大鼠 （Rat） 內皮抑(yì)素（ES）ELISA 檢測(cè)試劑盒
本(běn)試(shì)劑(jì)僅供研(yán)究使(shǐ)用(yòng) 標本(běn)：血清(qīng)或血(xiě)漿(jiāng)

試(shì)驗原理：
ES試劑盒是固相夾(jiā)心法酶聯免(miǎn)疫(yì)吸附實驗(yàn)（ELISA）.已知ES濃(nóng)度(dù)的標準品(pǐn)，未知濃度(dù)的樣品加入(rù)微孔酶(méi)標(biāo)板(bǎn)內進行檢測(cè)。先將ES和(hé)生(shēng)物素標記的抗體同時溫育。洗(xǐ)滌(dí)後(hòu)，加(jiā)入(rù)親(qīn)和素標(biāo)記(jì)過(guò)的(dí)HRP。再(zài)經過(guò)溫育和(hé)洗滌，去除(chú)未(wèi)結合(hé)的酶結(jié)合(hé)物(wù)，然(rán)後加(jiā)入底(dǐ)物(wù)A，B，和(hé)酶結(jié)合物同時作(zuò)用(yòng)。產(chǎn)生(shēng)顏色(sè)。顏(yán)色(sè)的(dí)深淺和(hé)樣品(pǐn)中ES的濃(nóng)度(dù)呈(chéng)比(bǐ)例(lì)關(guān)係(xì)。

試劑盒(hé)內(nèi)容(róng)及其(qí)配製(zhì)
試劑盒(hé)成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配(pèi)製
96/48人份酶標板 1塊板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊板（48T） 即用型
塑料(liào)膜(mó)板(bǎn)蓋(gài) 1塊(kuài) 半塊(kuài) 即用(yòng)型(xíng)
標準(zhǔn)品：240pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說(shuō)明書進行(háng)稀稀
空白對照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型(xíng)
標準品稀(xī)釋(shì)緩衝(chōng)液(yè) 1瓶(píng)（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
生物素標(biāo)記(jì)的(dí)抗(kàng)ES抗體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗(xǐ)滌(dí)緩(huǎn)衝液 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行(háng)稀(xī)釋(shì)
底(dǐ)物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自(zì)備(bèi)材料
1． 蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)。
2． 加(jiā)樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器(qì)及(jí)磁(cí)力攪拌器(qì)等。

安全性
1． 避(bì)免直(zhí)接(jiē)接觸(chù)終止(zhǐ)液(yè)和底物A，B。一旦(dàn)接(jiē)觸到這些液(yè)體，請盡快用(yòng)水(shuǐ)衝(chōng)洗。
2． 實驗(yàn)中不(bù)要吃喝(hē)，抽煙或使用(yòng)化妝品(pǐn)。
3． 不(bù)要用嘴(zuǐ)吸(xī)取試劑盒裏(lǐ)的任何成(chéng)份(fèn)。

操作注意(yì)事項(xiàng)
1． 試劑(jì)應按標簽(qiān)說明(míng)書儲存，使用前恢復(fù)到(dào)室溫。稀稀(xī)過後的標準品應丟棄，不可保存(cún)。
2． 實驗中不用(yòng)的板(bǎn)條應(yīng)立(lì)即放回(huí)包裝袋中(zhōng)，密(mì)封(fēng)保(bǎo)存，以免(miǎn)變(biàn)質。
3． 不(bù)用的其(qí)它(tā)試劑應包(bāo)裝好(hǎo)或(huò)蓋好。不同(tóng)批號的試劑不要混用(yòng)。保(bǎo)質前(qián)使用(yòng)。
4． 使用一次(cì)性的吸頭以免交叉(chā)汙染(rǎn)，吸取終止(zhǐ)液和底(dǐ)物A，B液(yè)時，避(bì)免使用(yòng)帶(dài)金屬部分(fēn)的加樣(yàng)器。
5． 使用幹淨的(dí)塑料(liào)容器(qì)配置(zhì)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)。使用前(qián)充分混匀試劑盒(hé)裏的(dí)各種成份(fèn)及樣(yàng)品。
6． 洗滌(dí)酶(méi)標板時應(yīng)充分拍(pāi)幹，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙(zhǐ)直接(jiē)放(fàng)入酶(méi)標反應孔中吸(xī)水。
7． 底物(wù)A應揮發(fā)，避免(miǎn)長(cháng)時間(jiān)打開蓋子。底物(wù)B對光敏感，避免(miǎn)長時(shí)間暴露(lòu)於光下。避(bì)免(miǎn)用手(shǒu)接觸(chù)，有(yǒu)毒。實(shí)驗完(wán)成(chéng)後應(yīng)立(lì)即(jí)讀(dú)取OD值(zhí)。
8． 加入試劑的(dí)順(shùn)序(xù)應一(yī)致(zhì)，以(yǐ)保證所(suǒ)有反(fǎn)應(yīng)板(bǎn)孔(kǒng)溫育的時間(jiān)一(yī)樣(yàng)。
9． 按照(zhào)說明書中標(biāo)明(míng)的(dí)時間(jiān)，加(jiā)液的量及順(shùn)序進行(háng)溫(wēn)育(yù)操作。

