詳(xiáng)細(xì)介(jiè)紹(shào)：

 大(dà)鼠 （Rat）白(bái)細(xì)胞(bāo)介素(sù)-10（IL-10）ELISA 檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒
本(běn)試劑僅供研究使(shǐ)用  標本(běn)：血清

試(shì)驗原理：
IL-10試(shì)劑盒是(shì)固相(xiāng)夾(jiā)心(xīn)法(fǎ)酶聯(lián)免(miǎn)疫吸(xī)附(fù)實驗（ELISA）.已(yǐ)知IL-10濃度的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)，未知濃度(dù)的樣品加(jiā)入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-10和生物素標記的抗體同(tóng)時(shí)溫育。洗滌(dí)後，加入(rù)親和素(sù)標記(jì)過的(dí)HRP。再經過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合(hé)的(dí)酶結(jié)合物，然後加入(rù)底物A，B，和酶(méi)結合物同時(shí)作用(yòng)。產生顏色(sè)。顏色(sè)的深淺(qiǎn)和(hé)樣品(pǐn)中IL-10的濃(nóng)度呈比例(lì)關(guān)係。

試劑盒(hé)內容及(jí)其配製(zhì)
試劑(jì)盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置(zhì) 配(pèi)製
96/48人(rén)份酶標(biāo)板(bǎn) 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型(xíng)
塑(sù)料(liào)膜板(bǎn)蓋 1塊 半塊(kuài) 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用型
標準(zhǔn)品稀釋(shì)緩衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用型
生物(wù)素(sù)標記(jì)的抗(kàng)IL-10抗體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
親(qīn)和(hé)鏈酶素-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即用型(xíng)
洗滌(dí)緩(huǎn)衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明書進行稀釋
底物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
底(dǐ)物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
終(zhōng)止液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型

自備(bèi)材(cái)料
1． 蒸餾水(shuǐ)。
2． 加(jiā)樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩(dàng)器及磁(cí)力攪(jiǎo)拌(bàn)器等。

安全性
1． 避免直(zhí)接接(jiē)觸(chù)終止(zhǐ)液和(hé)底(dǐ)物A，B。一旦(dàn)接(jiē)觸(chù)到這些(xiē)液體(tǐ)，請盡快(kuài)用(yòng)水(shuǐ)衝洗(xǐ)。
2． 實(shí)驗(yàn)中(zhōng)不(bù)要(yào)吃(chī)喝(hē)，抽(chōu)煙或使用(yòng)化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要用嘴吸(xī)取試(shì)劑(jì)盒裏的任何成份。

操作注意(yì)事項
1． 試劑應按(àn)標簽說(shuō)明書儲存，使用(yòng)前恢復到室溫。稀(xī)稀(xī)過(guò)後(hòu)的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)應丟棄，不可保存(cún)。
2． 實驗中(zhōng)不用的板條(tiáo)應立即放回(huí)包裝(zhuāng)袋中，密封保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免(miǎn)變質。
3． 不用(yòng)的其它(tā)試劑應(yīng)包(bāo)裝好或蓋好。不同(tóng)批號的試劑(jì)不要(yào)混用(yòng)。保質(zhì)前使(shǐ)用(yòng)。
4． 使用一次(cì)性(xìng)的吸(xī)頭以(yǐ)免(miǎn)交叉(chā)汙(wū)染，吸取(qǔ)終(zhōng)止液(yè)和底(dǐ)物A，B液時，避免使用(yòng)帶金屬部(bù)分的加樣器(qì)。
5． 使用(yòng)幹(gān)淨(jìng)的塑(sù)料容器配(pèi)置洗滌液。使用前充分(fēn)混(hùn)匀試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的各(gè)種成份及樣品。
6． 洗(xǐ)滌酶標板(bǎn)時應(yīng)充(chōng)分(fēn)拍幹，不要將(jiāng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)直接放(fàng)入(rù)酶(méi)標(biāo)反應孔(kǒng)中吸(xī)水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物A應(yīng)揮發，避免(miǎn)長時間(jiān)打(dǎ)開蓋子。底物B對(duì)光敏(mǐn)感，避免(miǎn)長時(shí)間(jiān)暴露(lòu)於(yú)光下。避免用手接觸(chù)，有毒(dú)。實(shí)驗(yàn)完成(chéng)後應(yīng)立(lì)即讀(dú)取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試劑的順序(xù)應一致(zhì)，以保(bǎo)證所(suǒ)有反應板孔(kǒng)溫(wēn)育的時間(jiān)一(yī)樣(yàng)。
9． 按(àn)照(zhào)說(shuō)明書中(zhōng)標明(míng)的(dí)時(shí)間，加(jiā)液的量(liáng)及順序進(jìn)行(háng)溫育操(cāo)作。

