試驗(yàn)原理(lǐ)：
IL-17試劑(jì)盒是固(gù)相夾心法(fǎ)酶聯免疫吸(xī)附(fù)實(shí)驗（ELISA）.已知(zhī)IL-17濃度的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)，未知濃度的樣品(pǐn)加(jiā)入微孔酶(méi)標(biāo)板內進行檢測。先(xiān)將IL-17和生(shēng)物素(sù)標記的(dí)抗體(tǐ)同時(shí)溫育(yù)。洗滌後，加(jiā)入親和素(sù)標記(jì)過的HRP。再(zài)經過溫(wēn)育(yù)和洗滌，去除未(wèi)結合的酶結(jié)合物，然(rán)後(hòu)加入底物A，B，和酶(méi)結(jié)合(hé)物同時作(zuò)用。產生(shēng)顏(yán)色。顏色的深淺(qiǎn)和樣品(pǐn)中IL-17的(dí)濃度(dù)呈(chéng)比(bǐ)例(lì)關係。

試(shì)劑盒(hé)內(nèi)容(róng)及其配製(zhì)
試(shì)劑盒成(chéng)份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配置 48孔配置 配(pèi)製(zhì)
96/48人份(fèn)酶(méi)標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊(kuài)板（48T） 即用(yòng)型
塑(sù)料膜板蓋 1塊 半塊 即用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準品(pǐn)：800pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說(shuō)明書進行稀稀(xī)
空(kōng)白(bái)對照 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用(yòng)型
標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)緩衝(chōng)液(yè) 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型(xíng)
生物(wù)素標(biāo)記的抗IL-17抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
親(qīn)和鏈(liàn)酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說明(míng)書(shū)進(jìn)行稀(xī)釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
底(dǐ)物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
終止(zhǐ)液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)

自(zì)備(bèi)材料(liào)
1． 蒸(zhēng)餾水。
2． 加(jiā)樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器及磁(cí)力(lì)攪拌(bàn)器等(děng)。

安(ān)全(quán)性
1． 避(bì)免(miǎn)直接(jiē)接觸終止液和底物(wù)A，B。一旦接觸到這些液體，請盡快(kuài)用(yòng)水衝洗(xǐ)。
2． 實驗中不要吃(chī)喝，抽煙或使用(yòng)化妝(zhuāng)品。
3． 不(bù)要用嘴(zuǐ)吸取(qǔ)試(shì)劑盒裏的任何(hé)成(chéng)份(fèn)。

操作注(zhù)意事(shì)項
1． 試劑(jì)應按(àn)標(biāo)簽說明(míng)書(shū)儲存，使(shǐ)用(yòng)前恢(huī)復到室溫(wēn)。稀稀(xī)過(guò)後的標準品(pǐn)應丟(diū)棄(qì)，不(bù)可(kě)保(bǎo)存。
2． 實驗中(zhōng)不用(yòng)的(dí)板(bǎn)條應(yīng)立(lì)即放(fàng)回(huí)包裝袋(dài)中，密封(fēng)保存(cún)，以(yǐ)免變質。
3． 不用(yòng)的其(qí)它試劑(jì)應(yīng)包裝好(hǎo)或蓋(gài)好。不同批(pī)號(hào)的(dí)試劑不要混(hùn)用(yòng)。保質前(qián)使(shǐ)用。
4． 使用(yòng)一次(cì)性(xìng)的吸(xī)頭以(yǐ)免交叉汙(wū)染，吸取(qǔ)終(zhōng)止(zhǐ)液和底物(wù)A，B液時，避免使(shǐ)用(yòng)帶(dài)金(jīn)屬(shǔ)部分的(dí)加(jiā)樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用幹(gān)淨(jìng)的塑料(liào)容器配置(zhì)洗(xǐ)滌液(yè)。使(shǐ)用前(qián)充(chōng)分(fēn)混匀試劑(jì)盒裏(lǐ)的各種成份及樣品(pǐn)。
6． 洗滌酶(méi)標板(bǎn)時(shí)應(yīng)充(chōng)分(fēn)拍幹(gān)，不要(yào)將(jiāng)吸水(shuǐ)紙直(zhí)接放入酶(méi)標(biāo)反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng)吸(xī)水(shuǐ)。
7． 底物A應揮發(fā)，避(bì)免長(cháng)時(shí)間(jiān)打開蓋子。底物(wù)B對光(guāng)敏感，避免長時(shí)間暴(bào)露於(yú)光下。避(bì)免用手接觸，有(yǒu)毒。實(shí)驗(yàn)完(wán)成(chéng)後應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入(rù)試(shì)劑(jì)的順序應一(yī)致(zhì)，以保證(zhèng)所有反應板孔溫育(yù)的時(shí)間(jiān)一樣。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的(dí)時(shí)間，加液(yè)的量及(jí)順序進行溫(wēn)育(yù)操作(zuò)。

樣品(pǐn)收(shōu)集，處理(lǐ)及保存方法
1， 血(xiě)清(qīng)-----操作過程中(zhōng)避免(miǎn)任(rèn)何(hé)細(xì)胞(bāo)刺激。使用(yòng)不含(hán)熱原和內(nèi)毒(dú)素(sù)的(dí)試管。收集血(xiě)液後(hòu)，1000×g離心10分(fēn)鐘(zhōng)將血清和紅細胞迅(xùn)速(sù)小(xiǎo)心(xīn)地(dì)分離(lí)。
2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬(méng)酸鹽，肝素血(xiě)漿可(kě)用於檢測。1000×g離心30分鐘去除(chú)顆粒。
3， 細胞(bāo)上(shàng)清液---1000×g離心10分鐘去(qù)除(chú)顆粒(lì)和聚(jù)合(hé)物(wù)。
4， 保(bǎo)存(cún)------如果樣品(pǐn)不(bù)立即(jí)使用，應(yīng)將(jiāng)其分(fēn)成小部分(fēn)-70 ℃保存(cún)，避免反復(fù)冷凍(dòng)。盡可(kě)能(néng)的不(bù)要使用溶血(xiě)或(huò)高血脂血(xiě)。如果血(xiě)清中大量(liáng)顆粒，檢測前先離心(xīn)或過濾。不要在37℃或更高(gāo)的溫度加(jiā)熱解(jiě)凍。應在室(shì)溫(wēn)下(xià)解(jiě)凍(dòng)並(bìng)確保(bǎo)樣品(pǐn)均匀(yún)地充(chōng)分(fēn)解(jiě)凍。

試劑(jì)的(dí)準(zhǔn)備
1． 標準品(pǐn)：標(biāo)準品(pǐn)的係列稀(xī)釋應(yīng)在實驗(yàn)時準備，不(bù)能(néng)儲(chǔ)存(cún)。稀(xī)釋(shì)前將(jiāng)標準品(pǐn)振蕩混(hùn)匀(yún)。稀(xī)釋比例(lì)按下(xià)表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標準(zhǔn)品） 原倍(bèi)濃度不用稀釋(shì)直(zhí)接加入50ul。
400 pg/ml （5號標準品(pǐn)） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋(shì)液
200 pg/ml （4號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)5號(hào)標準品加入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
50 pg/ml （2號標準(zhǔn)品） 100ul的3號標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
25 pg/ml （1號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的2號標準品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標準品稀釋液(yè)
0 pg/ml （空白對照(zhào)） 原始濃(nóng)度不用稀釋直接(jiē)加(jiā)入(rù)50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩衝(chōng)液(yè)（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋(shì)。

操作(zuò)步(bù)驟
1． 使用(yòng)前，將所有試劑(jì)充分混(hùn)匀(yún)。不(bù)要使液體產生大量(liáng)的(dí)泡(pào)沫，以免加(jiā)樣(yàng)時加(jiā)入大量(liáng)的氣(qì)泡(pào)，產生(shēng)加樣上的(dí)誤(wù)差(chà)。
2． 根(gēn)據(jù)待(dài)測(cè)樣(yàng)品數(shù)量加(jiā)上標(biāo)準品(pǐn)的(dí)數量(liáng)決(jué)定(dìng)所(suǒ)需(xū)的(dí)板條(tiáo)數。每(měi)個(gè)標準品(pǐn)和空白孔(kǒng)建議(yì)做復(fù)孔(kǒng)。每個(gè)樣(yàng)品根(gēn)據(jù)自(zì)己的(dí)數量來定，能使用(yòng)復(fù)孔的盡量做復孔。
3． 加入稀釋好後(hòu)的(dí)標(biāo)準品50ul於反(fǎn)應(yīng)孔，加入(rù)待測樣品(pǐn)50ul於(yú)反應孔(kǒng)內。立(lì)即(jí)加(jiā)入50ul的(dí)生(shēng)物素標記(jì)的(dí)抗體。蓋上膜(mó)板，輕輕振蕩混匀，37℃溫(wēn)育1小時(shí)。
4． 甩去(qù)孔(kǒng)內(nèi)液體，每(měi)孔加(jiā)滿洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩30秒，甩去(qù)洗滌(dí)液，用(yòng)吸水紙拍幹(gān)。重復此(cǐ)操作3次(cì)。如果(guǒ)用洗板機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌次(cì)數(shù)增(zēng)加一次(cì)。
5． 每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)80ul的(dí)親和鏈酶(méi)素-HRP，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育30分(fēn)鐘(zhōng)。
6． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內(nèi)液(yè)體(tǐ)，每孔加滿洗滌(dí)液，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗滌液，用吸水(shuǐ)紙拍(pāi)幹。重(zhòng)復(fù)此操作3次。如果用(yòng)洗(xǐ)板機洗(xǐ)滌(dí)，洗滌(dí)次(cì)數增加(jiā)一(yī)次。
7． 每孔加入底物(wù)A，B各50ul，輕輕(qīng)振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫育(yù)10分鐘。避免(miǎn)光(guāng)照(zhào)。
8． 取出(chū)酶(méi)標(biāo)板，迅速加(jiā)入50ul終(zhōng)止液，加(jiā)入(rù)終止(zhǐ)液(yè)後應(yīng)立(lì)即(jí)測(cè)定結果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處(chǔ)測定(dìng)各孔的OD值。

建(jiàn)議使用的(dí)實驗方(fāng)案(àn)
 標準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度（pg/ml） 
A 800 800 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
B 400 400 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
E 50 50 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品
F 25 25 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
G 0 0 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
H 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)

局限
6號標準品以上的(dí)結(jié)果為非(fēi)綫性的，根據此(cǐ)標準曲綫(xiàn)無法得(dé)到的(dí)結果。

試(shì)劑(jì)盒性能(néng)
1. 靈(líng)敏度：zui小(xiǎo)的檢測濃(nóng)度小於1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀(xī)釋度的(dí)綫性。樣(yàng)品(pǐn)綫性(xìng)回(huí)歸與預期(qī)濃度相(xiāng)關係數(shù)R值為(wéi)0.990。
2. 特異性：不與(yǔ)其(qí)它(tā)細胞因子(zǐ)反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復(fù)性(xìng)：板(bǎn)內，板間(jiān)變(biàn)異係(xì)數(shù)均(jūn)小於10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1，儀器值：於(yú)波長(cháng)450nm的酶標儀(yí)上(shàng)讀(dú)取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的OD值

2，以吸(xī)光(guāng)度(dù)OD值(zhí)為縱(zòng)坐標（Y），相應(yīng)的IL-17標準(zhǔn)品(pǐn)濃度為橫坐標（X），做得相應的曲(qū)綫(xiàn)，樣(yàng)品的IL-17含(hán)量(liáng)可根據其OD值(zhí)由標準(zhǔn)曲綫(xiàn)換算(suàn)出(chū)相應的(dí)濃度。

3，檢測(cè)值範圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏(mǐn)感度： 1.0 pg/ml