試(shì)驗原(yuán)理：
IL-6試劑盒是固(gù)相夾心(xīn)法酶聯免疫吸(xī)附實驗（ELISA）.已(yǐ)知(zhī)IL-6濃(nóng)度的(dí)標準品，未知(zhī)濃度(dù)的樣品(pǐn)加入(rù)微孔酶(méi)標(biāo)板內進行(háng)檢(jiǎn)測。先(xiān)將IL-6和(hé)生物素(sù)標(biāo)記(jì)的抗體同(tóng)時溫育(yù)。洗(xǐ)滌後，加入(rù)親(qīn)和(hé)素標記過的HRP。再(zài)經(jīng)過(guò)溫育和(hé)洗(xǐ)滌，去(qù)除(chú)未(wèi)結合的(dí)酶結合物，然後(hòu)加(jiā)入(rù)底物A，B，和酶(méi)結合物(wù)同(tóng)時(shí)作(zuò)用。產(chǎn)生顏(yán)色(sè)。顏色的深淺和(hé)樣品(pǐn)中IL-6的濃(nóng)度呈比(bǐ)例關係(xì)。

試劑盒內容及其(qí)配製
試(shì)劑(jì)盒成(chéng)份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配置(zhì) 48孔(kǒng)配置(zhì) 配製
96/48人份酶(méi)標(biāo)板 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半塊(kuài)板（48T） 即(jí)用型
塑(sù)料膜(mó)板(bǎn)蓋 1塊 半塊(kuài) 即用型(xíng)
標準品(pǐn)：800pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說(shuō)明(míng)書進行稀(xī)稀(xī)
空(kōng)白對(duì)照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用型(xíng)
標準(zhǔn)品稀釋緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用(yòng)型
生物素(sù)標(biāo)記的抗IL-6抗(kàng)體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和(hé)鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗滌緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行(háng)稀(xī)釋
底物(wù)A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
底(dǐ)物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及(jí)磁(cí)力攪拌器等。

安全(quán)性
1． 避(bì)免直接接觸(chù)終止(zhǐ)液和底(dǐ)物A，B。一(yī)旦接觸到這些液(yè)體，請盡(jìn)快(kuài)用水衝洗(xǐ)。
2． 實驗中(zhōng)不要(yào)吃喝，抽(chōu)煙(yān)或(huò)使(shǐ)用化妝(zhuāng)品。
3． 不要用嘴吸取(qǔ)試(shì)劑(jì)盒裏(lǐ)的任何(hé)成份(fèn)。

操(cāo)作(zuò)注意事項
1． 試劑應按(àn)標簽說(shuō)明書(shū)儲存，使用(yòng)前恢(huī)復到(dào)室(shì)溫(wēn)。稀稀過(guò)後(hòu)的標準品應丟(diū)棄，不(bù)可(kě)保(bǎo)存(cún)。
2． 實驗中(zhōng)不用(yòng)的板條應(yīng)立即放(fàng)回包裝袋(dài)中，密封(fēng)保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免變(biàn)質。
3． 不(bù)用(yòng)的其它試(shì)劑(jì)應包(bāo)裝好或蓋好。不(bù)同(tóng)批號的試(shì)劑不(bù)要混用(yòng)。保(bǎo)質前使(shǐ)用(yòng)。
4． 使用(yòng)一次性(xìng)的吸(xī)頭以(yǐ)免交(jiāo)叉汙(wū)染，吸取(qǔ)終止(zhǐ)液和(hé)底物A，B液(yè)時，避(bì)免使用帶金(jīn)屬(shǔ)部分(fēn)的(dí)加(jiā)樣器(qì)。
5． 使用幹(gān)淨的塑(sù)料(liào)容(róng)器配置洗滌液。使用(yòng)前充分(fēn)混匀試(shì)劑盒裏(lǐ)的各(gè)種(zhǒng)成份(fèn)及(jí)樣(yàng)品。
6． 洗滌酶(méi)標(biāo)板(bǎn)時應(yīng)充(chōng)分(fēn)拍幹，不(bù)要(yào)將吸(xī)水紙(zhǐ)直接(jiē)放(fàng)入(rù)酶標反應孔中吸水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物A應(yīng)揮發，避(bì)免長時間打(dǎ)開蓋子。底(dǐ)物B對光(guāng)敏感，避免長時間暴露(lòu)於光下(xià)。避免用手接觸(chù)，有(yǒu)毒。實驗完成後(hòu)應立即讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試(shì)劑(jì)的順(shùn)序(xù)應一致(zhì)，以(yǐ)保證所(suǒ)有(yǒu)反應板孔溫育的時(shí)間(jiān)一樣(yàng)。
9． 按照說明(míng)書(shū)中標明的時間(jiān)，加液(yè)的量及順(shùn)序進行溫育操作(zuò)。