樣(yàng)品(pǐn)收(shōu)集，處理(lǐ)及保(bǎo)存(cún)方法
1， 血清-----操作過程中(zhōng)避免任(rèn)何細胞刺(cì)激。使(shǐ)用(yòng)不含(hán)熱(rè)原和內(nèi)毒(dú)素的試管。收(shōu)集血(xiě)液(yè)後，1000×g離心10分鐘(zhōng)將血(xiě)清和(hé)紅細(xì)胞迅速小(xiǎo)心地分離。
2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬(méng)酸鹽(yán)，肝素血(xiě)漿可用於檢測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒(lì)。
3， 細胞上清(qīng)液---1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘去(qù)除(chú)顆粒和(hé)聚合物(wù)。
4， 保(bǎo)存(cún)------如果樣品不立即(jí)使(shǐ)用，應將其分成(chéng)小部分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免反復(fù)冷(lěng)凍。盡可(kě)能的(dí)不(bù)要(yào)使(shǐ)用溶(róng)血(xiě)或高血(xiě)脂血(xiě)。如(rú)果血(xiě)清(qīng)中大量(liáng)顆粒，檢測前先(xiān)離心(xīn)或過濾(lǜ)。不要在37℃或更(gēng)高的溫度加熱(rè)解(jiě)凍(dòng)。應(yīng)在室溫(wēn)下解(jiě)凍並(bìng)確保樣(yàng)品均(jūn)匀(yún)地充分(fēn)解凍(dòng)。

試(shì)劑的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標準(zhǔn)品：標(biāo)準品的(dí)係列稀釋(shì)應在(zài)實驗時準(zhǔn)備(bèi)，不(bù)能儲存。稀(xī)釋前(qián)將(jiāng)標準品(pǐn)振蕩混(hùn)匀(yún)。稀釋(shì)比例(lì)按(àn)下(xià)表中進行：
240 pg/ml （6號標準(zhǔn)品） 原倍濃(nóng)度不用(yòng)稀釋直接加(jiā)入(rù)50ul。
120 pg/ml （5號(hào)標準品） 100ul的(dí)原(yuán)倍(bèi)標準品(pǐn)加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀釋液
60 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)
30 pg/ml （3號(hào)標準品） 100ul的(dí)4號標準品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋液
15 pg/ml （2號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)3號標(biāo)準品加入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋液
7.5 pg/ml （1號標準品(pǐn)） 100ul的2號(hào)標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)
0 pg/ml （空白(bái)對照） 原始濃度(dù)不(bù)用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩衝(chōng)液（50×）的稀釋：蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)50倍稀釋。

操作步(bù)驟(zhòu)
1． 使用(yòng)前，將所有試劑(jì)充分混(hùn)匀。不(bù)要使(shǐ)液體(tǐ)產生(shēng)大量(liáng)的(dí)泡(pào)沫(mò)，以(yǐ)免加(jiā)樣時(shí)加(jiā)入大量的(dí)氣泡，產(chǎn)生(shēng)加(jiā)樣(yàng)上的誤(wù)差。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品(pǐn)數(shù)量加上(shàng)標準品的(dí)數量(liáng)決(jué)定(dìng)所(suǒ)需的板條數。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)和空(kōng)白孔(kǒng)建(jiàn)議做復孔(kǒng)。每個(gè)樣品根(gēn)據自己(jǐ)的(dí)數量來定，能(néng)使用復孔(kǒng)的(dí)盡量做(zuò)復孔(kǒng)。
3． 加(jiā)入稀釋好後的標準(zhǔn)品50ul於反(fǎn)應孔，加入待測樣品(pǐn)50ul於(yú)反應孔(kǒng)內(nèi)。立(lì)即加(jiā)入50ul的生物素(sù)標記的抗(kàng)體。蓋上膜板，輕輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫育(yù)1小(xiǎo)時。
4． 甩(shuǎi)去孔內液(yè)體，每孔(kǒng)加(jiā)滿(mǎn)洗滌液(yè)，振蕩30秒，甩去洗(xǐ)滌液，用(yòng)吸水紙拍(pāi)幹(gān)。重(zhòng)復此(cǐ)操作(zuò)3次(cì)。如(rú)果(guǒ)用洗板(bǎn)機(jī)洗滌(dí)，洗(xǐ)滌(dí)次(cì)數(shù)增加(jiā)一次(cì)。
5． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)80ul的(dí)親和(hé)鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混匀，37℃溫育30分(fēn)鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每(měi)孔加滿洗(xǐ)滌液，振蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗滌液(yè)，用(yòng)吸水紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復(fù)此(cǐ)操作3次。如(rú)果(guǒ)用洗(xǐ)板機洗(xǐ)滌，洗滌次數增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔(kǒng)加入底(dǐ)物A，B各(gè)50ul，輕輕振蕩(dàng)混匀，37℃溫育10分鐘。避免(miǎn)光照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶標板(bǎn)，迅速加(jiā)入50ul終止液，加入(rù)終止液(yè)後應立即測(cè)定(dìng)結(jié)果(guǒ)。
9． 在450nm波(bō)長處(chǔ)測(cè)定(dìng)各(gè)孔的OD值。

建議(yì)使用(yòng)的實驗(yàn)方案
 標準(zhǔn)品(pǐn)濃度(dù)（pg/ml） 
A 240 240 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
B 120 120 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
C 60 60 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品
D 30 30 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
E 15 15 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
F 7.5 7.5 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
G 0 0 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
H 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品

局(jú)限
6號標準品以(yǐ)上(shàng)的結(jié)果為非綫性的(dí)，根(gēn)據此(cǐ)標(biāo)準曲(qū)綫(xiàn)無法(fǎ)得(dé)到的結果(guǒ)。

試(shì)劑盒(hé)性能(néng)
1. 靈(líng)敏(mǐn)度：zui小(xiǎo)的(dí)檢(jiǎn)測濃(nóng)度小於1號(hào)標(biāo)準品。稀釋(shì)度(dù)的綫性。樣(yàng)品(pǐn)綫(xiàn)性回歸與(yǔ)預(yù)期濃度相關係(xì)數(shù)R值為(wéi)0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因(yīn)子反應。
3. 重(zhòng)復性(xìng)：板(bǎn)內，板(bǎn)間(jiān)變(biàn)異(yì)係數均小於10%。

結 果 判 斷 與 分(fēn) 析(xī)
1，儀器值：於波長(cháng)450nm的(dí)酶標(biāo)儀上(shàng)讀取各孔的OD值

2，以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的ES標準(zhǔn)品濃(nóng)度為(wéi)橫(héng)坐標(biāo)（X），做(zuò)得相應(yīng)的曲綫(xiàn)，樣(yàng)品的(dí)ES含量可根據(jù)其(qí)OD值由標準曲(qū)綫(xiàn)換算出相應(yīng)的(dí)濃(nóng)度。

3，檢測(cè)值範圍：0-240pg/ml

4，敏(mǐn)感度： 0.1 pg/ml