大鼠(shǔ) （Rat） 巨噬(shì)細胞炎(yán)性蛋白(bái)-5（MIP-5）ELISA 檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒(hé)
本試(shì)劑僅供研究使用(yòng) 標本：血(xiě)清或(huò)血漿

試驗(yàn)原(yuán)理(lǐ)：
MIP-5試(shì)劑盒是固(gù)相夾心法(fǎ)酶聯免疫(yì)吸(xī)附實驗（ELISA）.已知MIP-5濃度(dù)的標(biāo)準品，未知濃(nóng)度的樣(yàng)品加(jiā)入(rù)微孔酶標板內進行(háng)檢測(cè)。先(xiān)將MIP-5和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記(jì)的(dí)抗(kàng)體同時溫育。洗滌後，加(jiā)入(rù)親(qīn)和(hé)素標記過(guò)的(dí)HRP。再(zài)經過(guò)溫育(yù)和洗滌，去除未(wèi)結合的酶結合(hé)物，然後加入底物A，B，和酶結(jié)合物(wù)同(tóng)時(shí)作用。產生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏色(sè)的(dí)深(shēn)淺和(hé)樣品(pǐn)中(zhōng)MIP-5的(dí)濃(nóng)度呈比例(lì)關係。

試劑(jì)盒(hé)內容(róng)及其配(pèi)製
試(shì)劑盒(hé)成份（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配(pèi)置(zhì) 48孔配置 配(pèi)製
96/48人份(fèn)酶標板(bǎn) 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半塊板（48T） 即(jí)用(yòng)型
塑料膜板(bǎn)蓋 1塊(kuài) 半塊 即(jí)用型
標準(zhǔn)品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說(shuō)明書進(jìn)行稀稀(xī)
空白對(duì)照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
標準品稀(xī)釋(shì)緩衝(chōng)液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記(jì)的(dí)抗MIP-5抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
親(qīn)和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗(xǐ)滌(dí)緩衝(chōng)液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說(shuō)明書進行稀(xī)釋
底物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型
底物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型(xíng)
終止(zhǐ)液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自備材(cái)料(liào)
1． 蒸(zhēng)餾水(shuǐ)。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器及磁(cí)力攪拌器等(děng)。

安全性(xìng)
1． 避免(miǎn)直(zhí)接(jiē)接觸終止(zhǐ)液和底物A，B。一旦(dàn)接觸到這些(xiē)液體(tǐ)，請盡(jìn)快用水衝(chōng)洗。
2． 實驗中(zhōng)不要(yào)吃(chī)喝，抽煙或(huò)使(shǐ)用(yòng)化妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不(bù)要(yào)用(yòng)嘴吸取試劑(jì)盒裏的(dí)任(rèn)何(hé)成份。

操(cāo)作(zuò)注意(yì)事項
1． 試劑應按(àn)標簽說明(míng)書儲(chǔ)存，使(shǐ)用前恢復到(dào)室(shì)溫。稀(xī)稀(xī)過(guò)後的標準品應丟棄，不可(kě)保存。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不(bù)用的(dí)板條應(yīng)立(lì)即放(fàng)回(huí)包(bāo)裝(zhuāng)袋中(zhōng)，密封保(bǎo)存，以免(miǎn)變質。
3． 不(bù)用的其(qí)它(tā)試劑應(yīng)包(bāo)裝好或蓋好。不同批(pī)號的試劑(jì)不要混(hùn)用。保質前(qián)使用。
4． 使用(yòng)一次性的吸頭以免(miǎn)交(jiāo)叉汙染，吸取(qǔ)終(zhōng)止液和(hé)底物A，B液時(shí)，避免使用帶金屬(shǔ)部(bù)分的(dí)加樣器。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹淨的塑(sù)料(liào)容器(qì)配置洗滌液。使用(yòng)前(qián)充分混匀試劑盒裏的各(gè)種成(chéng)份(fèn)及(jí)樣品(pǐn)。
6． 洗滌(dí)酶標板時應(yīng)充分(fēn)拍(pāi)幹，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水紙直(zhí)接放入酶標反應孔(kǒng)中吸水。
7． 底物(wù)A應(yīng)揮發，避(bì)免長時(shí)間(jiān)打開蓋子(zǐ)。底物(wù)B對光(guāng)敏(mǐn)感，避免長(cháng)時間(jiān)暴露(lòu)於光(guāng)下(xià)。避免用手(shǒu)接(jiē)觸，有(yǒu)毒。實驗(yàn)完成(chéng)後(hòu)應立即讀取OD值。
8． 加入(rù)試(shì)劑的順序應一致，以(yǐ)保證所(suǒ)有反(fǎn)應板孔溫育的時(shí)間一樣(yàng)。
9． 按照說明(míng)書中標明的時(shí)間(jiān)，加(jiā)液的(dí)量及順(shùn)序進行溫育操作。

樣品收集(jí)，處理及保(bǎo)存方(fāng)法
1， 血(xiě)清-----操作過程(chéng)中避(bì)免(miǎn)任何(hé)細(xì)胞(bāo)刺激。使用(yòng)不含(hán)熱(rè)原和(hé)內(nèi)毒素(sù)的(dí)試(shì)管。收集(jí)血(xiě)液(yè)後(hòu)，1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘將血(xiě)清(qīng)和(hé)紅(hóng)細胞迅速(sù)小心(xīn)地分(fēn)離(lí)。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸檬(méng)酸鹽，肝(gān)素血漿(jiāng)可用於(yú)檢測(cè)。1000×g離心(xīn)30分鐘去除顆粒。
3， 細胞(bāo)上清(qīng)液---1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘去(qù)除顆(kē)粒(lì)和(hé)聚合(hé)物(wù)。
4， 保存------如(rú)果樣品不立即使(shǐ)用，應將其分成小部(bù)分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避(bì)免反復冷凍(dòng)。盡(jìn)可(kě)能(néng)的(dí)不(bù)要使(shǐ)用溶(róng)血(xiě)或(huò)高(gāo)血脂(zhī)血(xiě)。如(rú)果血清(qīng)中大(dà)量顆粒，檢(jiǎn)測前先離(lí)心或過濾(lǜ)。不要在(zài)37℃或(huò)更高的溫(wēn)度加(jiā)熱(rè)解(jiě)凍(dòng)。應在室溫(wēn)下解凍並(bìng)確保樣(yàng)品均匀地充分解凍(dòng)。

試劑(jì)的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標準品(pǐn)的係列稀(xī)釋(shì)應(yīng)在(zài)實驗時準(zhǔn)備，不(bù)能(néng)儲存。稀釋(shì)前將標準(zhǔn)品(pǐn)振(zhèn)蕩(dàng)混匀。稀(xī)釋比例按(àn)下表中(zhōng)進行：
800 pg/ml （6號標準(zhǔn)品） 原(yuán)倍濃度(dù)不用(yòng)稀釋直(zhí)接加入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準品） 100ul的原倍標準品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標準品稀(xī)釋液
200 pg/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的(dí)5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準品） 100ul的4號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
50 pg/ml （2號標(biāo)準品） 100ul的(dí)3號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準品(pǐn)稀釋(shì)液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號(hào)標準品加入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(yè)
0 pg/ml （空白對(duì)照） 原(yuán)始(shǐ)濃(nóng)度不用稀(xī)釋直接(jiē)加入(rù)50ul。

2． 洗滌緩衝液（50×）的稀釋(shì)：蒸餾水50倍稀(xī)釋。

操作步(bù)驟(zhòu)
1． 使用(yòng)前，將所(suǒ)有試劑充分混(hùn)匀。不(bù)要使液體產(chǎn)生大(dà)量(liáng)的(dí)泡(pào)沫，以免加樣時加入(rù)大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的(dí)誤差(chà)。
2． 根(gēn)據待測樣品(pǐn)數量加上(shàng)標(biāo)準品(pǐn)的數(shù)量(liáng)決(jué)定(dìng)所(suǒ)需(xū)的(dí)板(bǎn)條數。每(měi)個標(biāo)準品(pǐn)和空白(bái)孔建議做復(fù)孔。每(měi)個樣(yàng)品(pǐn)根據自己的數(shù)量(liáng)來定，能使用(yòng)復(fù)孔(kǒng)的(dí)盡量做(zuò)復(fù)孔(kǒng)。
3． 加入稀釋好後(hòu)的標準品(pǐn)50ul於(yú)反應(yīng)孔，加入待(dài)測(cè)樣(yàng)品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應孔內。立即加(jiā)入(rù)50ul的生(shēng)物素標記的(dí)抗體。蓋上膜(mó)板，輕輕(qīng)振蕩混匀(yún)，37℃溫育1小(xiǎo)時。
4． 甩去孔(kǒng)內(nèi)液(yè)體，每孔加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液(yè)，振蕩(dàng)30秒，甩去洗(xǐ)滌液(yè)，用吸水(shuǐ)紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復此(cǐ)操(cāo)作3次(cì)。如(rú)果(guǒ)用(yòng)洗(xǐ)板(bǎn)機(jī)洗(xǐ)滌，洗滌(dí)次(cì)數(shù)增加一(yī)次。
5． 每(měi)孔加入(rù)80ul的親和鏈(liàn)酶素-HRP，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)，37℃溫育30分鐘。
6． 甩(shuǎi)去孔內液體(tǐ)，每孔加滿洗滌液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗滌(dí)液，用吸水紙拍(pāi)幹(gān)。重復此操(cāo)作(zuò)3次。如果(guǒ)用洗板機洗滌，洗(xǐ)滌次數增(zēng)加一次。
7． 每孔加入(rù)底物(wù)A，B各(gè)50ul，輕輕振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)10分(fēn)鐘。避免光照。
8． 取出酶(méi)標(biāo)板，迅(xùn)速加入50ul終止(zhǐ)液(yè)，加入終止(zhǐ)液後(hòu)應立(lì)即測(cè)定結果(guǒ)。
9． 在450nm波長處測(cè)定(dìng)各孔的OD值。

建(jiàn)議使用的實(shí)驗(yàn)方(fāng)案
 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度(dù)（pg/ml） 
A 800 800 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
C 200 200 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
D 100 100 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
F 25 25 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
G 0 0 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
H 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn)

局限
6號(hào)標(biāo)準品以上的(dí)結(jié)果為非(fēi)綫性的(dí)，根據此標(biāo)準曲綫(xiàn)無法得到的結果(guǒ)。

試(shì)劑盒(hé)性能(néng)
1. 靈敏度：zui小的檢(jiǎn)測濃(nóng)度小(xiǎo)於(yú)1號(hào)標準(zhǔn)品。稀(xī)釋度的(dí)綫(xiàn)性。樣(yàng)品綫性回歸(guī)與(yǔ)預期(qī)濃度相關係數(shù)R值為0.990。
2. 特(tè)異性(xìng)：不與其它細胞因子反應。
3. 重(zhòng)復性：板內，板(bǎn)間(jiān)變異(yì)係(xì)數均小於(yú)10%。

結 果 判(pàn) 斷 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀(yí)器值：於波長450nm的酶(méi)標(biāo)儀上(shàng)讀取(qǔ)各(gè)孔的OD值

2，以吸(xī)光(guāng)度(dù)OD值為(wéi)縱坐(zuò)標（Y），相(xiāng)應的MIP-5標準(zhǔn)品濃度為橫(héng)坐(zuò)標（X），做得相應的(dí)曲綫(xiàn)，樣(yàng)品的MIP-5含(hán)量可根據(jù)其(qí)OD值由標準曲(qū)綫換算出(chū)相應的濃度。

3，檢測值範圍：0-800pg/ml

4，敏(mǐn)感度： 1.0 pg/ml