樣品收(shōu)集，處理及保(bǎo)存方(fāng)法
1， 血清-----操作過(guò)程中(zhōng)避免任(rèn)何細(xì)胞刺激。使(shǐ)用不(bù)含(hán)熱(rè)原和內(nèi)毒素(sù)的試管(guǎn)。收(shōu)集血(xiě)液(yè)後，1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)將血清(qīng)和紅細(xì)胞(bāo)迅速小心地分離。
2， 血漿-----EDTA，檸檬(méng)酸(suān)鹽(yán)，肝(gān)素血漿(jiāng)可(kě)用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測。1000×g離(lí)心(xīn)30分鐘去除顆粒(lì)。
3， 細胞(bāo)上清液(yè)---1000×g離心10分鐘去(qù)除顆(kē)粒和聚合物(wù)。
4， 保存(cún)------如(rú)果(guǒ)樣品不立(lì)即(jí)使用，應將其分(fēn)成(chéng)小(xiǎo)部(bù)分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避(bì)免反復(fù)冷(lěng)凍。盡(jìn)可(kě)能(néng)的(dí)不(bù)要(yào)使(shǐ)用(yòng)溶(róng)血或高血脂血。如(rú)果血清(qīng)中(zhōng)大(dà)量(liáng)顆(kē)粒，檢測(cè)前先離(lí)心(xīn)或(huò)過濾。不要在37℃或(huò)更(gēng)高的(dí)溫(wēn)度加(jiā)熱解(jiě)凍。應在室溫(wēn)下解(jiě)凍並確(què)保樣(yàng)品(pǐn)均匀地充(chōng)分(fēn)解凍(dòng)。

試劑的準備
1． 標(biāo)準品：標準(zhǔn)品的(dí)係列稀(xī)釋應(yīng)在(zài)實驗時準備(bèi)，不(bù)能儲存(cún)。稀(xī)釋前(qián)將標準品振蕩混匀。稀(xī)釋(shì)比例(lì)按下表中(zhōng)進(jìn)行：
800 pg/ml （6號標準品） 原(yuán)倍(bèi)濃(nóng)度(dù)不用稀釋(shì)直(zhí)接加(jiā)入(rù)50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的原(yuán)倍標(biāo)準品加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液
200 pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的(dí)4號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
50 pg/ml （2號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的3號(hào)標(biāo)準品加入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
25 pg/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)2號(hào)標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)液
0 pg/ml （空(kōng)白(bái)對(duì)照） 原始濃(nóng)度不用稀釋直(zhí)接加(jiā)入(rù)50ul。

2． 洗(xǐ)滌(dí)緩衝(chōng)液(yè)（50×）的稀(xī)釋(shì)：蒸餾(liù)水50倍稀釋。

操(cāo)作步(bù)驟
1． 使(shǐ)用前，將所(suǒ)有(yǒu)試(shì)劑(jì)充(chōng)分混匀。不要使(shǐ)液體產(chǎn)生(shēng)大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生(shēng)加(jiā)樣上的誤差。
2． 根據(jù)待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)數(shù)量(liáng)加(jiā)上標準品的(dí)數(shù)量決定所需的板(bǎn)條數(shù)。每個標準(zhǔn)品和(hé)空白孔(kǒng)建議(yì)做(zuò)復孔(kǒng)。每個(gè)樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據自己的數量來定，能(néng)使用復(fù)孔的(dí)盡量(liáng)做(zuò)復(fù)孔(kǒng)。
3． 加入(rù)稀釋好後(hòu)的標準品50ul於反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)，加入(rù)待(dài)測(cè)樣品50ul於(yú)反應(yīng)孔內(nèi)。立(lì)即加入50ul的(dí)生物素標記(jì)的抗體。蓋(gài)上(shàng)膜板，輕(qīng)輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀，37℃溫育(yù)1小時。
4． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液體，每(měi)孔加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，振(zhèn)蕩(dàng)30秒，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液，用吸(xī)水紙(zhǐ)拍(pāi)幹(gān)。重復此操(cāo)作3次(cì)。如(rú)果用洗板(bǎn)機洗滌(dí)，洗滌次(cì)數增(zēng)加一次。
5． 每孔加入80ul的(dí)親和鏈酶(méi)素(sù)-HRP，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘(zhōng)。
6． 甩(shuǎi)去孔內液體，每孔加滿洗(xǐ)滌液(yè)，振(zhèn)蕩30秒，甩去洗滌液(yè)，用吸(xī)水紙拍幹。重復此(cǐ)操作(zuò)3次。如果用(yòng)洗板機洗(xǐ)滌，洗滌次(cì)數(shù)增加一(yī)次(cì)。
7． 每孔(kǒng)加入底物A，B各(gè)50ul，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育10分鐘(zhōng)。避(bì)免(miǎn)光(guāng)照(zhào)。
8． 取出酶(méi)標板(bǎn)，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止液，加入(rù)終(zhōng)止(zhǐ)液後(hòu)應(yīng)立(lì)即(jí)測定(dìng)結果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處(chǔ)測定(dìng)各(gè)孔的OD值(zhí)。

建議(yì)使用的實驗方(fāng)案
 標(biāo)準品(pǐn)濃度（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 400 400 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
D 100 100 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品
G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品
H 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品

局(jú)限
6號標準(zhǔn)品(pǐn)以上的結果(guǒ)為(wéi)非(fēi)綫性的，根據此標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)無(wú)法得(dé)到(dào)的(dí)結果。

試劑盒(hé)性能
1. 靈敏度：zui小的(dí)檢測(cè)濃度小於(yú)1號標準(zhǔn)品(pǐn)。稀(xī)釋度(dù)的綫性。樣品綫性(xìng)回歸(guī)與預(yù)期(qī)濃度(dù)相關(guān)係(xì)數(shù)R值(zhí)為0.990。
2. 特(tè)異性：不(bù)與其(qí)它細胞(bāo)因子(zǐ)反應(yīng)。
3. 重復性(xìng)：板(bǎn)內，板間變(biàn)異(yì)係(xì)數(shù)均(jūn)小於10%。

結(jié) 果 判(pàn) 斷(duàn) 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀器值：於(yú)波長(cháng)450nm的(dí)酶(méi)標儀上讀取各孔的(dí)OD值

2，以吸(xī)光(guāng)度OD值為(wéi)縱坐標（Y），相應(yīng)的(dí)IL-6標準品濃(nóng)度為橫坐標（X），做得相應的曲(qū)綫(xiàn)，樣(yàng)品的IL-6含量(liáng)可(kě)根據其(qí)OD值由(yóu)標準(zhǔn)曲綫換(huàn)算出(chū)相應的(dí)濃度。

3，檢測值範圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏感(gǎn)度(dù)： 1.0 pg/ml