作(zuò)注(zhù)意(yì)事項
1． 試劑(jì)應按標簽說(shuō)明(míng)書儲(chǔ)存(cún)，使(shǐ)用(yòng)前恢(huī)復到室(shì)溫。稀稀過後(hòu)的標準(zhǔn)品應丟(diū)棄，不(bù)可保(bǎo)存。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不用的(dí)板條應(yīng)立即放回(huí)包(bāo)裝袋中(zhōng)，密(mì)封保(bǎo)存，以免變(biàn)質。
3． 不用(yòng)的其(qí)它(tā)試(shì)劑應包(bāo)裝好(hǎo)或蓋好(hǎo)。不同批(pī)號(hào)的(dí)試劑不要混(hùn)用。保(bǎo)質(zhì)前(qián)使用。
4． 使用一(yī)次(cì)性的吸頭(tóu)以(yǐ)免(miǎn)交叉汙(wū)染，吸取終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)和(hé)底物A，B液時，避免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)帶金屬(shǔ)部分的加樣器。
5． 使用(yòng)幹淨(jìng)的塑料(liào)容(róng)器配置洗(xǐ)滌液。使用前(qián)充分(fēn)混匀試劑盒裏(lǐ)的各(gè)種成份及樣品(pǐn)。
6． 洗滌酶標板時應充(chōng)分拍(pāi)幹，不(bù)要將吸(xī)水紙直接放(fàng)入(rù)酶標(biāo)反(fǎn)應孔(kǒng)中(zhōng)吸水。
7． 底(dǐ)物A應揮(huī)發，避免(miǎn)長時間打(dǎ)開蓋(gài)子。底(dǐ)物B對光(guāng)敏感，避(bì)免(miǎn)長(cháng)時(shí)間暴露於(yú)光(guāng)下(xià)。避(bì)免(miǎn)用手接(jiē)觸，有(yǒu)毒(dú)。實驗完(wán)成後(hòu)應立(lì)即讀(dú)取(qǔ)OD值。
8． 加(jiā)入試劑的(dí)順(shùn)序應(yīng)一(yī)致，以保證所有反(fǎn)應板孔溫(wēn)育的時間(jiān)一(yī)樣。
9． 按(àn)照(zhào)說(shuō)明(míng)書中標(biāo)明(míng)的時(shí)間，加液(yè)的(dí)量及順(shùn)序進行溫(wēn)育(yù)操作。

樣品收集，處(chǔ)理及保存(cún)方法(fǎ)
1， 血清-----操(cāo)作(zuò)過(guò)程中避(bì)免任何細(xì)胞刺(cì)激。使用不含(hán)熱(rè)原(yuán)和內毒素(sù)的試管(guǎn)。收(shōu)集血液(yè)後(hòu)，1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘將(jiāng)血清(qīng)和(hé)紅(hóng)細胞迅(xùn)速(sù)小(xiǎo)心地分(fēn)離。
2， 血漿-----EDTA，檸檬(méng)酸(suān)鹽(yán)，肝素血漿可(kě)用於檢測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒(lì)。
3， 細(xì)胞(bāo)上(shàng)清液(yè)---1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)去除顆(kē)粒和聚合物。
4， 保存------如果樣(yàng)品不(bù)立即(jí)使(shǐ)用，應將其(qí)分成小部分-70 ℃保存(cún)，避免反(fǎn)復(fù)冷凍。盡可(kě)能的不要(yào)使用溶血(xiě)或高血脂血。如(rú)果血清中大量(liáng)顆粒，檢測前先離心或(huò)過(guò)濾(lǜ)。不要(yào)在37℃或更(gēng)高(gāo)的溫度加熱解(jiě)凍。應在(zài)室(shì)溫下解(jiě)凍並確保樣(yàng)品(pǐn)均(jūn)匀地充分(fēn)解凍(dòng)。

試劑的(dí)準(zhǔn)備(bèi)
1． 標準(zhǔn)品：標(biāo)準品(pǐn)的係(xì)列稀(xī)釋(shì)應(yīng)在實(shí)驗時(shí)準備，不能(néng)儲存(cún)。稀(xī)釋(shì)前(qián)將標準(zhǔn)品(pǐn)振蕩混匀。稀釋比例按下表(biǎo)中(zhōng)進行(háng)：
40 umol/L （6號標準(zhǔn)品(pǐn)） 原倍濃度(dù)不用(yòng)稀釋直接加入50ul。
20 umol/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的原(yuán)倍(bèi)標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液
10 umol/L （4號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的5號(hào)標(biāo)準品加入(rù)100ul的標準品稀釋液
5.0 umol/L （3號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)4號(hào)標準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標(biāo)準品(pǐn)稀釋液
2.5 umol/L （2號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)
1.25 umol/L （1號標準品(pǐn)） 100ul的2號標準品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
0 umol/L （空(kōng)白(bái)對(duì)照） 原(yuán)始濃度不用稀(xī)釋直接加入50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩衝液(yè)（50×）的(dí)稀釋(shì)：蒸餾(liù)水(shuǐ)50倍(bèi)稀釋。

操作步驟
1． 使用前(qián)，將所有試劑充分(fēn)混匀。不(bù)要(yào)使液體產生(shēng)大(dà)量的(dí)泡沫，以免加(jiā)樣時加入大(dà)量的(dí)氣(qì)泡，產生加(jiā)樣上(shàng)的(dí)誤(wù)差。
2． 根據(jù)待(dài)測樣品(pǐn)數(shù)量(liáng)加(jiā)上標準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需(xū)的(dí)板條(tiáo)數(shù)。每個標準品(pǐn)和空白孔(kǒng)建議(yì)做(zuò)復孔。每(měi)個(gè)樣品根(gēn)據自己的(dí)數量(liáng)來(lái)定，能(néng)使用(yòng)復孔的(dí)盡(jìn)量(liáng)做(zuò)復孔。
3． 加(jiā)入稀釋(shì)好(hǎo)後的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)，加入待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)50ul於反(fǎn)應孔(kǒng)內。立(lì)即(jí)加入(rù)50ul的生(shēng)物(wù)素(sù)標記的(dí)抗(kàng)體。蓋(gài)上膜板(bǎn)，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育(yù)1小時(shí)。
4． 甩(shuǎi)去(qù)孔(kǒng)內液體(tǐ)，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩30秒，甩去洗滌液(yè)，用吸水(shuǐ)紙拍幹。重復(fù)此操作(zuò)3次。如果(guǒ)用洗(xǐ)板(bǎn)機洗滌(dí)，洗滌(dí)次數(shù)增(zēng)加一次。
5． 每孔加入80ul的親和(hé)鏈酶(méi)素(sù)-HRP，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育(yù)30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗滌(dí)液，用(yòng)吸水紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復此操作3次。如(rú)果用(yòng)洗(xǐ)板(bǎn)機洗滌(dí)，洗滌(dí)次數增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔加入(rù)底物A，B各50ul，輕輕振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫育(yù)10分(fēn)鐘。避免光(guāng)照。
8． 取出酶(méi)標(biāo)板，迅速加入(rù)50ul終(zhōng)止液，加(jiā)入終(zhōng)止(zhǐ)液後應(yīng)立即測(cè)定結果。
9． 在450nm波長(cháng)處測(cè)定各孔的(dí)OD值。

建(jiàn)議(yì)使(shǐ)用的(dí)實(shí)驗(yàn)方(fāng)案
 標(biāo)準品濃(nóng)度(dù)（umol/L） 
A 40 40 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
B 20 20 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
C 10 10 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品
D 5.0 5.0 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
E 2.5 2.5 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品
F 1.25 1.25 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
G 0 0 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
H 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品

局限(xiàn)
6號標準品(pǐn)以上(shàng)的結果為非綫性的，根(gēn)據(jù)此標準(zhǔn)曲(qū)綫無法(fǎ)得到的結果。

試劑(jì)盒性能
1. 靈敏度：zui小(xiǎo)的檢測(cè)濃度小於(yú)1號標(biāo)準品。稀(xī)釋度的(dí)綫(xiàn)性(xìng)。樣品(pǐn)綫性回(huí)歸(guī)與預(yù)期濃(nóng)度相(xiāng)關係數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特異(yì)性：不與(yǔ)其(qí)它細胞(bāo)因子(zǐ)反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)，板(bǎn)間(jiān)變異係(xì)數(shù)均小(xiǎo)於(yú)10%。

結 果 判 斷 與 分(fēn) 析
1，儀器值：於波長450nm的酶(méi)標儀上讀取(qǔ)各孔的(dí)OD值

2，以吸光(guāng)度OD值(zhí)為(wéi)縱坐標（Y），相應的(dí)5-HT標準品濃度為(wéi)橫坐標（X），做得相(xiāng)應(yīng)的(dí)曲綫(xiàn)，樣品(pǐn)的(dí)5-HT含(hán)量(liáng)可根據其OD值(zhí)由標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)換算出(chū)相(xiāng)應的濃(nóng)度(dù)。

3，檢測(cè)值(zhí)範圍(wéi)：0-40umol/L

4，敏(mǐn)感度(dù)： 0.1 umol/L