大鼠 （Rat） 尾加壓(yā)素(sù)II（Urotensin II）ELISA 檢(jiǎn)測試劑盒
本試劑僅供(gōng)研究使用 標(biāo)本：血(xiě)清或血(xiě)漿(jiāng)

試(shì)驗(yàn)原(yuán)理：
Urotensin II試劑盒是(shì)固相夾(jiā)心法酶聯(lián)免疫(yì)吸附(fù)實驗（ELISA）.已知Urotensin II濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)，未知濃(nóng)度的樣(yàng)品加入微孔酶標板(bǎn)內(nèi)進行檢測
。先(xiān)將(jiāng)Urotensin II和(hé)生(shēng)物(wù)素標記(jì)的(dí)抗(kàng)體(tǐ)同(tóng)時溫(wēn)育(yù)
。洗(xǐ)滌(dí)後(hòu)，加入(rù)親(qīn)和素標記(jì)過(guò)的(dí)HRP
。再經(jīng)過(guò)溫(wēn)育和(hé)洗滌，去除未結(jié)合的酶(méi)結合物，然(rán)後加(jiā)入底物A，B，和(hé)酶結(jié)合(hé)物同時(shí)作用
。產(chǎn)生(shēng)顏色(sè)
。顏(yán)色的(dí)深(shēn)淺和樣品(pǐn)中Urotensin II的濃(nóng)度(dù)呈比例關(guān)係(xì)
。

試(shì)劑盒(hé)內(nèi)容及其配(pèi)製(zhì)
試(shì)劑(jì)盒(hé)成(chéng)份（2-8℃保存(cún)） 96孔配(pèi)置 48孔配置 配製
96/48人份酶(méi)標板 1塊板（96T） 半塊板(bǎn)（48T） 即用型
塑料(liào)膜(mó)板蓋(gài) 1塊 半(bàn)塊 即(jí)用型
標準品：240pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說明書(shū)進行稀(xī)稀(xī)
空(kōng)白對照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型(xíng)
生物素標(biāo)記(jì)的抗Urotensin II抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
親(qīn)和鏈酶素-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用型
洗滌(dí)緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書(shū)進行稀(xī)釋
底(dǐ)物A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終(zhōng)止(zhǐ)液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾(liù)水
。
2． 加(jiā)樣(yàng)器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul
。
3． 振(zhèn)蕩(dàng)器及磁力攪(jiǎo)拌器(qì)等
。

安(ān)全(quán)性(xìng)
1． 避(bì)免(miǎn)直(zhí)接接觸(chù)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)和(hé)底(dǐ)物A，B
。一旦接觸到(dào)這些液體(tǐ)，請(qǐng)盡快用(yòng)水(shuǐ)衝洗
。
2． 實(shí)驗(yàn)中不(bù)要(yào)吃喝，抽(chōu)煙(yān)或使(shǐ)用(yòng)化妝品(pǐn)
。
3． 不(bù)要用(yòng)嘴吸取試(shì)劑(jì)盒裏(lǐ)的任何成(chéng)份(fèn)
。

操(cāo)作注意事(shì)項(xiàng)
1． 試(shì)劑(jì)應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使(shǐ)用前(qián)恢復到(dào)室溫
。稀(xī)稀過後的(dí)標準品(pǐn)應丟棄(qì)，不(bù)可(kě)保(bǎo)存(cún)
。
2． 實(shí)驗(yàn)中不(bù)用的板條應立(lì)即放(fàng)回(huí)包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)
。
3． 不用(yòng)的(dí)其它試劑應包裝(zhuāng)好(hǎo)或(huò)蓋好
。不同(tóng)批號的試(shì)劑不(bù)要混用
。保質(zhì)前(qián)使用
。
4． 使用一(yī)次性的(dí)吸頭以(yǐ)免(miǎn)交叉汙(wū)染，吸取終止(zhǐ)液(yè)和底(dǐ)物(wù)A，B液時，避免(miǎn)使(shǐ)用帶金(jīn)屬(shǔ)部分的加(jiā)樣(yàng)器
。
5． 使用幹(gān)淨的(dí)塑料(liào)容(róng)器配置洗滌(dí)液(yè)
。使(shǐ)用前(qián)充分混匀試劑盒(hé)裏的各種成份(fèn)及樣(yàng)品
。
6． 洗滌酶標板(bǎn)時應(yīng)充(chōng)分拍幹(gān)，不要將吸水(shuǐ)紙直(zhí)接放入(rù)酶(méi)標反(fǎn)應孔中吸(xī)水
。
7． 底物(wù)A應揮(huī)發，避(bì)免長(cháng)時間(jiān)打開(kāi)蓋子
。底物B對光敏感，避免長(cháng)時間(jiān)暴(bào)露於光下(xià)
。避(bì)免用(yòng)手接觸，有毒
。實(shí)驗完成(chéng)後(hòu)應立(lì)即(jí)讀取(qǔ)OD值
。
8． 加(jiā)入試(shì)劑的順序應一致(zhì)，以保證所有(yǒu)反應板孔(kǒng)溫(wēn)育(yù)的(dí)時間(jiān)一(yī)樣
。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中(zhōng)標明的時間(jiān)，加液的量(liáng)及順序進行(háng)溫育操作
。

