大鼠(shǔ) （Rat） 幹(gān)擾素-α（IFN-α）ELISA 檢測(cè)試(shì)劑盒(hé)
本(běn)試(shì)劑僅(jǐn)供研究(jiū)使(shǐ)用(yòng) 標(biāo)本：血(xiě)清或(huò)血(xiě)漿(jiāng)

試驗原理：
IFN-α試(shì)劑(jì)盒是固相(xiāng)夾(jiā)心(xīn)法酶聯免(miǎn)疫吸(xī)附(fù)實驗（ELISA）.已知(zhī)IFN-α濃度的(dí)標(biāo)準品
，未(wèi)知濃度的樣品(pǐn)加入微孔(kǒng)酶標(biāo)板(bǎn)內(nèi)進行檢(jiǎn)測(cè)。先(xiān)將(jiāng)IFN-α和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的抗(kàng)體同時(shí)溫育。洗(xǐ)滌(dí)後，加入(rù)親(qīn)和素標記過的HRP。再經過(guò)溫育(yù)和洗滌，去除未結合的酶結合(hé)物(wù)，然後加入(rù)底(dǐ)物A
，B，和酶(méi)結合(hé)物同時作(zuò)用(yòng)。產(chǎn)生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏(yán)色的(dí)深(shēn)淺(qiǎn)和(hé)樣品中IFN-α的濃(nóng)度呈比(bǐ)例(lì)關係。

試劑(jì)盒(hé)內容(róng)及(jí)其配(pèi)製
試(shì)劑盒成份（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔(kǒng)配置(zhì) 48孔配(pèi)置 配(pèi)製(zhì)
96/48人(rén)份酶標板(bǎn) 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半塊板（48T） 即(jí)用型
塑(sù)料(liào)膜板蓋 1塊 半塊 即用(yòng)型
標準(zhǔn)品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說明(míng)書進行稀稀(xī)
空(kōng)白對(duì)照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
標準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)緩衝液(yè) 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型
生物素標記(jì)的抗(kàng)IFN-α抗體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
親(qīn)和鏈酶(méi)素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型
洗(xǐ)滌緩(huǎn)衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明書(shū)進行(háng)稀(xī)釋(shì)
底物(wù)A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底(dǐ)物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
終止液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

自(zì)備材料(liào)
1． 蒸餾水。
2． 加(jiā)樣(yàng)器：5ul
，10ul
，50ul
，100ul
，200
，500ul
，1000ul。
3． 振蕩器及(jí)磁力(lì)攪拌器等(děng)。

安全性
1． 避免(miǎn)直接接觸終(zhōng)止(zhǐ)液和(hé)底物A
，B。一(yī)旦接觸到這些(xiē)液體，請(qǐng)盡快用水衝洗。
2． 實驗中不要吃喝(hē)
，抽煙(yān)或(huò)使(shǐ)用化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要(yào)用嘴(zuǐ)吸(xī)取試(shì)劑(jì)盒裏的(dí)任何(hé)成份。

操作注意事項
1． 試劑(jì)應(yīng)按(àn)標簽說(shuō)明(míng)書(shū)儲存(cún)，使用前恢復到室溫(wēn)。稀(xī)稀過後的標(biāo)準品(pǐn)應丟棄(qì)，不可保存。
2． 實(shí)驗(yàn)中(zhōng)不(bù)用的(dí)板條應立(lì)即(jí)放回包裝袋中(zhōng)，密(mì)封保(bǎo)存，以(yǐ)免變(biàn)質(zhì)。
3． 不(bù)用(yòng)的其它試劑(jì)應(yīng)包裝好或(huò)蓋(gài)好。不(bù)同(tóng)批(pī)號的試(shì)劑不要混用。保質(zhì)前使(shǐ)用(yòng)。
4． 使(shǐ)用一(yī)次性(xìng)的吸(xī)頭以免(miǎn)交叉汙染，吸取終止液和底(dǐ)物(wù)A
，B液時，避(bì)免使(shǐ)用(yòng)帶金屬部(bù)分的加樣器。
5． 使用(yòng)幹淨的(dí)塑(sù)料(liào)容(róng)器配置洗滌(dí)液。使用前(qián)充分混(hùn)匀(yún)試(shì)劑盒裏的(dí)各(gè)種成份及樣(yàng)品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍(pāi)幹(gān)，不(bù)要將(jiāng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)直接(jiē)放入(rù)酶(méi)標(biāo)反(fǎn)應孔(kǒng)中(zhōng)吸水。
7． 底(dǐ)物(wù)A應揮發，避免長時(shí)間打開蓋(gài)子。底(dǐ)物(wù)B對(duì)光敏感，避(bì)免長時(shí)間(jiān)暴露(lòu)於光下(xià)。避免用手(shǒu)接(jiē)觸，有毒。實驗完成(chéng)後應立(lì)即讀取OD值。
8． 加(jiā)入試(shì)劑(jì)的順序應一致，以保(bǎo)證所(suǒ)有反(fǎn)應(yīng)板(bǎn)孔溫育(yù)的時間(jiān)一樣。
9． 按(àn)照(zhào)說(shuō)明書中(zhōng)標明的時(shí)間
，加(jiā)液的量(liáng)及順序進行溫育操(cāo)作。

樣(yàng)品(pǐn)收集(jí)
，處理(lǐ)及(jí)保存方法
1
， 血清-----操作(zuò)過(guò)程(chéng)中避免(miǎn)任(rèn)何(hé)細胞(bāo)刺激。使用不(bù)含(hán)熱(rè)原和(hé)內(nèi)毒素(sù)的試管(guǎn)。收集血液後(hòu)，1000×g離心10分鐘將(jiāng)血(xiě)清(qīng)和紅(hóng)細胞(bāo)迅(xùn)速(sù)小(xiǎo)心(xīn)地(dì)分(fēn)離。
2
， 血(xiě)漿-----EDTA
，檸檬酸鹽(yán)
，肝(gān)素(sù)血(xiě)漿可(kě)用(yòng)於檢(jiǎn)測(cè)。1000×g離(lí)心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆粒。
3
， 細(xì)胞上(shàng)清(qīng)液---1000×g離(lí)心10分鐘去(qù)除(chú)顆(kē)粒(lì)和(hé)聚(jù)合(hé)物。
4
， 保存------如果(guǒ)樣品不立(lì)即使用(yòng)，應將其分(fēn)成小(xiǎo)部(bù)分-70 ℃保存(cún)，避免反(fǎn)復(fù)冷凍。盡可(kě)能(néng)的不要使用溶(róng)血(xiě)或高血脂(zhī)血(xiě)。如果血清中大(dà)量顆粒，檢(jiǎn)測(cè)前先離心(xīn)或過濾(lǜ)。不(bù)要在37℃或更(gēng)高(gāo)的溫度加熱解(jiě)凍。應在室(shì)溫下解凍並(bìng)確保樣品均(jūn)匀地(dì)充分解(jiě)凍(dòng)。

試劑的準備
1． 標準品：標準品(pǐn)的係列(liè)稀(xī)釋(shì)應(yīng)在實驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備(bèi)，不能儲存。稀(xī)釋前將(jiāng)標準品(pǐn)振蕩混匀。稀釋比例按下(xià)表中(zhōng)進行：
800 pg/ml （6號標準品） 原(yuán)倍(bèi)濃度(dù)不用稀釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入50ul。
400 pg/ml （5號標準品） 100ul的原(yuán)倍(bèi)標(biāo)準品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液
200 pg/ml （4號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的5號(hào)標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號標準(zhǔn)品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標準品(pǐn)稀釋液
0 pg/ml （空(kōng)白(bái)對(duì)照） 原始(shǐ)濃度不(bù)用稀釋直接(jiē)加(jiā)入50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩(huǎn)衝液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍(bèi)稀(xī)釋。

操作步驟
1． 使用(yòng)前，將所有試劑充(chōng)分(fēn)混(hùn)匀。不要使液體(tǐ)產(chǎn)生(shēng)大(dà)量的泡沫(mò)，以免(miǎn)加樣時(shí)加(jiā)入(rù)大量的(dí)氣泡(pào)，產生加(jiā)樣(yàng)上的誤(wù)差(chà)。
2． 根據(jù)待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)數量(liáng)加上標準品(pǐn)的數(shù)量決(jué)定所需(xū)的板(bǎn)條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔(kǒng)建(jiàn)議做復孔。每(měi)個(gè)樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據自己(jǐ)的(dí)數量來定，能(néng)使用復(fù)孔的(dí)盡量(liáng)做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入稀釋好(hǎo)後(hòu)的(dí)標準(zhǔn)品50ul於(yú)反應孔
，加入(rù)待(dài)測樣(yàng)品50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)內。立即加入50ul的生物素(sù)標(biāo)記的抗體。蓋(gài)上膜板(bǎn)，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫(wēn)育1小時。
4． 甩(shuǎi)去孔內液(yè)體，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液，振蕩(dàng)30秒，甩去洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸水紙拍(pāi)幹(gān)。重(zhòng)復此操(cāo)作(zuò)3次。如果(guǒ)用(yòng)洗(xǐ)板機(jī)洗滌，洗滌次(cì)數增加一次(cì)。
5． 每孔加(jiā)入80ul的(dí)親和鏈酶素-HRP，輕輕振(zhèn)蕩混匀，37℃溫育30分鐘(zhōng)。
6． 甩(shuǎi)去(qù)孔(kǒng)內液體，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè)，振蕩(dàng)30秒，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌液(yè)，用吸(xī)水紙拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如果用洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次數增(zēng)加一次。
7． 每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入底物A
，B各50ul，輕(qīng)輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育10分(fēn)鐘(zhōng)。避(bì)免光(guāng)照。
8． 取(qǔ)出酶標板，迅速(sù)加(jiā)入(rù)50ul終止液，加入終止(zhǐ)液後應立即(jí)測定結(jié)果(guǒ)。
9． 在450nm波長處(chǔ)測定(dìng)各(gè)孔的OD值(zhí)。

建(jiàn)議使用的實(shí)驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃(nóng)度（pg/ml） 
A 800 800 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
B 400 400 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn)
C 200 200 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
D 100 100 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
F 25 25 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
G 0 0 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
H 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品

局(jú)限(xiàn)
6號標(biāo)準品以上的結果為(wéi)非綫性的，根據此標(biāo)準(zhǔn)曲綫無(wú)法(fǎ)得到(dào)的(dí)結果。

試劑(jì)盒性能(néng)
1. 靈敏度：zui小的(dí)檢(jiǎn)測(cè)濃(nóng)度小(xiǎo)於1號(hào)標(biāo)準品。稀釋度(dù)的綫性(xìng)。樣品綫(xiàn)性(xìng)回歸與預期濃度(dù)相(xiāng)關(guān)係(xì)數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其(qí)它細胞(bāo)因(yīn)子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重(zhòng)復性：板內
，板(bǎn)間變異係(xì)數(shù)均小於10%。

結(jié) 果(guǒ) 判 斷(duàn) 與(yǔ) 分 析
1
，儀器值(zhí)：於(yú)波長(cháng)450nm的酶(méi)標儀上讀(dú)取各孔的(dí)OD值

2
，以(yǐ)吸光(guāng)度OD值為縱坐(zuò)標(biāo)（Y），相(xiāng)應的(dí)IFN-α標準(zhǔn)品濃度為(wéi)橫(héng)坐(zuò)標（X），做得相應的曲綫，樣品(pǐn)的(dí)IFN-α含(hán)量可根據其(qí)OD值由(yóu)標準曲綫(xiàn)換(huàn)算出相應(yīng)的(dí)濃度(dù)。

3
，檢(jiǎn)測值(zhí)範圍：0-800pg/ml

4
，敏(mǐn)感(gǎn)度： 1.0 pg/ml