大鼠(shǔ) （Rat） 糖(táng)皮質激(jī)素（Glucocorticoid）ELISA 檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)
本試劑僅供研究使用(yòng) 標本：血清(qīng)或血漿

試驗(yàn)原理：
Glucocorticoid試劑(jì)盒是固(gù)相夾心法酶(méi)聯免疫(yì)吸(xī)附(fù)實驗（ELISA）.已知Glucocorticoid濃度的標(biāo)準(zhǔn)品
，未知(zhī)濃度(dù)的(dí)樣品加(jiā)入(rù)微孔(kǒng)酶(méi)標板內進(jìn)行檢測(cè)。先(xiān)將Glucocorticoid和生(shēng)物(wù)素(sù)標記(jì)的(dí)抗體(tǐ)同(tóng)時(shí)溫(wēn)育。洗滌後，加入(rù)親和(hé)素標(biāo)記過(guò)的HRP。再(zài)經過溫育和洗滌，去除未結合的酶(méi)結(jié)合(hé)物，然後加入底(dǐ)物(wù)A
，B，和(hé)酶結合物同(tóng)時作(zuò)用。產生顏(yán)色。顏色的深淺(qiǎn)和樣品(pǐn)中(zhōng)Glucocorticoid的濃(nóng)度呈(chéng)比例(lì)關(guān)係。

試(shì)劑(jì)盒(hé)內(nèi)容及其(qí)配(pèi)製
試劑盒成(chéng)份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置(zhì) 48孔配置 配製
96/48人(rén)份酶標板(bǎn) 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊(kuài)板(bǎn)（48T） 即用型(xíng)
塑料膜板蓋(gài) 1塊 半塊(kuài) 即(jí)用(yòng)型
標準品：800ng/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說明書進行稀稀(xī)
空白(bái)對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用(yòng)型
標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)緩衝液 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
生(shēng)物素標記的(dí)抗Glucocorticoid抗體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即用型(xíng)
洗(xǐ)滌(dí)緩衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明(míng)書(shū)進行(háng)稀(xī)釋
底物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

自(zì)備材料(liào)
1． 蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)。
2． 加(jiā)樣器：5ul
，10ul
，50ul
，100ul
，200
，500ul
，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器(qì)及磁(cí)力(lì)攪拌(bàn)器等(děng)。

安(ān)全(quán)性
1． 避免直接(jiē)接(jiē)觸(chù)終止(zhǐ)液和底(dǐ)物(wù)A
，B。一(yī)旦(dàn)接(jiē)觸到這(zhè)些液體(tǐ)，請(qǐng)盡(jìn)快用水衝洗。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不(bù)要(yào)吃喝(hē)
，抽煙或(huò)使用化妝品(pǐn)。
3． 不要用嘴吸取(qǔ)試劑(jì)盒裏的(dí)任何成份。

操作(zuò)注(zhù)意(yì)事(shì)項
1． 試(shì)劑應按(àn)標(biāo)簽說明書儲存，使用(yòng)前恢(huī)復(fù)到室(shì)溫(wēn)。稀(xī)稀過(guò)後的(dí)標準品(pǐn)應(yīng)丟(diū)棄，不可(kě)保(bǎo)存。
2． 實驗(yàn)中不用(yòng)的板(bǎn)條(tiáo)應(yīng)立即放回包裝袋中(zhōng)，密封(fēng)保存(cún)，以免變質。
3． 不用(yòng)的其(qí)它試劑(jì)應(yīng)包裝(zhuāng)好(hǎo)或蓋(gài)好。不(bù)同(tóng)批號的試劑不要(yào)混用。保(bǎo)質前使用(yòng)。
4． 使(shǐ)用(yòng)一(yī)次性的(dí)吸(xī)頭(tóu)以免(miǎn)交(jiāo)叉汙(wū)染(rǎn)，吸(xī)取終止(zhǐ)液和底物(wù)A
，B液(yè)時，避免使(shǐ)用帶(dài)金屬部分(fēn)的加樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用幹(gān)淨的(dí)塑料容器配置(zhì)洗滌(dí)液(yè)。使用(yòng)前充(chōng)分(fēn)混匀試劑盒(hé)裏的各種(zhǒng)成(chéng)份及樣品。
6． 洗滌酶(méi)標板時應(yīng)充(chōng)分拍(pāi)幹(gān)，不(bù)要(yào)將(jiāng)吸水(shuǐ)紙直(zhí)接(jiē)放(fàng)入酶標反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng)吸水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物A應(yīng)揮發，避(bì)免長時間(jiān)打(dǎ)開(kāi)蓋子。底物B對光(guāng)敏感，避免長時間(jiān)暴(bào)露(lòu)於光下。避免用手接觸，有(yǒu)毒(dú)。實(shí)驗完(wán)成後應(yīng)立即讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試(shì)劑的順序(xù)應(yīng)一致(zhì)，以保證所有反應(yīng)板(bǎn)孔溫育(yù)的(dí)時間一樣(yàng)。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標明的(dí)時(shí)間(jiān)
，加液(yè)的(dí)量及順(shùn)序進(jìn)行溫育操作。

樣(yàng)品收集(jí)
，處(chǔ)理及保(bǎo)存方(fāng)法
1
， 血(xiě)清-----操作過程(chéng)中避(bì)免任何細(xì)胞刺激(jī)。使用不(bù)含(hán)熱原(yuán)和(hé)內毒(dú)素(sù)的(dí)試(shì)管。收集血液後(hòu)，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘(zhōng)將血清(qīng)和紅(hóng)細(xì)胞(bāo)迅速小心地(dì)分離(lí)。
2
， 血(xiě)漿-----EDTA
，檸檬酸(suān)鹽
，肝(gān)素血漿可(kě)用(yòng)於檢測。1000×g離心(xīn)30分(fēn)鐘去(qù)除顆粒。
3
， 細胞上清液---1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘去(qù)除(chú)顆粒(lì)和(hé)聚合(hé)物。
4
， 保(bǎo)存(cún)------如(rú)果(guǒ)樣(yàng)品(pǐn)不立即(jí)使(shǐ)用，應(yīng)將其分成(chéng)小部分-70 ℃保存，避免(miǎn)反復冷凍(dòng)。盡可(kě)能的不(bù)要使用(yòng)溶血(xiě)或(huò)高血脂血。如果(guǒ)血清中(zhōng)大(dà)量(liáng)顆粒(lì)，檢測前(qián)先(xiān)離心(xīn)或過(guò)濾。不(bù)要在37℃或(huò)更高(gāo)的(dí)溫(wēn)度加(jiā)熱(rè)解凍(dòng)。應在室溫(wēn)下解(jiě)凍並確保樣(yàng)品(pǐn)均匀地(dì)充分(fēn)解凍。

試(shì)劑(jì)的(dí)準備(bèi)
1． 標準(zhǔn)品：標(biāo)準品的係(xì)列(liè)稀釋應在(zài)實驗時(shí)準(zhǔn)備(bèi)，不能儲存。稀釋(shì)前(qián)將(jiāng)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)振蕩混(hùn)匀。稀(xī)釋(shì)比(bǐ)例(lì)按(àn)下表中(zhōng)進(jìn)行(háng)：
800 ng/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原(yuán)倍濃度不用(yòng)稀(xī)釋直接加入50ul。
400 ng/ml （5號標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的(dí)原(yuán)倍(bèi)標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準(zhǔn)品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀釋液
100 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準(zhǔn)品稀釋液(yè)
50 ng/ml （2號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的3號標準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液(yè)
25 ng/ml （1號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的2號標準(zhǔn)品加(jiā)入(rù)100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋液(yè)
0 ng/ml （空(kōng)白對(duì)照） 原(yuán)始濃(nóng)度(dù)不用稀(xī)釋直接加入(rù)50ul。

2． 洗滌(dí)緩衝(chōng)液(yè)（50×）的稀(xī)釋：蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)50倍稀(xī)釋。

操(cāo)作(zuò)步驟(zhòu)
1． 使用前(qián)，將所有試(shì)劑(jì)充分(fēn)混(hùn)匀。不要(yào)使液體產生大量的泡(pào)沫，以免加樣時加入(rù)大(dà)量(liáng)的(dí)氣泡，產生(shēng)加(jiā)樣(yàng)上的誤差(chà)。
2． 根(gēn)據(jù)待(dài)測樣品(pǐn)數量(liáng)加(jiā)上標準(zhǔn)品(pǐn)的數(shù)量(liáng)決(jué)定(dìng)所需(xū)的板條數。每個(gè)標準品(pǐn)和(hé)空白(bái)孔建議做復孔。每(měi)個樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據(jù)自己的(dí)數量(liáng)來定，能(néng)使用復(fù)孔的(dí)盡量做復(fù)孔。
3． 加(jiā)入稀釋(shì)好後的標(biāo)準品(pǐn)50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)
，加(jiā)入(rù)待測樣(yàng)品50ul於反應孔(kǒng)內。立(lì)即加入50ul的(dí)生物素(sù)標記(jì)的(dí)抗(kàng)體(tǐ)。蓋上(shàng)膜板，輕輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫(wēn)育1小時。
4． 甩去孔內液(yè)體，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌液，振蕩30秒，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌液(yè)，用(yòng)吸(xī)水紙拍幹。重復此(cǐ)操作3次(cì)。如果(guǒ)用洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌，洗滌次數(shù)增(zēng)加一次。
5． 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)80ul的親(qīn)和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素-HRP，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育(yù)30分鐘(zhōng)。
6． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內液(yè)體，每(měi)孔加滿洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗滌液，用吸(xī)水(shuǐ)紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復此操(cāo)作3次。如(rú)果用(yòng)洗板機洗滌，洗滌次(cì)數增加(jiā)一次(cì)。
7． 每孔加(jiā)入(rù)底物A
，B各50ul，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育10分鐘(zhōng)。避免光照。
8． 取出(chū)酶標(biāo)板，迅(xùn)速加入(rù)50ul終(zhōng)止液，加入終止液後應(yīng)立(lì)即測(cè)定結果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長處(chǔ)測定(dìng)各孔的(dí)OD值。

建議使(shǐ)用(yòng)的實驗(yàn)方案
 標(biāo)準品(pǐn)濃度（ng/ml） 
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
B 400 400 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
C 200 200 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
D 100 100 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
E 50 50 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品
F 25 25 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
G 0 0 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品
H 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品

局(jú)限
6號標準(zhǔn)品以(yǐ)上的(dí)結果為非(fēi)綫(xiàn)性的，根據(jù)此標(biāo)準曲(qū)綫(xiàn)無法得(dé)到的(dí)結(jié)果(guǒ)。

試(shì)劑盒性能(néng)
1. 靈(líng)敏度：zui小的檢測(cè)濃(nóng)度小(xiǎo)於(yú)1號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)。稀(xī)釋(shì)度(dù)的(dí)綫性。樣品綫性回歸與(yǔ)預期(qī)濃度相(xiāng)關係數(shù)R值為(wéi)0.990。
2. 特異性：不與其它(tā)細(xì)胞(bāo)因(yīn)子反(fǎn)應。
3. 重(zhòng)復性(xìng)：板(bǎn)內
，板(bǎn)間變異係(xì)數均小於10%。

結(jié) 果 判(pàn) 斷 與 分(fēn) 析(xī)
1
，儀(yí)器(qì)值：於(yú)波(bō)長450nm的酶標儀上(shàng)讀取(qǔ)各孔的(dí)OD值

2
，以吸(xī)光(guāng)度(dù)OD值為(wéi)縱坐標（Y），相應(yīng)的Glucocorticoid標準(zhǔn)品濃度(dù)為(wéi)橫坐(zuò)標（X），做得(dé)相(xiāng)應的曲(qū)綫(xiàn)，樣品的(dí)Glucocorticoid含量可(kě)根據(jù)其OD值(zhí)由標準曲綫(xiàn)換算出相(xiāng)應(yīng)的濃度(dù)。

3
，檢測(cè)值範(fàn)圍：0-800ng/ml

4
，敏(mǐn)感(gǎn)度： 1.0 ng/ml