大鼠 （Rat） 幹擾素-γ（IFN-γ）ELISA 檢測試劑(jì)盒(hé)
本試劑僅供研(yán)究使用 標本：血(xiě)清(qīng)或(huò)血漿

試驗原理：
IFN-γ試(shì)劑盒是(shì)固相夾(jiā)心法酶(méi)聯(lián)免疫(yì)吸附(fù)實(shí)驗（ELISA）.已知IFN-γ濃度的標準(zhǔn)品，未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣(yàng)品(pǐn)加(jiā)入微孔(kǒng)酶(méi)標(biāo)板內(nèi)進行檢(jiǎn)測(cè)。先將IFN-γ和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的抗(kàng)體同時溫育。洗(xǐ)滌後，加入親和素標記過的HRP。再(zài)經過溫(wēn)育和洗(xǐ)滌，去(qù)除未結合的(dí)酶(méi)結(jié)合(hé)物，然(rán)後加(jiā)入(rù)底物A，B，和(hé)酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏色的(dí)深淺(qiǎn)和樣(yàng)品中(zhōng)IFN-γ的濃度(dù)呈(chéng)比例(lì)關係(xì)。

試(shì)劑盒內容及(jí)其配製
試劑盒(hé)成(chéng)份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔(kǒng)配置(zhì) 48孔配置(zhì) 配(pèi)製
96/48人(rén)份酶(méi)標板(bǎn) 1塊板（96T） 半(bàn)塊板(bǎn)（48T） 即用(yòng)型
塑(sù)料(liào)膜(mó)板蓋(gài) 1塊 半(bàn)塊 即用(yòng)型(xíng)
標準(zhǔn)品(pǐn)：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說明書進行稀稀(xī)
空白(bái)對(duì)照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋緩衝液(yè) 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型
生物素標(biāo)記(jì)的(dí)抗IFN-γ抗(kàng)體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親(qīn)和鏈(liàn)酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用(yòng)型
洗滌(dí)緩(huǎn)衝液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說(shuō)明書(shū)進行稀(xī)釋
底物(wù)A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
終(zhōng)止液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型

自(zì)備(bèi)材料(liào)
1． 蒸(zhēng)餾水。
2． 加樣(yàng)器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器(qì)及磁力(lì)攪拌器等(děng)。

安(ān)全性
1． 避(bì)免(miǎn)直接(jiē)接(jiē)觸終止(zhǐ)液和底(dǐ)物(wù)A，B。一(yī)旦(dàn)接(jiē)觸(chù)到這(zhè)些液(yè)體(tǐ)，請盡快(kuài)用水(shuǐ)衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實驗中(zhōng)不(bù)要吃(chī)喝，抽煙或使用化(huà)妝品(pǐn)。
3． 不要用嘴吸取試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的(dí)任何成份。

操(cāo)作注意事項
1． 試(shì)劑應(yīng)按標簽說明(míng)書儲(chǔ)存，使(shǐ)用(yòng)前恢復(fù)到(dào)室(shì)溫(wēn)。稀稀過後(hòu)的標準品應(yīng)丟棄，不可(kě)保(bǎo)存(cún)。
2． 實驗中(zhōng)不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條應立即(jí)放回包(bāo)裝(zhuāng)袋中，密封保存，以免變質。
3． 不(bù)用的(dí)其(qí)它試(shì)劑應包裝好或(huò)蓋(gài)好(hǎo)。不(bù)同批(pī)號的試(shì)劑不(bù)要混(hùn)用(yòng)。保質前使用。
4． 使(shǐ)用(yòng)一次性的吸頭(tóu)以免交(jiāo)叉汙(wū)染(rǎn)，吸取終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)和(hé)底物A，B液(yè)時(shí)，避免使(shǐ)用帶金(jīn)屬(shǔ)部分(fēn)的(dí)加(jiā)樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用幹淨(jìng)的(dí)塑料容器(qì)配置洗滌液(yè)。使用(yòng)前(qián)充分混(hùn)匀試(shì)劑盒裏(lǐ)的各(gè)種成份及樣(yàng)品。
6． 洗滌(dí)酶標(biāo)板時應充分(fēn)拍幹，不要將吸(xī)水紙直(zhí)接放入(rù)酶標反應孔中(zhōng)吸(xī)水。
7． 底(dǐ)物A應揮發，避免長(cháng)時間(jiān)打(dǎ)開(kāi)蓋(gài)子。底物(wù)B對光敏感，避免(miǎn)長時(shí)間暴露(lòu)於光下(xià)。避(bì)免用手接觸(chù)，有毒(dú)。實驗完(wán)成(chéng)後應立即讀(dú)取(qǔ)OD值。
8． 加入試劑的順序應一(yī)致(zhì)，以(yǐ)保證所有反(fǎn)應板孔(kǒng)溫(wēn)育(yù)的時間(jiān)一(yī)樣。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中(zhōng)標明的(dí)時(shí)間(jiān)，加液的量及(jí)順序進(jìn)行溫育操作(zuò)。

樣(yàng)品(pǐn)收(shōu)集，處(chǔ)理及保存(cún)方(fāng)法(fǎ)
1， 血清-----操作過程(chéng)中(zhōng)避(bì)免(miǎn)任何細(xì)胞刺(cì)激(jī)。使(shǐ)用不含(hán)熱(rè)原和內毒素(sù)的(dí)試管。收集血(xiě)液(yè)後，1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)將(jiāng)血(xiě)清(qīng)和紅(hóng)細(xì)胞(bāo)迅速小心(xīn)地分離。
2， 血漿-----EDTA，檸檬酸鹽，肝(gān)素血(xiě)漿可用於(yú)檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去(qù)除(chú)顆粒。
3， 細胞(bāo)上清液---1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘去除顆粒和聚合物(wù)。
4， 保(bǎo)存(cún)------如(rú)果樣品不(bù)立即(jí)使用(yòng)，應(yīng)將(jiāng)其分成小(xiǎo)部分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避(bì)免反復冷凍(dòng)。盡可能(néng)的(dí)不要使用(yòng)溶血或(huò)高(gāo)血(xiě)脂血(xiě)。如(rú)果血清中大量顆(kē)粒(lì)，檢測(cè)前先離心(xīn)或過(guò)濾。不要在(zài)37℃或(huò)更(gēng)高的溫度(dù)加(jiā)熱(rè)解凍。應在室溫(wēn)下解凍(dòng)並確保樣品(pǐn)均匀(yún)地(dì)充分(fēn)解凍(dòng)。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的係列(liè)稀釋應(yīng)在(zài)實驗(yàn)時準(zhǔn)備，不能(néng)儲存。稀(xī)釋(shì)前將(jiāng)標準品(pǐn)振(zhèn)蕩混匀(yún)。稀釋比(bǐ)例按下(xià)表(biǎo)中(zhōng)進行：
800 pg/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 原(yuán)倍濃度不(bù)用稀(xī)釋直(zhí)接加入50ul。
400 pg/ml （5號標(biāo)準品） 100ul的(dí)原倍標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的標準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的(dí)5號(hào)標準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)液
100 pg/ml （3號標準品(pǐn)） 100ul的4號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(yè)
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋液
25 pg/ml （1號標準(zhǔn)品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品(pǐn)稀釋液(yè)
0 pg/ml （空(kōng)白(bái)對照(zhào)） 原始(shǐ)濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩衝(chōng)液(yè)（50×）的(dí)稀釋(shì)：蒸(zhēng)餾水(shuǐ)50倍(bèi)稀釋。

操作(zuò)步(bù)驟
1． 使(shǐ)用前，將(jiāng)所(suǒ)有試劑充分混匀。不(bù)要使液(yè)體(tǐ)產生大量的(dí)泡沫(mò)，以免加樣(yàng)時(shí)加(jiā)入大(dà)量的氣泡(pào)，產生(shēng)加樣(yàng)上(shàng)的誤差(chà)。
2． 根據(jù)待(dài)測樣品數量加上標(biāo)準品的數量(liáng)決(jué)定(dìng)所(suǒ)需的(dí)板(bǎn)條數。每個標準品(pǐn)和空(kōng)白孔建議做(zuò)復孔(kǒng)。每個樣品根(gēn)據自(zì)己的(dí)數量來定，能(néng)使用(yòng)復(fù)孔(kǒng)的(dí)盡量做(zuò)復孔。
3． 加入稀釋(shì)好(hǎo)後的標準品50ul於反應(yīng)孔(kǒng)，加(jiā)入待測(cè)樣(yàng)品50ul於(yú)反應孔內。立即(jí)加(jiā)入50ul的(dí)生物素(sù)標記的抗體。蓋上膜(mó)板，輕輕振(zhèn)蕩混匀，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔(kǒng)內(nèi)液體(tǐ)，每孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌(dí)液，振蕩30秒，甩(shuǎi)去洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸水紙拍幹(gān)。重復(fù)此操作3次。如(rú)果(guǒ)用(yòng)洗板機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次數(shù)增(zēng)加(jiā)一次。
5． 每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入(rù)80ul的(dí)親(qīn)和鏈(liàn)酶素-HRP，輕輕(qīng)振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)30分(fēn)鐘。
6． 甩(shuǎi)去孔內液體，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸(xī)水紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復(fù)此(cǐ)操作3次(cì)。如果用洗(xǐ)板機洗滌(dí)，洗滌次數增(zēng)加一(yī)次(cì)。
7． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)底物(wù)A，B各50ul，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀，37℃溫育(yù)10分鐘。避(bì)免光照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶標板(bǎn)，迅(xùn)速加入(rù)50ul終止液，加入終止液後(hòu)應立(lì)即(jí)測定(dìng)結果。
9． 在(zài)450nm波長處(chǔ)測(cè)定各孔的(dí)OD值(zhí)。

建議(yì)使(shǐ)用的實(shí)驗方(fāng)案
 標(biāo)準品濃度（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品
B 400 400 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
C 200 200 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
D 100 100 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品
F 25 25 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
G 0 0 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
H 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)

局限
6號(hào)標準品以上(shàng)的(dí)結(jié)果為非綫性的(dí)，根據(jù)此(cǐ)標準(zhǔn)曲綫無法(fǎ)得(dé)到的結果。

試(shì)劑(jì)盒性能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度：zui小(xiǎo)的檢(jiǎn)測濃(nóng)度小(xiǎo)於1號標準(zhǔn)品(pǐn)。稀釋度(dù)的綫(xiàn)性。樣品綫性(xìng)回(huí)歸與預(yù)期(qī)濃(nóng)度(dù)相關係數R值為0.990。
2. 特異性(xìng)：不與其(qí)它細胞(bāo)因子(zǐ)反應(yīng)。
3. 重(zhòng)復(fù)性(xìng)：板內，板(bǎn)間變異係數均(jūn)小(xiǎo)於10%。

結 果(guǒ) 判 斷 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀(yí)器值：於波(bō)長450nm的(dí)酶標(biāo)儀上讀取各孔(kǒng)的(dí)OD值

2，以吸光(guāng)度OD值為(wéi)縱(zòng)坐標(biāo)（Y），相(xiāng)應的IFN-γ標(biāo)準品濃度(dù)為橫坐(zuò)標（X），做得相應(yīng)的(dí)曲(qū)綫(xiàn)，樣品的IFN-γ含量可根據其(qí)OD值(zhí)由(yóu)標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫換算(suàn)出相(xiāng)應的濃度(dù)。

3，檢(jiǎn)測(cè)值(zhí)範圍：0-800pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml