大鼠 （Rat） 腦(nǎo)鈉肽(tài)（BNP）ELISA 檢測試(shì)劑盒(hé)
本試劑僅(jǐn)供(gōng)研究(jiū)使用 標本(běn)：血清或血(xiě)漿(jiāng)

試(shì)驗(yàn)原理：
BNP試劑(jì)盒(hé)是固相夾心(xīn)法酶聯(lián)免(miǎn)疫(yì)吸(xī)附實驗（ELISA）.已知BNP濃度的標準品(pǐn)，未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣(yàng)品加(jiā)入微(wēi)孔(kǒng)酶(méi)標板(bǎn)內(nèi)進(jìn)行檢測。先將BNP和(hé)生(shēng)物素標記(jì)的(dí)抗體同時(shí)溫(wēn)育(yù)。洗滌(dí)後，加(jiā)入親(qīn)和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除(chú)未(wèi)結合的(dí)酶(méi)結(jié)合(hé)物(wù)，然(rán)後加(jiā)入(rù)底物A，B，和酶(méi)結合物同(tóng)時作用(yòng)。產(chǎn)生顏色(sè)。顏色(sè)的(dí)深淺和(hé)樣(yàng)品中(zhōng)BNP的(dí)濃(nóng)度(dù)呈比例關(guān)係(xì)。

試(shì)劑盒(hé)內容(róng)及其配製(zhì)
試(shì)劑(jì)盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配(pèi)置(zhì) 配製
96/48人份(fèn)酶(méi)標(biāo)板 1塊(kuài)板（96T） 半塊(kuài)板（48T） 即(jí)用(yòng)型
塑(sù)料膜板蓋 1塊 半(bàn)塊(kuài) 即用(yòng)型
標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：400pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明(míng)書(shū)進(jìn)行(háng)稀稀(xī)
空(kōng)白(bái)對照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型
標準(zhǔn)品稀釋(shì)緩衝液(yè) 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生(shēng)物素標記(jì)的抗BNP抗體(tǐ) 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用(yòng)型
洗滌緩衝液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說(shuō)明(míng)書進行(háng)稀釋
底物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
底物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終(zhōng)止(zhǐ)液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型

自備材料(liào)
1． 蒸餾水。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200ul，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁力(lì)攪拌器等(děng)。

安全性
1． 避免(miǎn)直(zhí)接接觸終止(zhǐ)液和(hé)底物A，B。一(yī)旦(dàn)接觸(chù)到這些液體，請(qǐng)盡快(kuài)用水(shuǐ)衝洗。
2． 實(shí)驗中不(bù)要(yào)吃(chī)喝(hē)，抽煙(yān)或使用(yòng)化(huà)妝品。
3． 不要用嘴吸取試(shì)劑盒(hé)裏的任何(hé)成份。

操(cāo)作注意事項
1． 試劑應按標簽說明(míng)書儲(chǔ)存，使(shǐ)用前恢復(fù)到室(shì)溫。稀(xī)稀過後的標(biāo)準(zhǔn)品應丟棄，不可(kě)保存(cún)。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不用的板條(tiáo)應立即放回(huí)包(bāo)裝(zhuāng)袋中，密封保(bǎo)存(cún)，以免變(biàn)質。
3． 不(bù)用(yòng)的其它(tā)試(shì)劑(jì)應包裝(zhuāng)好或蓋好。不同批號的試(shì)劑(jì)不(bù)要混用。保(bǎo)質前使用(yòng)。
4． 使(shǐ)用一(yī)次(cì)性的(dí)吸頭以(yǐ)免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染，吸(xī)取終止(zhǐ)液和底(dǐ)物(wù)A，B液(yè)時，避免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)帶(dài)金屬(shǔ)部(bù)分的(dí)加樣(yàng)器。
5． 使(shǐ)用幹淨(jìng)的(dí)塑料容器配(pèi)置洗滌液。使(shǐ)用(yòng)前充(chōng)分混匀試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的(dí)各種成(chéng)份(fèn)及樣品(pǐn)。
6． 洗滌(dí)酶標板時應充分拍幹(gān)，不要將吸水(shuǐ)紙(zhǐ)直接(jiē)放入(rù)酶(méi)標(biāo)反應孔(kǒng)中吸水。
7． 底(dǐ)物(wù)A應揮(huī)發，避免(miǎn)長時間打(dǎ)開蓋子(zǐ)。底(dǐ)物B對(duì)光敏感，避(bì)免(miǎn)長時(shí)間(jiān)暴露於光下(xià)。避免用(yòng)手(shǒu)接(jiē)觸(chù)，有(yǒu)毒(dú)。實(shí)驗完成(chéng)後應(yīng)立即(jí)讀取OD值。
8． 加入(rù)試劑的(dí)順(shùn)序應一(yī)致(zhì)，以(yǐ)保證所有(yǒu)反應(yīng)板(bǎn)孔(kǒng)溫育(yù)的(dí)時間一樣。
9． 按照說明(míng)書(shū)中標(biāo)明(míng)的時(shí)間，加(jiā)液的量(liáng)及順序(xù)進(jìn)行(háng)溫育(yù)操作。

樣品收(shōu)集，處理及保(bǎo)存方法(fǎ)
1， 血清-----操作(zuò)過(guò)程中(zhōng)避免任何(hé)細(xì)胞刺(cì)激。使用不含熱原(yuán)和內毒素的試(shì)管。收(shōu)集(jí)血液後，1000×g離心10分鐘(zhōng)將(jiāng)血(xiě)清和紅(hóng)細(xì)胞迅速(sù)小心(xīn)地分離。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸(níng)檬(méng)酸(suān)鹽，肝素血(xiě)漿可用於檢測。1000×g離心(xīn)30分鐘去除顆粒。
3， 細(xì)胞(bāo)上(shàng)清液---1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘去除(chú)顆(kē)粒(lì)和(hé)聚(jù)合(hé)物(wù)。
4， 保存(cún)------如果樣品不立即使(shǐ)用，應(yīng)將其分成小部分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存，避免(miǎn)反(fǎn)復冷(lěng)凍。盡可能的不(bù)要(yào)使用(yòng)溶血或高血脂血。如(rú)果血清(qīng)中(zhōng)大(dà)量(liáng)顆(kē)粒，檢測前先離(lí)心或過(guò)濾。不要在(zài)37℃或更(gēng)高的溫(wēn)度(dù)加熱解(jiě)凍。應(yīng)在(zài)室(shì)溫(wēn)下解凍(dòng)並(bìng)確保(bǎo)樣(yàng)品均(jūn)匀地(dì)充(chōng)分(fēn)解凍。

試劑的(dí)準備
1． 標(biāo)準品：標準品的係列稀(xī)釋應在實驗(yàn)時(shí)準備(bèi)，不能儲存。稀釋前(qián)將標準(zhǔn)品(pǐn)振(zhèn)蕩(dàng)混匀。稀釋比(bǐ)例按下表中進行(háng)：
400 pg/ml （6號標準品(pǐn)） 原倍濃度(dù)不(bù)用(yòng)稀釋(shì)直接加(jiā)入50ul。
200 pg/ml （5號(hào)標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋液
100 pg/ml （4號標(biāo)準品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液
50 pg/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)4號標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋(shì)液
25 pg/ml （2號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的3號標(biāo)準品加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
12.5 pg/ml （1號標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的2號標準品加入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準品(pǐn)稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始(shǐ)濃度不(bù)用稀(xī)釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入50ul。

2． 洗滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀(xī)釋。

操作(zuò)步(bù)驟
1． 使(shǐ)用前(qián)，將所有試劑充分混匀。不要使(shǐ)液(yè)體(tǐ)產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大(dà)量的(dí)氣(qì)泡(pào)，產生加(jiā)樣(yàng)上的(dí)誤(wù)差。
2． 根(gēn)據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量(liáng)加上標準品的數量(liáng)決(jué)定所(suǒ)需的(dí)板條數。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空(kōng)白孔建議做復孔(kǒng)。每(měi)個樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據(jù)自己(jǐ)的(dí)數量(liáng)來(lái)定，能(néng)使用復(fù)孔(kǒng)的盡量做(zuò)復孔(kǒng)。
3． 加(jiā)入稀(xī)釋(shì)好(hǎo)後的(dí)標準品(pǐn)50ul於反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)，加入(rù)待測樣品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)內(nèi)。立即加入50ul的(dí)生物(wù)素標(biāo)記的(dí)抗體。蓋上膜(mó)板，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育1小(xiǎo)時(shí)。
4． 甩去(qù)孔(kǒng)內(nèi)液體(tǐ)，每孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用(yòng)吸(xī)水紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操作3次。如果(guǒ)用洗板機(jī)洗滌，洗(xǐ)滌(dí)次數增(zēng)加(jiā)一次。
5． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)80ul的親(qīn)和鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP，輕輕(qīng)振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘。
6． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內(nèi)液(yè)體，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸水紙(zhǐ)拍(pāi)幹(gān)。重復此操作3次(cì)。如(rú)果用洗板(bǎn)機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌(dí)次數(shù)增加一次。
7． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕輕(qīng)振蕩混(hùn)匀，37℃溫育10分鐘。避(bì)免光照。
8． 取出(chū)酶標板(bǎn)，迅速(sù)加入(rù)50ul終止液，加(jiā)入(rù)終(zhōng)止液(yè)後應立即測(cè)定結果。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處測(cè)定各孔的(dí)OD值(zhí)。

建(jiàn)議使用(yòng)的(dí)實驗方案(àn)
 標準(zhǔn)品濃度（pg/ml） 
A 400 400 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品
B 200 200 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
C 100 100 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品
D 50 50 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品
E 25 25 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
F 12.5 12.5 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品
H 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)

局限(xiàn)
6號標準品以上的結果為非綫性的，根(gēn)據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫無法(fǎ)得到的(dí)結果。

試劑盒(hé)性能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度(dù)：zui小(xiǎo)的(dí)檢測濃(nóng)度(dù)小於1號(hào)標(biāo)準品(pǐn)。稀釋(shì)度的(dí)綫性。樣(yàng)品綫性(xìng)回(huí)歸與(yǔ)預(yù)期(qī)濃(nóng)度(dù)相(xiāng)關(guān)係數(shù)R值為(wéi)0.990。
2. 特異性：不與其它細胞(bāo)因(yīn)子(zǐ)反(fǎn)應。
3. 重(zhòng)復性：板內，板(bǎn)間(jiān)變(biàn)異係數(shù)均(jūn)小於10%。

結(jié) 果(guǒ) 判 斷 與 分(fēn) 析(xī)
1，儀器(qì)值(zhí)：於(yú)波長450nm的酶(méi)標(biāo)儀上讀取各(gè)孔(kǒng)的OD值(zhí)

2，以吸光度OD值為(wéi)縱(zòng)坐(zuò)標(biāo)（Y），相(xiāng)應(yīng)的(dí)BNP標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐標（X），做得相應的(dí)曲(qū)綫，樣(yàng)品的BNP含量可根(gēn)據其(qí)OD值(zhí)由(yóu)標準曲綫(xiàn)換算出(chū)相應(yīng)的(dí)濃(nóng)度(dù)。

3，檢測值(zhí)範圍(wéi)：0-400pg/ml

4，敏感度(dù)： 1.0 pg/ml