試(shì)驗原(yuán)理(lǐ)：
IL-5試劑盒是(shì)固相夾(jiā)心法(fǎ)酶聯免疫(yì)吸附實驗(yàn)（ELISA）.已知(zhī)IL-5濃度的(dí)標(biāo)準品(pǐn)，未知(zhī)濃(nóng)度的樣品(pǐn)加(jiā)入微孔酶(méi)標板(bǎn)內(nèi)進(jìn)行(háng)檢(jiǎn)測。先(xiān)將IL-5和(hé)生物素標記(jì)的(dí)抗體同(tóng)時溫育。洗滌後(hòu)
，加入親(qīn)和素(sù)標記過的HRP。再經(jīng)過溫育(yù)和(hé)洗(xǐ)滌
，去(qù)除(chú)未(wèi)結合的酶結(jié)合物
，然後加入(rù)底物A，B
，和酶結合物(wù)同(tóng)時作用(yòng)。產(chǎn)生(shēng)顏色。顏色的(dí)深(shēn)淺和(hé)樣品(pǐn)中IL-5的(dí)濃度呈(chéng)比(bǐ)例關係(xì)。

試劑盒內容(róng)及其配(pèi)製
試(shì)劑盒成份（2-8℃保存） 96孔(kǒng)配置(zhì) 48孔配置 配製
96/48人份(fèn)酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半(bàn)塊板（48T） 即(jí)用型
塑(sù)料(liào)膜(mó)板(bǎn)蓋 1塊(kuài) 半塊 即用型(xíng)
標準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行(háng)稀稀(xī)
空(kōng)白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型(xíng)
標準(zhǔn)品稀釋緩(huǎn)衝(chōng)液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型(xíng)
生物(wù)素標(biāo)記(jì)的抗(kàng)IL-5抗(kàng)體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
親(qīn)和鏈酶素-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型
洗滌緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說明書(shū)進行(háng)稀(xī)釋(shì)
底(dǐ)物A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
底物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
終(zhōng)止(zhǐ)液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加(jiā)樣(yàng)器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器及磁力(lì)攪拌器(qì)等。

安(ān)全性(xìng)
1． 避免直(zhí)接(jiē)接觸(chù)終止(zhǐ)液(yè)和底物A，B。一旦(dàn)接觸(chù)到(dào)這(zhè)些(xiē)液(yè)體
，請盡快用水衝洗。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不(bù)要吃喝，抽煙或使(shǐ)用化(huà)妝品。
3． 不(bù)要(yào)用嘴(zuǐ)吸(xī)取試劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的(dí)任何(hé)成份(fèn)。

操(cāo)作注意事(shì)項
1． 試(shì)劑(jì)應按(àn)標簽說明書儲(chǔ)存
，使(shǐ)用(yòng)前(qián)恢復(fù)到室溫(wēn)。稀稀過後(hòu)的標準品(pǐn)應丟棄(qì)
，不(bù)可(kě)保(bǎo)存(cún)。
2． 實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條應(yīng)立(lì)即放回包(bāo)裝(zhuāng)袋中
，密封保(bǎo)存(cún)
，以免(miǎn)變質(zhì)。
3． 不(bù)用的其(qí)它試(shì)劑(jì)應包裝(zhuāng)好或蓋好(hǎo)。不(bù)同(tóng)批號(hào)的試劑(jì)不要混用(yòng)。保質(zhì)前使用(yòng)。
4． 使用一次性(xìng)的吸頭以免交(jiāo)叉汙(wū)染(rǎn)
，吸取(qǔ)終止液(yè)和底物A，B液(yè)時
，避免使用帶(dài)金屬(shǔ)部(bù)分的加樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹(gān)淨(jìng)的(dí)塑料容器配置洗滌液(yè)。使用(yòng)前充(chōng)分混(hùn)匀試(shì)劑(jì)盒裏的(dí)各種成(chéng)份及樣品。
6． 洗(xǐ)滌酶標(biāo)板(bǎn)時應充分拍(pāi)幹(gān)
，不要(yào)將吸水(shuǐ)紙直(zhí)接放入(rù)酶標反應(yīng)孔(kǒng)中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發
，避(bì)免長時間(jiān)打(dǎ)開蓋(gài)子。底(dǐ)物(wù)B對光(guāng)敏感(gǎn)
，避免(miǎn)長(cháng)時間暴露於光下。避免(miǎn)用手接(jiē)觸(chù)
，有毒。實驗完(wán)成後應立即(jí)讀取OD值(zhí)。
8． 加入試(shì)劑的順序應(yīng)一(yī)致
，以保證所有反(fǎn)應板(bǎn)孔溫(wēn)育的時間一(yī)樣(yàng)。
9． 按(àn)照說明書中標(biāo)明(míng)的(dí)時間，加液(yè)的量及順(shùn)序進行溫(wēn)育(yù)操(cāo)作。

樣品(pǐn)收集(jí)，處(chǔ)理及保存(cún)方法(fǎ)
1， 血清-----操作過程中避免(miǎn)任何細胞刺激。使(shǐ)用(yòng)不(bù)含熱原和內毒素的(dí)試管(guǎn)。收集血(xiě)液後
，1000×g離心10分鐘(zhōng)將血清和紅細(xì)胞迅(xùn)速小(xiǎo)心地分離(lí)。
2， 血漿-----EDTA，檸檬酸(suān)鹽，肝素(sù)血(xiě)漿可(kě)用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除顆(kē)粒(lì)。
3， 細胞(bāo)上(shàng)清液(yè)---1000×g離(lí)心(xīn)10分(fēn)鐘去(qù)除(chú)顆(kē)粒和聚(jù)合物。
4， 保存------如果樣(yàng)品(pǐn)不立(lì)即(jí)使(shǐ)用(yòng)
，應(yīng)將(jiāng)其(qí)分成小部(bù)分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存
，避免反(fǎn)復冷(lěng)凍(dòng)。盡(jìn)可(kě)能的不要(yào)使(shǐ)用溶血或高(gāo)血(xiě)脂血(xiě)。如(rú)果血清中大量顆粒(lì)
，檢測前(qián)先(xiān)離(lí)心或過(guò)濾。不要(yào)在37℃或(huò)更高的(dí)溫(wēn)度加熱(rè)解(jiě)凍。應在室溫下解(jiě)凍(dòng)並(bìng)確保(bǎo)樣品(pǐn)均(jūn)匀地充分解凍(dòng)。

試劑的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標準品(pǐn)：標(biāo)準(zhǔn)品的係列稀釋(shì)應(yīng)在(zài)實驗時(shí)準備(bèi)
，不能儲存。稀(xī)釋前將(jiāng)標(biāo)準(zhǔn)品振(zhèn)蕩混(hùn)匀。稀釋比例按(àn)下表中進行(háng)：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 原倍濃度(dù)不用稀釋直接(jiē)加入50ul。
400 pg/ml （5號標(biāo)準品） 100ul的(dí)原倍標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋液(yè)
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的(dí)5號(hào)標準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)4號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的標準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的(dí)標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準品） 100ul的(dí)2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標準品(pǐn)稀(xī)釋液
0 pg/ml （空(kōng)白對照(zhào)） 原始濃度不(bù)用稀釋直接加(jiā)入50ul。