樣品收集，處(chǔ)理及保(bǎo)存方(fāng)法
1， 血清-----操作(zuò)過程(chéng)中避(bì)免(miǎn)任(rèn)何細(xì)胞刺(cì)激(jī)。使用不含熱(rè)原(yuán)和內(nèi)毒素的試管。收集(jí)血液(yè)後(hòu)，1000×g離心10分鐘將血清和(hé)紅細(xì)胞(bāo)迅速小心(xīn)地(dì)分離(lí)。
2， 血(xiě)漿(jiāng)-----EDTA，檸檬(méng)酸(suān)鹽，肝(gān)素血(xiě)漿(jiāng)可用於檢測。1000×g離心30分(fēn)鐘(zhōng)去除顆粒(lì)。
3， 細(xì)胞上(shàng)清液---1000×g離心10分(fēn)鐘去除顆粒和聚(jù)合物。
4， 保(bǎo)存------如(rú)果(guǒ)樣品不立(lì)即使(shǐ)用，應將其分成小部分(fēn)-70 ℃保存，避(bì)免反復(fù)冷凍(dòng)。盡可(kě)能(néng)的不要使用(yòng)溶血(xiě)或高血(xiě)脂血(xiě)。如(rú)果(guǒ)血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不(bù)要(yào)在37℃或更(gēng)高(gāo)的(dí)溫度(dù)加熱(rè)解凍。應(yīng)在(zài)室(shì)溫下解凍(dòng)並(bìng)確保樣品均匀(yún)地(dì)充(chōng)分解凍(dòng)。

試劑的(dí)準(zhǔn)備(bèi)
1． 標(biāo)準品(pǐn)：標(biāo)準品(pǐn)的係(xì)列(liè)稀釋應在(zài)實驗(yàn)時準備(bèi)，不(bù)能(néng)儲存(cún)。稀(xī)釋(shì)前(qián)將標準品振(zhèn)蕩混匀。稀釋(shì)比例(lì)按(àn)下表(biǎo)中(zhōng)進行：
800 pg/ml （6號(hào)標準品(pǐn)） 原倍(bèi)濃度不用(yòng)稀(xī)釋(shì)直接(jiē)加入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的(dí)原倍標準品(pǐn)加入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準品） 100ul的(dí)5號(hào)標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)4號標準品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液
50 pg/ml （2號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的(dí)3號(hào)標(biāo)準品加(jiā)入100ul的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液
25 pg/ml （1號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)2號標準品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
0 pg/ml （空(kōng)白對(duì)照(zhào)） 原始濃(nóng)度不用(yòng)稀釋(shì)直(zhí)接(jiē)加入50ul。