樣(yàng)品(pǐn)收集，處理(lǐ)及(jí)保存(cún)方法(fǎ)
1， 血(xiě)清-----操(cāo)作(zuò)過(guò)程中(zhōng)避免任何細(xì)胞刺(cì)激
。使用(yòng)不含(hán)熱原和內毒素的試管
。收集血(xiě)液(yè)後(hòu)，1000×g離心10分(fēn)鐘將(jiāng)血清和(hé)紅(hóng)細胞(bāo)迅速小心地分離
。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸檬酸鹽(yán)，肝素(sù)血漿可(kě)用(yòng)於(yú)檢測
。1000×g離(lí)心(xīn)30分鐘去(qù)除顆粒(lì)
。
3， 細胞(bāo)上清(qīng)液(yè)---1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘去除顆粒(lì)和聚(jù)合物(wù)
。
4， 保存(cún)------如果樣(yàng)品(pǐn)不(bù)立(lì)即使(shǐ)用，應將其(qí)分成(chéng)小(xiǎo)部(bù)分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反(fǎn)復(fù)冷凍
。盡(jìn)可(kě)能(néng)的不要(yào)使用溶血或(huò)高血脂血(xiě)
。如果(guǒ)血(xiě)清中(zhōng)大量(liáng)顆粒，檢(jiǎn)測前(qián)先離心(xīn)或(huò)過濾
。不(bù)要(yào)在(zài)37℃或(huò)更高(gāo)的溫度加熱(rè)解(jiě)凍
。應在室溫下解凍(dòng)並確(què)保(bǎo)樣品均(jūn)匀地(dì)充(chōng)分解(jiě)凍
。

試(shì)劑的準備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準品(pǐn)的係(xì)列稀(xī)釋應在實驗時(shí)準備，不(bù)能儲(chǔ)存(cún)
。稀釋前(qián)將(jiāng)標(biāo)準品振蕩(dàng)混匀(yún)
。稀(xī)釋(shì)比例按下表中進(jìn)行(háng)：
240 pg/ml （6號標準(zhǔn)品） 原倍(bèi)濃(nóng)度(dù)不用(yòng)稀釋(shì)直接加入50ul
。
120 pg/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的(dí)原(yuán)倍標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
60 pg/ml （4號(hào)標準品） 100ul的(dí)5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀釋液(yè)
30 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準品） 100ul的4號(hào)標準品加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液(yè)
15 pg/ml （2號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標準品加(jiā)入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋液
7.5 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號(hào)標準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液
0 pg/ml （空(kōng)白(bái)對照） 原始濃度不用(yòng)稀釋直接加(jiā)入(rù)50ul
。