2． 洗滌(dí)緩(huǎn)衝液（50×）的(dí)稀(xī)釋(shì)：蒸(zhēng)餾水50倍稀(xī)釋。

操(cāo)作步驟(zhòu)
1． 使用前(qián)
，將(jiāng)所有(yǒu)試劑充分(fēn)混匀。不(bù)要使液(yè)體產(chǎn)生大量的泡沫
，以(yǐ)免加(jiā)樣時加(jiā)入大量的(dí)氣泡(pào)
，產(chǎn)生加樣(yàng)上的誤(wù)差。
2． 根據待(dài)測樣品數量加(jiā)上標準(zhǔn)品的(dí)數(shù)量決定(dìng)所(suǒ)需(xū)的板(bǎn)條數。每個(gè)標準品和空白(bái)孔(kǒng)建議做復(fù)孔(kǒng)。每個樣(yàng)品根據自己的數(shù)量來定
，能(néng)使用(yòng)復(fù)孔的盡(jìn)量做復(fù)孔。
3． 加入稀釋好後的標(biāo)準品50ul於反應孔(kǒng)，加(jiā)入(rù)待測樣品(pǐn)50ul於反應孔(kǒng)內。立(lì)即加(jiā)入(rù)50ul的生物素標記的(dí)抗體。蓋(gài)上(shàng)膜板
，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀
，37℃溫育1小(xiǎo)時。
4． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內液(yè)體(tǐ)
，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌(dí)液
，振(zhèn)蕩30秒(miǎo)
，甩去(qù)洗滌液
，用(yòng)吸水(shuǐ)紙拍(pāi)幹(gān)。重復(fù)此(cǐ)操作3次。如果(guǒ)用洗板機(jī)洗滌(dí)
，洗滌次數(shù)增(zēng)加(jiā)一次。
5． 每(měi)孔(kǒng)加入80ul的(dí)親(qīn)和鏈(liàn)酶(méi)素-HRP
，輕(qīng)輕振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)
，37℃溫育30分(fēn)鐘(zhōng)。
6． 甩去孔內(nèi)液體(tǐ)
，每孔加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌液
，振蕩(dàng)30秒
，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌液(yè)
，用吸水紙(zhǐ)拍幹。重復此操作(zuò)3次。如(rú)果用洗板機洗(xǐ)滌(dí)
，洗滌次(cì)數(shù)增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔(kǒng)加入底物A，B各50ul
，輕輕振蕩混(hùn)匀(yún)
，37℃溫育10分鐘。避(bì)免(miǎn)光照(zhào)。
8． 取出(chū)酶標板(bǎn)
，迅(xùn)速(sù)加入50ul終止液(yè)
，加入終止液後(hòu)應立即測(cè)定結果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處(chǔ)測(cè)定各孔(kǒng)的OD值。

建議使用的實驗方(fāng)案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃(nóng)度(dù)（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn)
B 400 400 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
D 100 100 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
E 50 50 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
F 25 25 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
G 0 0 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
H 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品

局限
6號(hào)標準品(pǐn)以(yǐ)上(shàng)的(dí)結果(guǒ)為(wéi)非(fēi)綫(xiàn)性的
，根(gēn)據(jù)此(cǐ)標(biāo)準曲綫(xiàn)無法(fǎ)得到(dào)的結(jié)果。

試劑盒(hé)性能(néng)
1. 靈(líng)敏度(dù)：zui小的檢測(cè)濃度小於(yú)1號標準(zhǔn)品。稀(xī)釋(shì)度的綫性(xìng)。樣品(pǐn)綫(xiàn)性回(huí)歸(guī)與預期(qī)濃度(dù)相(xiāng)關(guān)係數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異(yì)性(xìng)：不與其它細(xì)胞(bāo)因(yīn)子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重復(fù)性(xìng)：板(bǎn)內(nèi)，板間變異係數均小於(yú)10%。

結(jié) 果(guǒ) 判(pàn) 斷 與(yǔ) 分(fēn) 析(xī)
1，儀器值：於(yú)波長450nm的(dí)酶(méi)標儀上(shàng)讀取各孔的(dí)OD值(zhí)

2，以(yǐ)吸光度OD值為縱(zòng)坐標（Y）
，相(xiāng)應的(dí)IL-5標準品濃度(dù)為(wéi)橫坐標（X）
，做得(dé)相應的(dí)曲綫(xiàn)
，樣品的IL-5含(hán)量可根據其(qí)OD值由(yóu)標準曲(qū)綫(xiàn)換(huàn)算出相(xiāng)應(yīng)的濃(nóng)度。

3，檢(jiǎn)測值範(fàn)圍：0-800pg/ml