大(dà)鼠(shǔ)（Rat）促甲狀腺(xiàn)激(jī)素釋放(fàng)激素（TRH）ELISA 檢(jiǎn)測試(shì)劑盒
本(běn)試劑僅(jǐn)供(gōng)研究使(shǐ)用(yòng) 標(biāo)本：血清(qīng)或血漿

試(shì)驗(yàn)原(yuán)理(lǐ)：
TRH試(shì)劑(jì)盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫(yì)吸附實(shí)驗（ELISA）.已知TRH濃(nóng)度的標準(zhǔn)品(pǐn)，未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣(yàng)品加(jiā)入(rù)微孔(kǒng)酶標板(bǎn)內進行(háng)檢測(cè)。先將(jiāng)TRH和生(shēng)物(wù)素標記的(dí)抗(kàng)體同(tóng)時(shí)溫育(yù)。洗滌後(hòu)
，加入親和素標(biāo)記(jì)過(guò)的HRP。再(zài)經(jīng)過溫育和洗滌
，去除(chú)未(wèi)結合的酶(méi)結合物
，然後(hòu)加入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B
，和(hé)酶結(jié)合物同(tóng)時作(zuò)用。產(chǎn)生顏(yán)色。顏(yán)色的深淺和樣品(pǐn)中TRH的(dí)濃度(dù)呈比(bǐ)例關(guān)係。

試(shì)劑盒內容(róng)及其配製(zhì)
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔(kǒng)配(pèi)置 48孔(kǒng)配置 配製
96/48人份酶(méi)標(biāo)板 1塊板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊板(bǎn)（48T） 即用型(xíng)
塑料(liào)膜(mó)板蓋 1塊 半塊 即用(yòng)型
標準(zhǔn)品：24ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說明書進行稀(xī)稀(xī)
空(kōng)白(bái)對照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物(wù)素標記的抗TRH抗(kàng)體 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
親和鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
洗滌緩衝液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
底(dǐ)物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
終止(zhǐ)液 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型

自備(bèi)材(cái)料
1． 蒸(zhēng)餾水。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器(qì)及(jí)磁力攪(jiǎo)拌(bàn)器等。

安(ān)全性(xìng)
1． 避(bì)免直接接(jiē)觸(chù)終止(zhǐ)液和(hé)底物(wù)A，B。一(yī)旦(dàn)接觸(chù)到這些液(yè)體
，請盡快(kuài)用水衝洗。
2． 實驗中不要吃(chī)喝，抽煙或使(shǐ)用化妝品。
3． 不(bù)要用嘴(zuǐ)吸取試(shì)劑(jì)盒裏的任何(hé)成(chéng)份。

操作(zuò)注(zhù)意事(shì)項
1． 試劑應按(àn)標簽(qiān)說明書儲(chǔ)存
，使(shǐ)用前恢復到室(shì)溫。稀稀(xī)過(guò)後(hòu)的標準(zhǔn)品應(yīng)丟(diū)棄
，不可保存。
2． 實驗(yàn)中不用的(dí)板(bǎn)條(tiáo)應(yīng)立(lì)即放回(huí)包(bāo)裝(zhuāng)袋中(zhōng)
，密封(fēng)保存(cún)
，以免變質(zhì)。
3． 不用的其(qí)它(tā)試劑(jì)應包(bāo)裝(zhuāng)好(hǎo)或蓋好(hǎo)。不(bù)同批號的(dí)試劑不(bù)要混用。保(bǎo)質(zhì)前(qián)使(shǐ)用(yòng)。
4． 使用一(yī)次性的(dí)吸(xī)頭以免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染
，吸(xī)取(qǔ)終(zhōng)止液和底物(wù)A，B液(yè)時
，避免(miǎn)使用帶金屬部分(fēn)的(dí)加(jiā)樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹(gān)淨的塑(sù)料容器配置(zhì)洗滌(dí)液(yè)。使(shǐ)用前(qián)充分(fēn)混匀(yún)試劑(jì)盒裏的各種成份(fèn)及樣(yàng)品。
6． 洗滌酶(méi)標板時應(yīng)充分拍幹
，不要將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙直接放入(rù)酶(méi)標(biāo)反應(yīng)孔中(zhōng)吸水。
7． 底(dǐ)物(wù)A應揮發
，避(bì)免長時間打(dǎ)開蓋子(zǐ)。底物B對(duì)光敏感
，避免(miǎn)長(cháng)時(shí)間(jiān)暴(bào)露於(yú)光(guāng)下。避免(miǎn)用手接觸
，有(yǒu)毒(dú)。實驗完成(chéng)後應(yīng)立即讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加入試(shì)劑(jì)的順序應一(yī)致
，以保證(zhèng)所(suǒ)有反(fǎn)應(yīng)板孔(kǒng)溫(wēn)育的時間(jiān)一樣(yàng)。
9． 按(àn)照(zhào)說(shuō)明(míng)書中(zhōng)標(biāo)明的時間(jiān)，加液(yè)的量(liáng)及(jí)順(shùn)序進(jìn)行(háng)溫育操作。

樣品(pǐn)收集(jí)，處(chǔ)理及(jí)保(bǎo)存(cún)方(fāng)法
1， 血(xiě)清(qīng)-----操(cāo)作過(guò)程中(zhōng)避免任何細(xì)胞(bāo)刺激。使(shǐ)用不含(hán)熱原和內毒(dú)素的試管。收集血(xiě)液(yè)後(hòu)
，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘將血清(qīng)和(hé)紅(hóng)細(xì)胞迅速小心地分(fēn)離(lí)。
2， 血(xiě)漿(jiāng)-----EDTA，檸檬(méng)酸(suān)鹽(yán)，肝素血漿可(kě)用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆粒(lì)。
3， 細胞上(shàng)清液---1000×g離(lí)心(xīn)10分(fēn)鐘去除(chú)顆粒和聚合(hé)物。
4， 保存------如(rú)果樣品不立(lì)即使用
，應將其分(fēn)成小部分(fēn)-70 ℃保存
，避免(miǎn)反復冷(lěng)凍(dòng)。盡(jìn)可能的不(bù)要(yào)使用(yòng)溶血(xiě)或高血脂(zhī)血。如(rú)果血(xiě)清中(zhōng)大量(liáng)顆粒
，檢測(cè)前(qián)先離心(xīn)或過濾。不(bù)要(yào)在(zài)37℃或更高的(dí)溫度加熱(rè)解凍。應(yīng)在(zài)室溫(wēn)下解(jiě)凍(dòng)並(bìng)確保樣(yàng)品均匀地(dì)充(chōng)分解凍。

試(shì)劑(jì)的準備
1． 標準品：標準(zhǔn)品的(dí)係列(liè)稀釋(shì)應在(zài)實驗時(shí)準備(bèi)
，不能(néng)儲(chǔ)存(cún)。稀釋(shì)前將標(biāo)準品(pǐn)振蕩(dàng)混匀(yún)。稀(xī)釋比(bǐ)例(lì)按(àn)下(xià)表(biǎo)中(zhōng)進行：
24 ng/ml （6號(hào)標準品） 原倍濃(nóng)度不用稀釋直(zhí)接(jiē)加(jiā)入50ul。
12 ng/ml （5號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的原(yuán)倍標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋液(yè)
6.0 ng/ml （4號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)5號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液
3.0 ng/ml （3號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入(rù)100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液
1.5 ng/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的(dí)3號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品稀(xī)釋液
0.75 ng/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的2號標準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準品稀釋(shì)液
0 ng/ml （空(kōng)白(bái)對(duì)照） 原始(shǐ)濃度不(bù)用稀釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入50ul。

2． 洗滌緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)（50×）的稀釋：蒸餾水(shuǐ)50倍(bèi)稀(xī)釋。

操作步(bù)驟(zhòu)
1． 使(shǐ)用(yòng)前(qián)
，將所(suǒ)有(yǒu)試(shì)劑充分混匀。不(bù)要使(shǐ)液體(tǐ)產(chǎn)生(shēng)大量(liáng)的(dí)泡沫(mò)
，以免(miǎn)加樣(yàng)時加入大量的(dí)氣泡
，產生加(jiā)樣(yàng)上的(dí)誤(wù)差(chà)。
2． 根(gēn)據待(dài)測樣品數量加(jiā)上標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)的數量(liáng)決定所需的板(bǎn)條數(shù)。每(měi)個(gè)標(biāo)準品和空白(bái)孔(kǒng)建議做復孔(kǒng)。每個樣品根(gēn)據自己的數量來定(dìng)
，能使用復孔的盡量(liáng)做復孔(kǒng)。
3． 加入(rù)稀釋好後(hòu)的(dí)標準品(pǐn)50ul於反應孔，加入待測樣品50ul於(yú)反(fǎn)應(yīng)孔內。立即加入50ul的(dí)生物素標(biāo)記的抗體。蓋(gài)上(shàng)膜板(bǎn)
，輕輕(qīng)振蕩混匀(yún)
，37℃溫(wēn)育(yù)1小(xiǎo)時。
4． 甩去孔內液(yè)體(tǐ)
，每孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌(dí)液
，振(zhèn)蕩(dàng)30秒
，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液
，用(yòng)吸水紙(zhǐ)拍幹。重復此操作3次。如(rú)果用洗(xǐ)板機洗滌
，洗(xǐ)滌次數(shù)增加(jiā)一次。
5． 每孔加入(rù)80ul的親和鏈酶(méi)素-HRP
，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混匀
，37℃溫(wēn)育(yù)30分鐘。
6． 甩去(qù)孔(kǒng)內液(yè)體
，每(měi)孔加(jiā)滿洗滌(dí)液
，振蕩(dàng)30秒
，甩(shuǎi)去(qù)洗滌(dí)液
，用吸水紙拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操作(zuò)3次。如果(guǒ)用洗板機(jī)洗(xǐ)滌
，洗(xǐ)滌次(cì)數(shù)增加(jiā)一次。
7． 每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)底物(wù)A，B各50ul
，輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)
，37℃溫育10分(fēn)鐘(zhōng)。避免光(guāng)照(zhào)。
8． 取出(chū)酶(méi)標板
，迅速(sù)加入50ul終(zhōng)止液
，加入(rù)終止(zhǐ)液(yè)後應立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波(bō)長(cháng)處測定各孔(kǒng)的OD值。

建(jiàn)議使用的實驗(yàn)方案
 標準(zhǔn)品濃度(dù)（ng/ml） 
A 24 24 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品
B 12 12 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
C 6.0 6.0 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
D 3.0 3.0 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
E 1.5 1.5 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
F 0.75 0.75 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
H 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)

局(jú)限
6號標準(zhǔn)品以上的結果為(wéi)非綫性的(dí)
，根據(jù)此(cǐ)標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)無法得到(dào)的結果。

試劑(jì)盒性(xìng)能
1. 靈(líng)敏(mǐn)度：zui小的檢(jiǎn)測(cè)濃(nóng)度小於(yú)1號標(biāo)準品。稀釋度的(dí)綫性。樣(yàng)品綫性(xìng)回歸(guī)與(yǔ)預(yù)期(qī)濃(nóng)度(dù)相關係數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異性：不與(yǔ)其(qí)它(tā)細胞(bāo)因(yīn)子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復性(xìng)：板(bǎn)內(nèi)，板間變異係數均小於10%。

結 果(guǒ) 判(pàn) 斷(duàn) 與 分(fēn) 析
1，儀器值：於波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取(qǔ)各孔的OD值(zhí)

2，以吸(xī)光度OD值為縱(zòng)坐標（Y）
，相應的(dí)TRH標(biāo)準品濃度(dù)為橫(héng)坐標（X）
，做得(dé)相應(yīng)的曲(qū)綫(xiàn)
，樣品的TRH含(hán)量(liáng)可根(gēn)據其(qí)OD值由(yóu)標準曲(qū)綫(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。

3，檢測值範(fàn)圍：0-24ng/ml

4，敏感度(dù)： 0.1 ng/ml