2． 洗(xǐ)滌緩(huǎn)衝液（50×）的(dí)稀釋：蒸餾(liù)水50倍稀(xī)釋(shì)
。

操(cāo)作(zuò)步(bù)驟
1． 使(shǐ)用(yòng)前(qián)，將(jiāng)所(suǒ)有試劑充分(fēn)混(hùn)匀
。不要使(shǐ)液體產生(shēng)大(dà)量的(dí)泡(pào)沫，以免加(jiā)樣時(shí)加入(rù)大(dà)量的氣泡(pào)，產(chǎn)生(shēng)加(jiā)樣上的誤(wù)差(chà)
。
2． 根據(jù)待測樣品(pǐn)數量(liáng)加(jiā)上標準(zhǔn)品的數量決定所需(xū)的板條(tiáo)數
。每(měi)個(gè)標準品和空(kōng)白孔(kǒng)建(jiàn)議(yì)做復(fù)孔
。每個樣(yàng)品根據(jù)自己(jǐ)的(dí)數量來定，能使(shǐ)用復(fù)孔(kǒng)的盡量做復孔
。
3． 加入稀(xī)釋(shì)好後(hòu)的標準品(pǐn)50ul於(yú)反應孔，加(jiā)入待測樣品50ul於反應孔內
。立即加入50ul的生(shēng)物(wù)素標記的抗體
。蓋(gài)上(shàng)膜(mó)板(bǎn)，輕輕(qīng)振蕩混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育1小時
。
4． 甩(shuǎi)去孔內液體，每孔加滿洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗滌液，用吸(xī)水紙(zhǐ)拍幹
。重復此操(cāo)作3次
。如果用洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌(dí)，洗滌(dí)次數(shù)增(zēng)加(jiā)一(yī)次
。
5． 每孔加入(rù)80ul的(dí)親和鏈酶素-HRP，輕輕(qīng)振蕩混匀(yún)，37℃溫(wēn)育30分鐘(zhōng)
。
6． 甩去(qù)孔(kǒng)內液體，每孔加(jiā)滿洗滌液，振蕩30秒(miǎo)，甩去洗滌液，用吸水(shuǐ)紙拍(pāi)幹
。重(zhòng)復此操作(zuò)3次(cì)
。如(rú)果(guǒ)用(yòng)洗板(bǎn)機洗滌，洗滌(dí)次數(shù)增(zēng)加(jiā)一(yī)次
。
7． 每(měi)孔加入底物A，B各50ul，輕輕振(zhèn)蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫育10分(fēn)鐘
。避免光照
。
8． 取出酶(méi)標板(bǎn)，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止液，加入(rù)終(zhōng)止液(yè)後應立(lì)即(jí)測(cè)定結(jié)果
。
9． 在450nm波(bō)長處測定各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值
。

建議使(shǐ)用(yòng)的(dí)實驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(dù)（pg/ml） 
A 240 240 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
B 120 120 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
C 60 60 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
D 30 30 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
E 15 15 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
F 7.5 7.5 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品
G 0 0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
H 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)

局限
6號(hào)標(biāo)準品以上的(dí)結果為非綫性(xìng)的，根據(jù)此標準(zhǔn)曲(qū)綫無(wú)法(fǎ)得到(dào)的結(jié)果
。

試(shì)劑盒(hé)性能
1. 靈(líng)敏(mǐn)度：zui小的檢(jiǎn)測濃度小(xiǎo)於(yú)1號(hào)標準品(pǐn)
。稀(xī)釋度(dù)的(dí)綫性
。樣(yàng)品綫(xiàn)性回歸與(yǔ)預(yù)期濃度(dù)相關(guān)係數R值為0.990
。
2. 特(tè)異性：不與(yǔ)其它(tā)細胞因子反(fǎn)應(yīng)
。
3. 重(zhòng)復(fù)性(xìng)：板內(nèi)，板間變(biàn)異係(xì)數均(jūn)小於(yú)10%
。

結(jié) 果(guǒ) 判(pàn) 斷(duàn) 與 分 析(xī)
1，儀器(qì)值：於波(bō)長450nm的酶(méi)標(biāo)儀(yí)上讀取各孔的(dí)OD值

2，以吸光(guāng)度(dù)OD值為縱(zòng)坐標（Y），相(xiāng)應(yīng)的Urotensin II標準品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐標(biāo)（X），做得(dé)相(xiāng)應(yīng)的(dí)曲綫(xiàn)，樣品的(dí)Urotensin II含量可(kě)根據其(qí)OD值由標(biāo)準曲綫(xiàn)換(huàn)算(suàn)出相應的(dí)濃(nóng)度(dù)
。

3，檢測值範圍(wéi)：0-240pg/ml

4，敏感度： 0.1 pg/ml