試(shì)驗原(yuán)理：
IL-4試(shì)劑(jì)盒是固(gù)相夾(jiā)心法酶聯免疫(yì)吸(xī)附實驗(yàn)（ELISA）.已知IL-4濃度的標(biāo)準品(pǐn)，未知濃(nóng)度的(dí)樣(yàng)品加入微(wēi)孔(kǒng)酶(méi)標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-4和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的抗體同時溫(wēn)育。洗滌後，加入親和素(sù)標(biāo)記過的HRP。再(zài)經過溫育和洗滌，去(qù)除(chú)未(wèi)結(jié)合(hé)的(dí)酶結合物，然(rán)後加入底(dǐ)物A，B，和酶結(jié)合物同時作(zuò)用(yòng)。產(chǎn)生顏色。顏(yán)色的(dí)深淺和(hé)樣品中IL-4的濃度(dù)呈(chéng)比(bǐ)例(lì)關係。

試劑盒內容及(jí)其(qí)配製
試劑盒(hé)成(chéng)份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置(zhì) 48孔配(pèi)置 配(pèi)製(zhì)
96/48人(rén)份酶(méi)標板 1塊板（96T） 半(bàn)塊(kuài)板（48T） 即用型
塑料(liào)膜板(bǎn)蓋 1塊(kuài) 半塊 即用型
標(biāo)準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說(shuō)明書進行稀稀
空白對(duì)照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩(huǎn)衝液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型(xíng)
生(shēng)物(wù)素標記(jì)的抗IL-4抗(kàng)體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型
親和(hé)鏈酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即用型
洗滌(dí)緩衝(chōng)液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明書進行稀釋
底物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
底(dǐ)物(wù)B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
終(zhōng)止液 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型

自備(bèi)材料(liào)
1． 蒸餾(liù)水(shuǐ)。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及磁力(lì)攪拌(bàn)器等(děng)。

安全性
1． 避(bì)免(miǎn)直接(jiē)接觸終止(zhǐ)液和底(dǐ)物(wù)A，B。一旦接(jiē)觸(chù)到(dào)這(zhè)些(xiē)液體，請(qǐng)盡快用水(shuǐ)衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實驗中不要(yào)吃喝，抽煙(yān)或使用化(huà)妝(zhuāng)品。
3． 不(bù)要(yào)用(yòng)嘴(zuǐ)吸取試(shì)劑(jì)盒裏的任何成份。

操作(zuò)注意事(shì)項
1． 試(shì)劑(jì)應按標簽說(shuō)明書儲(chǔ)存(cún)，使用前(qián)恢復到室溫。稀稀過(guò)後的標(biāo)準品應丟棄(qì)，不可(kě)保存(cún)。
2． 實驗中不用的板條應立(lì)即放回(huí)包裝袋(dài)中，密(mì)封保存(cún)，以免變質。
3． 不用的(dí)其它(tā)試劑(jì)應(yīng)包裝(zhuāng)好或(huò)蓋(gài)好。不同批號的試(shì)劑(jì)不(bù)要混用。保質前使(shǐ)用。
4． 使(shǐ)用(yòng)一次性的吸(xī)頭以免(miǎn)交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)，吸(xī)取終止液和(hé)底物A，B液時，避(bì)免(miǎn)使用帶(dài)金屬部分的(dí)加樣器(qì)。
5． 使用幹(gān)淨的塑料(liào)容器(qì)配(pèi)置洗滌(dí)液。使(shǐ)用前充(chōng)分混匀試(shì)劑盒裏的(dí)各種(zhǒng)成份(fèn)及樣(yàng)品(pǐn)。
6． 洗滌酶(méi)標板(bǎn)時(shí)應充分拍幹(gān)，不要(yào)將吸(xī)水紙(zhǐ)直(zhí)接放入酶標(biāo)反應孔(kǒng)中吸(xī)水。
7． 底物(wù)A應揮(huī)發，避免(miǎn)長時間打開蓋(gài)子。底(dǐ)物(wù)B對光敏感(gǎn)，避免長(cháng)時間(jiān)暴(bào)露於(yú)光(guāng)下(xià)。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完(wán)成(chéng)後(hòu)應立(lì)即(jí)讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試(shì)劑的(dí)順(shùn)序(xù)應一(yī)致，以(yǐ)保證(zhèng)所有反應板孔(kǒng)溫(wēn)育的時間一樣。
9． 按照(zhào)說明(míng)書中標(biāo)明的(dí)時間，加液的量及(jí)順序(xù)進(jìn)行溫(wēn)育操(cāo)作(zuò)。

樣品收集，處理及(jí)保(bǎo)存方法
1， 血清-----操(cāo)作過程中(zhōng)避免(miǎn)任(rèn)何細胞刺激(jī)。使用不(bù)含(hán)熱原和內毒素的試管。收集(jí)血(xiě)液後，1000×g離心(xīn)10分鐘將血清(qīng)和紅(hóng)細胞迅速小(xiǎo)心地(dì)分離。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸檬酸鹽，肝(gān)素血漿(jiāng)可用(yòng)於檢(jiǎn)測(cè)。1000×g離(lí)心30分鐘去(qù)除顆(kē)粒。
3， 細(xì)胞(bāo)上清液---1000×g離心(xīn)10分鐘去除(chú)顆粒(lì)和(hé)聚(jù)合物(wù)。
4， 保存(cún)------如果樣品(pǐn)不立即使用，應將其(qí)分成小部分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存，避免(miǎn)反復(fù)冷(lěng)凍。盡(jìn)可能的不要使(shǐ)用溶(róng)血(xiě)或高(gāo)血(xiě)脂血。如果血(xiě)清中(zhōng)大量(liáng)顆(kē)粒(lì)，檢測前(qián)先離(lí)心或(huò)過濾。不要在37℃或(huò)更(gēng)高的(dí)溫(wēn)度(dù)加(jiā)熱解凍。應在室溫下(xià)解凍並(bìng)確(què)保(bǎo)樣品均匀(yún)地(dì)充分解凍(dòng)。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標準品(pǐn)的係(xì)列稀(xī)釋(shì)應在實驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備(bèi)，不能(néng)儲(chǔ)存(cún)。稀(xī)釋前將標準(zhǔn)品振蕩混匀。稀釋(shì)比(bǐ)例按(àn)下(xià)表(biǎo)中進行(háng)：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準品） 原倍濃(nóng)度不(bù)用(yòng)稀(xī)釋直接加(jiā)入50ul。
400 pg/ml （5號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)原(yuán)倍標準品加(jiā)入100ul的標準品稀(xī)釋液(yè)
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的5號標準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml （2號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準品加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
25 pg/ml （1號標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的2號標準品(pǐn)加入100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液
0 pg/ml （空(kōng)白對照(zhào)） 原(yuán)始(shǐ)濃(nóng)度(dù)不用稀(xī)釋直(zhí)接加(jiā)入50ul。

2． 洗(xǐ)滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)（50×）的(dí)稀釋(shì)：蒸餾(liù)水50倍(bèi)稀釋。

操(cāo)作步驟(zhòu)
1． 使用前，將所有(yǒu)試劑充(chōng)分(fēn)混匀(yún)。不(bù)要(yào)使液體(tǐ)產(chǎn)生大(dà)量(liáng)的泡沫(mò)，以免(miǎn)加樣時(shí)加(jiā)入大量的氣(qì)泡，產生加樣(yàng)上的誤差。
2． 根據待測樣(yàng)品數量加上(shàng)標(biāo)準品(pǐn)的(dí)數(shù)量決定所需(xū)的板(bǎn)條(tiáo)數(shù)。每(měi)個標(biāo)準(zhǔn)品和(hé)空(kōng)白(bái)孔建議(yì)做復孔(kǒng)。每個樣品(pǐn)根(gēn)據自己的數量來定，能(néng)使用(yòng)復(fù)孔的盡(jìn)量做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入(rù)稀釋好後的(dí)標準(zhǔn)品50ul於反(fǎn)應孔，加入待測樣(yàng)品50ul於反應孔內。立即加(jiā)入(rù)50ul的生物(wù)素標(biāo)記的抗體。蓋(gài)上膜板，輕輕振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫育(yù)1小時。
4． 甩去(qù)孔內液體，每孔加滿洗(xǐ)滌液(yè)，振蕩30秒，甩去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸(xī)水(shuǐ)紙拍幹(gān)。重(zhòng)復(fù)此操作3次。如果用(yòng)洗(xǐ)板機洗滌，洗滌(dí)次(cì)數增加一次。
5． 每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)80ul的(dí)親(qīn)和(hé)鏈酶素-HRP，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液(yè)體，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗(xǐ)滌液，振蕩30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去洗滌液，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹(gān)。重(zhòng)復(fù)此操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如果用洗板(bǎn)機洗滌(dí)，洗滌次數(shù)增加一(yī)次。
7． 每孔(kǒng)加(jiā)入底物A，B各50ul，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育10分鐘(zhōng)。避免(miǎn)光(guāng)照(zhào)。
8． 取出酶(méi)標板(bǎn)，迅速(sù)加入50ul終止液(yè)，加入(rù)終止(zhǐ)液後應立(lì)即測定(dìng)結(jié)果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處測(cè)定(dìng)各孔(kǒng)的(dí)OD值(zhí)。

建(jiàn)議使用的實(shí)驗(yàn)方(fāng)案(àn)
 標準(zhǔn)品濃度（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 400 400 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn)
E 50 50 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
F 25 25 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
G 0 0 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
H 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)

局限(xiàn)
6號(hào)標準(zhǔn)品以(yǐ)上的(dí)結果為(wéi)非(fēi)綫性的(dí)，根據此標(biāo)準曲綫無法(fǎ)得(dé)到的結果(guǒ)。

試劑(jì)盒(hé)性能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度：zui小(xiǎo)的(dí)檢測(cè)濃度小於1號(hào)標準(zhǔn)品。稀釋度(dù)的綫性。樣品綫性回(huí)歸(guī)與預(yù)期濃度相關係數(shù)R值為0.990。
2. 特(tè)異(yì)性(xìng)：不與其它(tā)細胞因(yīn)子(zǐ)反應。
3. 重復性(xìng)：板內(nèi)，板(bǎn)間變(biàn)異係(xì)數均小於(yú)10%。

結 果(guǒ) 判 斷(duàn) 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀(yí)器(qì)值：於波(bō)長(cháng)450nm的酶標(biāo)儀(yí)上(shàng)讀取各孔的OD值

2，以吸(xī)光度OD值為縱坐(zuò)標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐(zuò)標（X），做(zuò)得相應的(dí)曲綫，樣(yàng)品(pǐn)的IL-4含(hán)量(liáng)可根據其OD值由(yóu)標準曲(qū)綫(xiàn)換(huàn)算出相(xiāng)應的濃度。

3，檢測值範(fàn)圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏(mǐn)感度(dù)： 1.0 pg/ml