大(dà)鼠 （Rat） 糖原磷酸化酶(méi)同(tóng)工(gōng)酶BB（GP-BB）ELISA 檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)
本(běn)試劑(jì)僅供研(yán)究(jiū)使用(yòng) 標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原(yuán)理(lǐ)：
GP-BB試(shì)劑盒(hé)是固相(xiāng)夾心法酶聯免疫(yì)吸附(fù)實驗(yàn)（ELISA）.已知GP-BB濃(nóng)度(dù)的標準品，未(wèi)知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣品(pǐn)加(jiā)入(rù)微孔酶(méi)標板(bǎn)內進行檢測
。先(xiān)將GP-BB和生物素標記的(dí)抗體同(tóng)時溫(wēn)育(yù)
。洗滌(dí)後(hòu)，加入親和素標記過的HRP
。再經(jīng)過溫育和(hé)洗(xǐ)滌(dí)，去除(chú)未結合的(dí)酶結(jié)合物(wù)，然(rán)後(hòu)加入(rù)底(dǐ)物A，B，和(hé)酶結(jié)合物同(tóng)時作用
。產(chǎn)生(shēng)顏色
。顏色(sè)的深淺和樣(yàng)品中GP-BB的濃(nóng)度(dù)呈比例關(guān)係(xì)
。

試(shì)劑盒內容及其配製(zhì)
試劑(jì)盒成份（2-8℃保存(cún)） 96孔配置(zhì) 48孔(kǒng)配置 配製
96/48人(rén)份酶(méi)標板(bǎn) 1塊板（96T） 半塊(kuài)板（48T） 即用型
塑料(liào)膜板蓋 1塊 半塊 即(jí)用型(xíng)
標(biāo)準品：800pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對(duì)照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型
標(biāo)準品稀釋緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型(xíng)
生物素標(biāo)記的(dí)抗(kàng)GP-BB抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書進行稀(xī)釋
底(dǐ)物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型

自備材料
1． 蒸餾水(shuǐ)
。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul
。
3． 振蕩(dàng)器及磁力攪拌器(qì)等
。

安全性(xìng)
1． 避(bì)免(miǎn)直(zhí)接接觸終(zhōng)止(zhǐ)液和(hé)底物A，B
。一旦接(jiē)觸(chù)到這些(xiē)液體(tǐ)，請盡(jìn)快(kuài)用水衝(chōng)洗(xǐ)
。
2． 實(shí)驗中不(bù)要(yào)吃(chī)喝(hē)，抽煙(yān)或使用化妝(zhuāng)品
。
3． 不要用嘴吸(xī)取(qǔ)試劑盒裏的(dí)任何成份(fèn)
。

操作注意(yì)事項
1． 試(shì)劑(jì)應(yīng)按標簽說(shuō)明(míng)書儲存(cún)，使用(yòng)前(qián)恢復到(dào)室(shì)溫
。稀稀過後(hòu)的標準品應丟(diū)棄(qì)，不可保(bǎo)存(cún)
。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板(bǎn)條應立即(jí)放(fàng)回包裝袋(dài)中，密(mì)封(fēng)保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免變(biàn)質
。
3． 不用(yòng)的其(qí)它(tā)試劑應包裝好(hǎo)或(huò)蓋(gài)好(hǎo)
。不同批號的(dí)試劑(jì)不(bù)要(yào)混(hùn)用
。保質前(qián)使(shǐ)用(yòng)
。
4． 使(shǐ)用一次(cì)性(xìng)的吸(xī)頭(tóu)以免交(jiāo)叉汙染(rǎn)，吸取終止(zhǐ)液和(hé)底物(wù)A，B液時(shí)，避免(miǎn)使用帶金(jīn)屬部分的(dí)加樣器(qì)
。
5． 使用幹淨的塑(sù)料容(róng)器配置洗(xǐ)滌液(yè)
。使(shǐ)用前充(chōng)分(fēn)混匀(yún)試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的各種成份(fèn)及(jí)樣(yàng)品
。
6． 洗(xǐ)滌酶標板時(shí)應充分拍幹(gān)，不(bù)要將(jiāng)吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水
。
7． 底物(wù)A應揮發，避(bì)免長時間打開蓋(gài)子
。底物B對光敏感，避免(miǎn)長(cháng)時間暴露於(yú)光(guāng)下
。避(bì)免用手接(jiē)觸，有(yǒu)毒
。實驗完成後應立(lì)即讀(dú)取(qǔ)OD值
。
8． 加入試劑的(dí)順(shùn)序(xù)應一(yī)致(zhì)，以保證所有(yǒu)反(fǎn)應(yīng)板孔溫育的時間(jiān)一樣
。
9． 按照(zhào)說(shuō)明書(shū)中標明(míng)的(dí)時間(jiān)，加液的(dí)量及順序(xù)進行溫育(yù)操作
。

樣品(pǐn)收集(jí)，處理及保存方(fāng)法(fǎ)
1， 血(xiě)清(qīng)-----操(cāo)作過程(chéng)中避(bì)免任何細(xì)胞(bāo)刺(cì)激
。使(shǐ)用(yòng)不(bù)含(hán)熱原(yuán)和內毒素的(dí)試(shì)管(guǎn)
。收(shōu)集血(xiě)液後，1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘(zhōng)將(jiāng)血(xiě)清(qīng)和(hé)紅細(xì)胞迅速小心地(dì)分(fēn)離
。
2， 血(xiě)漿(jiāng)-----EDTA，檸檬酸(suān)鹽(yán)，肝(gān)素血漿(jiāng)可用於檢(jiǎn)測(cè)
。1000×g離心30分(fēn)鐘(zhōng)去(qù)除顆粒(lì)
。
3， 細胞上清液---1000×g離(lí)心(xīn)10分(fēn)鐘去(qù)除顆粒(lì)和聚(jù)合(hé)物(wù)
。
4， 保(bǎo)存------如果(guǒ)樣品(pǐn)不立即(jí)使用，應(yīng)將(jiāng)其分成小(xiǎo)部(bù)分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存，避免(miǎn)反(fǎn)復冷凍
。盡可能的不(bù)要(yào)使(shǐ)用溶(róng)血(xiě)或高(gāo)血脂血
。如(rú)果(guǒ)血清(qīng)中(zhōng)大量(liáng)顆粒，檢測(cè)前(qián)先離(lí)心或(huò)過濾
。不(bù)要在37℃或(huò)更(gēng)高的溫度加熱解凍
。應在室溫(wēn)下解凍(dòng)並確保(bǎo)樣品均匀(yún)地(dì)充分解(jiě)凍(dòng)
。

試(shì)劑的準備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標準(zhǔn)品的係列稀(xī)釋應在(zài)實驗時(shí)準備，不(bù)能儲存
。稀(xī)釋前將(jiāng)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)振蕩(dàng)混匀
。稀釋比例按下(xià)表中(zhōng)進(jìn)行(háng)：
800 pg/ml （6號標準(zhǔn)品） 原(yuán)倍濃度不用稀釋直接加(jiā)入50ul
。
400 pg/ml （5號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)原倍標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液
200 pg/ml （4號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)5號標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋液(yè)
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的(dí)4號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)
50 pg/ml （2號標(biāo)準品） 100ul的(dí)3號(hào)標準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液
25 pg/ml （1號標(biāo)準品） 100ul的2號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液
0 pg/ml （空(kōng)白對(duì)照） 原始(shǐ)濃度(dù)不用稀釋直(zhí)接(jiē)加(jiā)入50ul
。

2． 洗(xǐ)滌緩衝液（50×）的(dí)稀釋：蒸餾(liù)水(shuǐ)50倍(bèi)稀釋
。

操作(zuò)步(bù)驟
1． 使(shǐ)用前，將(jiāng)所有(yǒu)試劑(jì)充分混(hùn)匀
。不要使(shǐ)液體產生大量的泡沫(mò)，以免(miǎn)加(jiā)樣(yàng)時加(jiā)入大量(liáng)的氣泡，產生(shēng)加(jiā)樣上的(dí)誤(wù)差(chà)
。
2． 根(gēn)據待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)數(shù)量(liáng)加上標準品(pǐn)的數(shù)量(liáng)決定(dìng)所(suǒ)需(xū)的板條數
。每(měi)個標準(zhǔn)品和(hé)空(kōng)白(bái)孔建議做復孔
。每個樣(yàng)品(pǐn)根據(jù)自己(jǐ)的(dí)數(shù)量來(lái)定(dìng)，能(néng)使用復(fù)孔的盡量做(zuò)復(fù)孔
。
3． 加入(rù)稀(xī)釋(shì)好後(hòu)的標準(zhǔn)品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應孔(kǒng)，加入待(dài)測樣品(pǐn)50ul於反(fǎn)應孔(kǒng)內
。立(lì)即加入50ul的生物素標記的抗(kàng)體(tǐ)
。蓋上(shàng)膜(mó)板，輕輕(qīng)振蕩混匀(yún)，37℃溫育(yù)1小時
。
4． 甩去孔內(nèi)液(yè)體(tǐ)，每孔加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，振蕩30秒(miǎo)，甩去洗滌液，用吸水紙(zhǐ)拍(pāi)幹
。重(zhòng)復此操(cāo)作(zuò)3次
。如果用洗板(bǎn)機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌次數(shù)增加(jiā)一次(cì)
。
5． 每孔加入(rù)80ul的(dí)親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘
。
6． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液體(tǐ)，每(měi)孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗滌(dí)液，用(yòng)吸水紙拍(pāi)幹(gān)
。重(zhòng)復(fù)此(cǐ)操(cāo)作3次
。如果(guǒ)用洗板機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌(dí)次數(shù)增加一(yī)次
。
7． 每(měi)孔加(jiā)入底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕(qīng)輕振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)10分(fēn)鐘
。避免光照(zhào)
。
8． 取出(chū)酶(méi)標板，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止(zhǐ)液(yè)，加(jiā)入(rù)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)後應(yīng)立(lì)即(jí)測(cè)定(dìng)結果
。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處(chǔ)測定(dìng)各孔(kǒng)的(dí)OD值(zhí)
。

建(jiàn)議使用(yòng)的實(shí)驗方案
 標準品濃度（pg/ml） 
A 800 800 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn)
B 400 400 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn)
D 100 100 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品
E 50 50 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
F 25 25 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
H 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)

局限
6號標準品以上的結果為非綫性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)無法得(dé)到的結果
。

試劑盒性能(néng)
1. 靈敏度(dù)：zui小的(dí)檢測(cè)濃(nóng)度(dù)小(xiǎo)於(yú)1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
。稀釋度(dù)的綫(xiàn)性
。樣品(pǐn)綫(xiàn)性回歸與(yǔ)預期濃(nóng)度相關(guān)係(xì)數(shù)R值為0.990
。
2. 特(tè)異性(xìng)：不(bù)與其它(tā)細(xì)胞(bāo)因子(zǐ)反(fǎn)應
。
3. 重(zhòng)復(fù)性(xìng)：板內(nèi)，板(bǎn)間(jiān)變(biàn)異係數均小於(yú)10%
。

結 果 判 斷(duàn) 與(yǔ) 分(fēn) 析(xī)
1，儀器值(zhí)：於(yú)波長450nm的酶標儀上讀(dú)取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的OD值(zhí)

2，以吸光(guāng)度OD值(zhí)為縱坐標（Y），相(xiāng)應的GP-BB標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐(zuò)標（X），做(zuò)得相應的(dí)曲(qū)綫(xiàn)，樣(yàng)品的(dí)GP-BB含量(liáng)可根(gēn)據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲綫換(huàn)算出(chū)相(xiāng)應(yīng)的(dí)濃(nóng)度
。

3，檢(jiǎn)測(cè)值(zhí)範(fàn)圍：0-800pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml