試驗(yàn)原(yuán)理：
IL-2試(shì)劑(jì)盒是(shì)固(gù)相夾心法酶(méi)聯免疫(yì)吸附實(shí)驗（ELISA）.已知(zhī)IL-2濃(nóng)度(dù)的標準品(pǐn)，未知(zhī)濃度(dù)的(dí)樣品加入(rù)微孔(kǒng)酶標(biāo)板內進(jìn)行(háng)檢(jiǎn)測。先將IL-2和(hé)生物素標記的(dí)抗(kàng)體同時(shí)溫育。洗滌後，加入親和素(sù)標記(jì)過的HRP。再(zài)經(jīng)過溫育和(hé)洗(xǐ)滌，去除未結(jié)合(hé)的(dí)酶結(jié)合物(wù)，然(rán)後(hòu)加(jiā)入(rù)底物(wù)A，B，和酶(méi)結合物同時作用。產生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏色(sè)的(dí)深淺(qiǎn)和樣(yàng)品中IL-2的(dí)濃(nóng)度呈(chéng)比例關係(xì)。

試(shì)劑盒內容(róng)及(jí)其(qí)配(pèi)製
試劑盒成(chéng)份(fèn)（2-8℃保存） 96孔(kǒng)配置 48孔(kǒng)配置 配(pèi)製
96/48人份酶標板(bǎn) 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即(jí)用型(xíng)
塑(sù)料膜板(bǎn)蓋(gài) 1塊 半塊(kuài) 即用型(xíng)
標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明(míng)書進行稀(xī)稀(xī)
空白(bái)對(duì)照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)
標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋緩衝液 1瓶(píng)（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型
生物素標記的(dí)抗IL-2抗體(tǐ) 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型(xíng)
親(qīn)和(hé)鏈酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
洗滌(dí)緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說(shuō)明(míng)書進(jìn)行(háng)稀釋(shì)
底(dǐ)物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
終止液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型

自備(bèi)材(cái)料(liào)
1． 蒸(zhēng)餾水。
2． 加(jiā)樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及(jí)磁力攪拌器(qì)等。

安(ān)全性(xìng)
1． 避免直(zhí)接(jiē)接(jiē)觸終止(zhǐ)液(yè)和(hé)底(dǐ)物A，B。一旦接(jiē)觸到(dào)這些(xiē)液(yè)體(tǐ)，請盡快用(yòng)水(shuǐ)衝洗。
2． 實(shí)驗中不(bù)要吃(chī)喝(hē)，抽煙(yān)或(huò)使用(yòng)化妝(zhuāng)品。
3． 不要用嘴(zuǐ)吸(xī)取試劑盒裏(lǐ)的任(rèn)何(hé)成份。

操(cāo)作注意(yì)事(shì)項(xiàng)
1． 試劑(jì)應(yīng)按標簽說明書儲(chǔ)存，使(shǐ)用前(qián)恢復到室(shì)溫。稀稀(xī)過後(hòu)的標準(zhǔn)品應(yīng)丟(diū)棄(qì)，不(bù)可保存。
2． 實驗(yàn)中不(bù)用的板(bǎn)條應立即放回包(bāo)裝袋中(zhōng)，密封保存，以免(miǎn)變質。
3． 不用的其它試(shì)劑(jì)應(yīng)包(bāo)裝(zhuāng)好或(huò)蓋(gài)好。不同批(pī)號的試劑(jì)不要(yào)混用。保質(zhì)前使用(yòng)。
4． 使用一次性(xìng)的吸(xī)頭(tóu)以免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染，吸(xī)取終(zhōng)止(zhǐ)液和(hé)底(dǐ)物(wù)A，B液時(shí)，避(bì)免使用帶金屬部分的(dí)加(jiā)樣(yàng)器。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹(gān)淨的塑料容器配置(zhì)洗(xǐ)滌液。使用前(qián)充分(fēn)混匀試劑盒(hé)裏的各(gè)種成份及樣品。
6． 洗滌(dí)酶標(biāo)板時應充(chōng)分拍幹，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水紙直接放(fàng)入酶標反(fǎn)應(yīng)孔中吸(xī)水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物(wù)A應(yīng)揮發，避免(miǎn)長(cháng)時間打開(kāi)蓋子(zǐ)。底物(wù)B對(duì)光(guāng)敏感，避免長(cháng)時間(jiān)暴(bào)露(lòu)於(yú)光(guāng)下。避免(miǎn)用(yòng)手接觸，有毒(dú)。實驗(yàn)完成後(hòu)應立即讀(dú)取OD值(zhí)。
8． 加入試劑(jì)的(dí)順(shùn)序應一致(zhì)，以保證所有(yǒu)反(fǎn)應板(bǎn)孔溫育的時(shí)間(jiān)一樣。
9． 按照說(shuō)明(míng)書(shū)中標(biāo)明(míng)的(dí)時間，加液(yè)的(dí)量及順(shùn)序進行溫(wēn)育操作(zuò)。

樣品收(shōu)集，處(chǔ)理及保(bǎo)存方(fāng)法
1， 血(xiě)清(qīng)-----操作過(guò)程中避免(miǎn)任何細(xì)胞(bāo)刺激(jī)。使用不含熱原和(hé)內毒素的試(shì)管(guǎn)。收(shōu)集(jí)血(xiě)液後，1000×g離(lí)心10分鐘將(jiāng)血清和紅細(xì)胞(bāo)迅(xùn)速小(xiǎo)心地分(fēn)離。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸檬酸(suān)鹽，肝(gān)素血(xiě)漿(jiāng)可(kě)用於(yú)檢(jiǎn)測(cè)。1000×g離(lí)心30分(fēn)鐘去(qù)除顆(kē)粒。
3， 細(xì)胞上清(qīng)液---1000×g離心10分(fēn)鐘去除顆(kē)粒和聚合(hé)物(wù)。
4， 保存(cún)------如果樣品不(bù)立即(jí)使用(yòng)，應將(jiāng)其(qí)分(fēn)成(chéng)小部分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存，避免反復冷(lěng)凍。盡可能(néng)的不(bù)要使用(yòng)溶血或高(gāo)血脂(zhī)血。如果血(xiě)清(qīng)中大量顆粒，檢(jiǎn)測(cè)前先離心(xīn)或過(guò)濾。不要(yào)在(zài)37℃或(huò)更(gēng)高的(dí)溫度加熱解凍。應在(zài)室溫下解凍並確保樣品(pǐn)均匀地充分解(jiě)凍。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標準(zhǔn)品(pǐn)：標準品的(dí)係列稀釋(shì)應(yīng)在實(shí)驗時準(zhǔn)備(bèi)，不(bù)能(néng)儲存。稀釋前將標準品(pǐn)振蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)。稀釋(shì)比例按下表中進行：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 原倍濃(nóng)度不用稀釋直(zhí)接加入50ul。
400 pg/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的原(yuán)倍標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的標準品稀釋(shì)液(yè)
200 pg/ml （4號標(biāo)準品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標準品加入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
50 pg/ml （2號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號(hào)標準品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀(xī)釋直(zhí)接加(jiā)入(rù)50ul。

2． 洗滌緩(huǎn)衝液（50×）的稀釋(shì)：蒸餾水(shuǐ)50倍稀(xī)釋。

操作步(bù)驟
1． 使(shǐ)用(yòng)前(qián)，將(jiāng)所有(yǒu)試(shì)劑(jì)充(chōng)分混(hùn)匀(yún)。不要使液(yè)體產(chǎn)生(shēng)大量的(dí)泡(pào)沫，以免加(jiā)樣時加(jiā)入大量的(dí)氣泡，產(chǎn)生加(jiā)樣上的誤差(chà)。
2． 根據待測樣(yàng)品數量加(jiā)上標準品(pǐn)的數量(liáng)決定(dìng)所需的板(bǎn)條數。每個標準(zhǔn)品(pǐn)和(hé)空(kōng)白孔建議(yì)做復孔。每個(gè)樣品根據自己的(dí)數(shù)量來(lái)定，能使用(yòng)復(fù)孔(kǒng)的盡(jìn)量(liáng)做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入稀(xī)釋好(hǎo)後(hòu)的(dí)標準品50ul於反(fǎn)應孔(kǒng)，加入待(dài)測(cè)樣(yàng)品50ul於反應(yīng)孔內(nèi)。立(lì)即加入50ul的生物素(sù)標記(jì)的抗(kàng)體。蓋上(shàng)膜(mó)板(bǎn)，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀，37℃溫(wēn)育1小時。
4． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內液(yè)體，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操作3次。如果(guǒ)用洗板機洗(xǐ)滌(dí)，洗滌次數增(zēng)加一次。
5． 每(měi)孔加入(rù)80ul的(dí)親和(hé)鏈(liàn)酶素(sù)-HRP，輕輕振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)30分鐘。
6． 甩去孔(kǒng)內液體(tǐ)，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌液，振蕩30秒，甩(shuǎi)去洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸水紙拍幹。重(zhòng)復(fù)此操作3次。如(rú)果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加(jiā)入底物(wù)A，B各50ul，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀，37℃溫育10分鐘。避免光(guāng)照(zhào)。
8． 取出酶標板(bǎn)，迅速加(jiā)入(rù)50ul終止液，加(jiā)入終止(zhǐ)液後(hòu)應(yīng)立即(jí)測定結(jié)果。
9． 在450nm波長(cháng)處測(cè)定(dìng)各孔(kǒng)的OD值。

建議使用的實驗(yàn)方案
 標(biāo)準品濃(nóng)度（pg/ml） 
A 800 800 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
B 400 400 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
C 200 200 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
D 100 100 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
F 25 25 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
G 0 0 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品
H 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準(zhǔn)品(pǐn)以上(shàng)的結果為(wéi)非(fēi)綫(xiàn)性(xìng)的，根據(jù)此(cǐ)標準(zhǔn)曲(qū)綫無(wú)法得到的(dí)結(jié)果。

試劑(jì)盒性(xìng)能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度(dù)：zui小的檢(jiǎn)測濃(nóng)度小於(yú)1號標準品。稀釋度的綫(xiàn)性(xìng)。樣(yàng)品(pǐn)綫性回歸(guī)與(yǔ)預期濃(nóng)度(dù)相關(guān)係(xì)數R值為(wéi)0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應。
3. 重復(fù)性：板內，板(bǎn)間變異(yì)係數均小(xiǎo)於10%。

結 果 判 斷 與 分 析(xī)
1，儀(yí)器值：於(yú)波長(cháng)450nm的酶標儀上(shàng)讀取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值

2，以(yǐ)吸(xī)光度OD值為縱坐(zuò)標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-2標(biāo)準品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐標(biāo)（X），做(zuò)得相(xiāng)應的曲(qū)綫(xiàn)，樣品(pǐn)的(dí)IL-2含量(liáng)可根(gēn)據(jù)其(qí)OD值由標準(zhǔn)曲(qū)綫換算(suàn)出(chū)相應(yīng)的濃(nóng)度。

3，檢(jiǎn)測(cè)值範圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml