大(dà)鼠 （Rat） 白(bái)細胞介素-1β（IL-1β）ELISA 檢測試劑(jì)盒(hé)
本(běn)試(shì)劑(jì)僅供(gōng)研究使用(yòng) 標本(běn)：血清或(huò)血(xiě)漿

試驗原理：
IL-1β試(shì)劑盒(hé)是固(gù)相夾(jiā)心(xīn)法酶聯(lián)免(miǎn)疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-1β濃(nóng)度的標準品，未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的樣品加(jiā)入微孔酶(méi)標(biāo)板內進(jìn)行檢測。先將IL-1β和生(shēng)物素(sù)標記的抗體同(tóng)時溫育(yù)。洗(xǐ)滌後(hòu)，加入(rù)親(qīn)和素標(biāo)記(jì)過的HRP。再經過(guò)溫育(yù)和(hé)洗滌，去(qù)除(chú)未結合(hé)的(dí)酶(méi)結合物(wù)，然後加入(rù)底物(wù)A，B，和(hé)酶結合(hé)物同(tóng)時作用(yòng)。產生(shēng)顏色。顏(yán)色的(dí)深淺和(hé)樣品中(zhōng)IL-1β的(dí)濃度(dù)呈(chéng)比(bǐ)例關(guān)係。

試劑(jì)盒(hé)內容及(jí)其(qí)配製
試(shì)劑盒成(chéng)份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置(zhì) 48孔(kǒng)配置(zhì) 配製
96/48人(rén)份酶(méi)標板 1塊(kuài)板（96T） 半(bàn)塊板（48T） 即用型
塑料膜(mó)板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準品：240pg/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行(háng)稀(xī)稀(xī)
空白(bái)對(duì)照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用(yòng)型
標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋緩衝液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即(jí)用型
生物(wù)素標(biāo)記的抗IL-1β抗體 1瓶（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
親(qīn)和鏈酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
洗滌緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀(xī)釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
底物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型
終(zhōng)止液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)

自(zì)備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣(yàng)器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁(cí)力(lì)攪拌器等(děng)。

安全性
1． 避(bì)免直(zhí)接接觸終止(zhǐ)液(yè)和底物(wù)A，B。一(yī)旦接(jiē)觸到(dào)這些液體，請盡(jìn)快用(yòng)水衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實驗中(zhōng)不(bù)要吃喝(hē)，抽煙或使(shǐ)用(yòng)化妝品。
3． 不(bù)要用(yòng)嘴吸(xī)取試劑盒(hé)裏的任(rèn)何(hé)成(chéng)份。

操(cāo)作注意事項
1． 試劑應按標(biāo)簽說明(míng)書儲存(cún)，使用前恢復到室溫。稀(xī)稀過(guò)後的標(biāo)準品(pǐn)應丟(diū)棄(qì)，不(bù)可(kě)保存。
2． 實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)用的(dí)板條應(yīng)立(lì)即放(fàng)回(huí)包(bāo)裝袋(dài)中，密(mì)封保(bǎo)存，以(yǐ)免(miǎn)變質。
3． 不用的其(qí)它(tā)試劑(jì)應(yīng)包(bāo)裝(zhuāng)好(hǎo)或蓋(gài)好。不同(tóng)批號的試(shì)劑不要(yào)混用。保質前使(shǐ)用。
4． 使用(yòng)一(yī)次性(xìng)的吸頭以免交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)，吸取終(zhōng)止液(yè)和(hé)底(dǐ)物A，B液時，避(bì)免使用(yòng)帶金屬(shǔ)部(bù)分的(dí)加(jiā)樣器。
5． 使用幹淨的(dí)塑料容器配置洗(xǐ)滌液。使(shǐ)用前充分混匀試(shì)劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的各(gè)種(zhǒng)成(chéng)份(fèn)及樣品。
6． 洗滌(dí)酶標板時應(yīng)充(chōng)分拍幹(gān)，不(bù)要將(jiāng)吸(xī)水紙直(zhí)接放入酶標(biāo)反應孔中吸(xī)水。
7． 底物A應揮(huī)發，避免長(cháng)時間(jiān)打(dǎ)開蓋子(zǐ)。底物B對光(guāng)敏感(gǎn)，避(bì)免長(cháng)時間(jiān)暴(bào)露於光(guāng)下(xià)。避免用手(shǒu)接觸(chù)，有(yǒu)毒。實(shí)驗完成後(hòu)應(yīng)立即讀(dú)取(qǔ)OD值。
8． 加(jiā)入(rù)試(shì)劑的順(shùn)序應(yīng)一(yī)致(zhì)，以(yǐ)保證(zhèng)所(suǒ)有(yǒu)反應(yīng)板孔溫育(yù)的時間一(yī)樣(yàng)。
9． 按照說明書中標明的時間(jiān)，加(jiā)液(yè)的(dí)量(liáng)及順(shùn)序進行溫(wēn)育操(cāo)作(zuò)。

樣(yàng)品收(shōu)集(jí)，處理(lǐ)及(jí)保存方法
1， 血(xiě)清-----操(cāo)作過程(chéng)中避(bì)免(miǎn)任何細(xì)胞(bāo)刺激(jī)。使(shǐ)用不含熱(rè)原(yuán)和內毒素(sù)的(dí)試管(guǎn)。收(shōu)集血液(yè)後(hòu)，1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘將血清和紅細胞迅(xùn)速小心(xīn)地分離(lí)。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸檬(méng)酸鹽，肝(gān)素血漿(jiāng)可用(yòng)於檢測。1000×g離(lí)心30分(fēn)鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒。
3， 細(xì)胞(bāo)上(shàng)清(qīng)液---1000×g離(lí)心(xīn)10分(fēn)鐘(zhōng)去除顆粒和(hé)聚合物(wù)。
4， 保(bǎo)存------如果(guǒ)樣品不立即使(shǐ)用(yòng)，應將(jiāng)其分(fēn)成小部(bù)分-70 ℃保存(cún)，避免(miǎn)反復冷凍。盡可(kě)能的不要(yào)使用溶血(xiě)或高血脂血(xiě)。如果血清(qīng)中大量顆粒，檢測(cè)前(qián)先(xiān)離心(xīn)或過濾。不(bù)要在(zài)37℃或更高的溫(wēn)度加熱解凍(dòng)。應在(zài)室溫(wēn)下(xià)解凍(dòng)並確(què)保(bǎo)樣(yàng)品均(jūn)匀地充分(fēn)解凍。

試劑的(dí)準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準品(pǐn)：標準品的係(xì)列稀(xī)釋應在實驗時(shí)準(zhǔn)備(bèi)，不(bù)能儲存。稀釋(shì)前將(jiāng)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)振蕩混匀。稀(xī)釋比(bǐ)例(lì)按(àn)下表(biǎo)中進(jìn)行：
240 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準品） 原倍濃(nóng)度(dù)不(bù)用稀(xī)釋(shì)直接加入50ul。
120 pg/ml （5號標準品） 100ul的(dí)原(yuán)倍標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準品稀(xī)釋(shì)液
60 pg/ml （4號標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的5號標準品加入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋(shì)液
30 pg/ml （3號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的4號(hào)標(biāo)準品加(jiā)入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15 pg/ml （2號(hào)標準品） 100ul的(dí)3號標準品加(jiā)入100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液
7.5 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的(dí)2號(hào)標準品(pǐn)加入100ul的標準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
0 pg/ml （空白對照） 原始濃(nóng)度不用稀(xī)釋直接加(jiā)入50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩(huǎn)衝液（50×）的(dí)稀釋：蒸(zhēng)餾水(shuǐ)50倍(bèi)稀釋(shì)。

操(cāo)作步驟
1． 使用前(qián)，將所有(yǒu)試劑充(chōng)分混(hùn)匀。不要使液(yè)體產生大量(liáng)的泡(pào)沫，以(yǐ)免加樣時加入大量(liáng)的氣(qì)泡，產生(shēng)加(jiā)樣上的誤(wù)差(chà)。
2． 根(gēn)據待(dài)測樣(yàng)品數量(liáng)加(jiā)上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量(liáng)決(jué)定所需的板條(tiáo)數。每個標準品和空(kōng)白孔建議(yì)做(zuò)復(fù)孔(kǒng)。每(měi)個樣品根據自(zì)己(jǐ)的數(shù)量(liáng)來(lái)定(dìng)，能使(shǐ)用(yòng)復孔(kǒng)的盡(jìn)量(liáng)做復孔。
3． 加入稀(xī)釋(shì)好後(hòu)的(dí)標準品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應孔，加入待(dài)測(cè)樣品50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)內。立即(jí)加入50ul的生(shēng)物素(sù)標記的抗(kàng)體。蓋上(shàng)膜板，輕(qīng)輕振(zhèn)蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)1小時。
4． 甩去(qù)孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，振蕩30秒，甩(shuǎi)去(qù)洗滌液，用吸(xī)水紙拍幹。重復(fù)此操(cāo)作3次。如果用洗(xǐ)板機(jī)洗滌，洗滌次(cì)數(shù)增(zēng)加(jiā)一次。
5． 每孔(kǒng)加入80ul的親和鏈酶(méi)素-HRP，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫育30分鐘。
6． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液(yè)體(tǐ)，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌液，振(zhèn)蕩30秒，甩去洗(xǐ)滌液(yè)，用(yòng)吸水紙(zhǐ)拍幹。重復(fù)此操(cāo)作3次。如果(guǒ)用洗板機洗(xǐ)滌(dí)，洗滌(dí)次(cì)數增加(jiā)一次。
7． 每孔加入(rù)底(dǐ)物A，B各50ul，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育10分鐘(zhōng)。避(bì)免光照。
8． 取(qǔ)出酶標板(bǎn)，迅速加(jiā)入50ul終止(zhǐ)液，加(jiā)入(rù)終止(zhǐ)液(yè)後應(yīng)立即(jí)測定結(jié)果。
9． 在(zài)450nm波(bō)長(cháng)處測定各孔的(dí)OD值。

建議使用的實驗(yàn)方案
 標準品濃(nóng)度（pg/ml） 
A 240 240 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
B 120 120 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn)
C 60 60 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
D 30 30 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品
E 15 15 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
F 7.5 7.5 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品
G 0 0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
H 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn)

局限
6號標準品以(yǐ)上(shàng)的結果為(wéi)非(fēi)綫性的，根據此(cǐ)標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)無法得到的(dí)結果(guǒ)。

試劑(jì)盒性能
1. 靈敏度：zui小(xiǎo)的檢測濃(nóng)度小於1號(hào)標(biāo)準品(pǐn)。稀釋(shì)度的(dí)綫性(xìng)。樣品綫性回(huí)歸與預期(qī)濃度(dù)相關係(xì)數R值為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異性：不與其它(tā)細(xì)胞(bāo)因子(zǐ)反(fǎn)應(yīng)。
3. 重(zhòng)復(fù)性(xìng)：板內，板間變(biàn)異係數(shù)均小於10%。

結 果 判 斷 與 分(fēn) 析
1，儀(yí)器(qì)值：於(yú)波(bō)長450nm的(dí)酶(méi)標儀(yí)上讀取各(gè)孔的OD值

2，以吸光(guāng)度(dù)OD值為(wéi)縱坐標（Y），相應的IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃度為(wéi)橫坐(zuò)標（X），做得相(xiāng)應(yīng)的曲綫，樣品(pǐn)的IL-1β含(hán)量(liáng)可(kě)根據(jù)其OD值由(yóu)標準曲(qū)綫換算出(chū)相(xiāng)應的(dí)濃度。

3，檢(jiǎn)測(cè)值範(fàn)圍：0-240pg/ml

4，敏(mǐn)感(gǎn)度(dù)： 0.1 pg/ml