2． 洗滌(dí)緩衝液(yè)（50×）的稀釋(shì)：蒸(zhēng)餾水(shuǐ)50倍稀(xī)釋。

操作(zuò)步(bù)驟(zhòu)
1． 使用前(qián)，將所有試(shì)劑充分混匀。不要使(shǐ)液體(tǐ)產(chǎn)生(shēng)大量(liáng)的(dí)泡(pào)沫(mò)，以(yǐ)免(miǎn)加樣時加入大(dà)量(liáng)的(dí)氣泡，產生加樣上(shàng)的(dí)誤(wù)差。
2． 根(gēn)據(jù)待測樣品(pǐn)數(shù)量(liáng)加上標(biāo)準品的(dí)數量(liáng)決(jué)定所(suǒ)需的板條(tiáo)數(shù)。每(měi)個(gè)標(biāo)準品(pǐn)和空(kōng)白孔建(jiàn)議(yì)做(zuò)復孔。每個樣品(pǐn)根(gēn)據自己(jǐ)的(dí)數量來定，能(néng)使用復孔的盡(jìn)量做復(fù)孔(kǒng)。
3． 加入稀釋好後的標(biāo)準品50ul於反(fǎn)應孔，加入待(dài)測樣品50ul於(yú)反(fǎn)應孔(kǒng)內。立即(jí)加入(rù)50ul的生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的(dí)抗體。蓋(gài)上膜板，輕輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫育(yù)1小時。
4． 甩(shuǎi)去(qù)孔(kǒng)內(nèi)液(yè)體(tǐ)，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液，振(zhèn)蕩(dàng)30秒，甩去洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸(xī)水紙拍幹(gān)。重復此操(cāo)作3次。如果(guǒ)用(yòng)洗板機(jī)洗(xǐ)滌(dí)，洗滌(dí)次(cì)數增加(jiā)一次。
5． 每孔加(jiā)入(rù)80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩(dàng)混匀，37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘。
6． 甩去(qù)孔內(nèi)液(yè)體，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗(xǐ)滌液，振蕩(dàng)30秒，甩(shuǎi)去洗滌液(yè)，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍(pāi)幹(gān)。重復(fù)此(cǐ)操(cāo)作(zuò)3次。如果用洗板機(jī)洗滌(dí)，洗滌次數增(zēng)加(jiā)一(yī)次(cì)。
7． 每(měi)孔加入底(dǐ)物(wù)A，B各50ul，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀，37℃溫(wēn)育10分鐘。避(bì)免(miǎn)光(guāng)照。
8． 取(qǔ)出酶(méi)標板，迅速加入(rù)50ul終(zhōng)止液，加入(rù)終(zhōng)止(zhǐ)液後應立(lì)即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處(chǔ)測定各(gè)孔的OD值。

建議(yì)使用(yòng)的實(shí)驗方案(àn)
 標(biāo)準品濃度（pg/ml） 
A 800 800 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 400 400 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
C 200 200 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品
D 100 100 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
E 50 50 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
F 25 25 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品
G 0 0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
H 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品

局限
6號標準品以上(shàng)的結果(guǒ)為(wéi)非綫性的，根據此(cǐ)標準曲(qū)綫(xiàn)無法得到(dào)的結(jié)果(guǒ)。

試劑盒(hé)性(xìng)能
1. 靈敏度：zui小的(dí)檢測(cè)濃(nóng)度小(xiǎo)於(yú)1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀(xī)釋度的綫(xiàn)性(xìng)。樣(yàng)品綫性(xìng)回歸與預期(qī)濃度相(xiāng)關(guān)係數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特異(yì)性(xìng)：不與(yǔ)其它(tā)細胞(bāo)因子(zǐ)反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內，板間(jiān)變異係數均(jūn)小於(yú)10%。

結 果 判 斷 與(yǔ) 分 析
1，儀器值：於(yú)波(bō)長450nm的酶標(biāo)儀(yí)上讀取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值

2，以(yǐ)吸光(guāng)度OD值為(wéi)縱坐(zuò)標（Y），相(xiāng)應(yīng)的(dí)IL-10標準品(pǐn)濃度為橫坐標（X），做得(dé)相應(yīng)的曲綫，樣(yàng)品(pǐn)的IL-10含量可根(gēn)據其OD值(zhí)由標準曲綫(xiàn)換算(suàn)出相(xiāng)應的(dí)濃度(dù)。

3，檢(jiǎn)測值範(fàn)圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml