大鼠 （Rat） 白細胞介(jiè)素-1（IL-1）ELISA 檢測試劑(jì)盒(hé)
本試(shì)劑僅供研(yán)究使(shǐ)用 標(biāo)本(běn)：血(xiě)清(qīng)或(huò)血(xiě)漿(jiāng)

試驗(yàn)原理：
IL-1試(shì)劑盒是(shì)固相(xiāng)夾(jiā)心(xīn)法酶(méi)聯免疫吸附實驗(yàn)（ELISA）.已知IL-1濃度(dù)的(dí)標(biāo)準品，未知濃度(dù)的樣品加入(rù)微孔酶(méi)標板內進(jìn)行(háng)檢測。先(xiān)將(jiāng)IL-1和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記的抗體同時(shí)溫(wēn)育。洗(xǐ)滌後，加(jiā)入(rù)親和素(sù)標(biāo)記(jì)過的HRP。再(zài)經過溫育和洗滌，去除未(wèi)結(jié)合的(dí)酶結(jié)合物，然(rán)後加(jiā)入(rù)底(dǐ)物A，B，和酶(méi)結合(hé)物同時作用。產生顏(yán)色。顏(yán)色(sè)的(dí)深淺和樣品中IL-1的濃(nóng)度呈比(bǐ)例(lì)關(guān)係。

試(shì)劑(jì)盒(hé)內容(róng)及(jí)其配(pèi)製
試(shì)劑盒(hé)成(chéng)份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔(kǒng)配置 48孔(kǒng)配置 配製(zhì)
96/48人(rén)份(fèn)酶標(biāo)板(bǎn) 1塊板（96T） 半塊板(bǎn)（48T） 即用(yòng)型(xíng)
塑料膜板蓋 1塊(kuài) 半(bàn)塊 即用(yòng)型
標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行(háng)稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用型
標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即(jí)用型
生物(wù)素(sù)標(biāo)記的抗IL-1抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
親(qīn)和(hé)鏈酶(méi)素(sù)-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩衝(chōng)液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶（10ml） 按說明(míng)書進行稀(xī)釋(shì)
底物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
底物(wù)B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型
終(zhōng)止(zhǐ)液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型

自(zì)備材料
1． 蒸餾(liù)水。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及磁力攪(jiǎo)拌器等(děng)。

安全性(xìng)
1． 避免(miǎn)直(zhí)接(jiē)接觸(chù)終(zhōng)止液(yè)和(hé)底物A，B。一旦接觸(chù)到(dào)這(zhè)些(xiē)液體(tǐ)，請盡(jìn)快用水衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實(shí)驗中不(bù)要吃喝，抽煙或使(shǐ)用化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要用(yòng)嘴吸(xī)取(qǔ)試劑(jì)盒裏的任何成份。

操作注意(yì)事項(xiàng)
1． 試劑應按(àn)標(biāo)簽說明書(shū)儲存(cún)，使(shǐ)用前恢復到(dào)室溫。稀(xī)稀(xī)過(guò)後的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)應丟(diū)棄，不(bù)可保存。
2． 實(shí)驗中不用(yòng)的(dí)板條(tiáo)應立即(jí)放(fàng)回包裝袋中(zhōng)，密封(fēng)保存(cún)，以免(miǎn)變(biàn)質。
3． 不用的其(qí)它試劑應包裝(zhuāng)好或蓋好。不(bù)同批號的試劑(jì)不(bù)要(yào)混用。保質(zhì)前使(shǐ)用(yòng)。
4． 使用一(yī)次性的(dí)吸(xī)頭以(yǐ)免(miǎn)交叉汙(wū)染，吸(xī)取終止液和底(dǐ)物A，B液時，避(bì)免使用帶(dài)金屬(shǔ)部(bù)分(fēn)的加(jiā)樣(yàng)器。
5． 使用(yòng)幹淨的塑料(liào)容(róng)器(qì)配(pèi)置(zhì)洗滌液(yè)。使用(yòng)前充分混(hùn)匀(yún)試劑盒裏的各種成份及樣(yàng)品(pǐn)。
6． 洗滌(dí)酶標板時(shí)應(yīng)充分(fēn)拍(pāi)幹，不(bù)要將吸(xī)水(shuǐ)紙直(zhí)接(jiē)放(fàng)入(rù)酶標反應孔(kǒng)中吸(xī)水。
7． 底(dǐ)物(wù)A應(yīng)揮發，避(bì)免長(cháng)時(shí)間打開蓋(gài)子。底物B對(duì)光敏(mǐn)感，避(bì)免(miǎn)長時(shí)間暴露於光下(xià)。避免用(yòng)手(shǒu)接(jiē)觸(chù)，有毒。實(shí)驗完(wán)成(chéng)後(hòu)應(yīng)立即讀取(qǔ)OD值(zhí)。
8． 加入(rù)試劑的(dí)順序應一(yī)致(zhì)，以保(bǎo)證所(suǒ)有反應板孔溫(wēn)育的(dí)時間(jiān)一樣(yàng)。
9． 按照說明書中(zhōng)標明(míng)的(dí)時間(jiān)，加液的量及順序進行(háng)溫(wēn)育操作(zuò)。

樣(yàng)品收(shōu)集(jí)，處(chǔ)理(lǐ)及保(bǎo)存方法
1， 血清-----操作過程中避(bì)免任(rèn)何細胞刺(cì)激。使(shǐ)用(yòng)不含熱(rè)原和(hé)內毒素的試管(guǎn)。收集血(xiě)液(yè)後，1000×g離心10分(fēn)鐘(zhōng)將(jiāng)血清和紅(hóng)細胞迅(xùn)速(sù)小心地分離(lí)。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸檬(méng)酸鹽，肝(gān)素血(xiě)漿(jiāng)可(kě)用(yòng)於檢測(cè)。1000×g離(lí)心(xīn)30分鐘去(qù)除(chú)顆(kē)粒(lì)。
3， 細(xì)胞(bāo)上清液---1000×g離心10分(fēn)鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒和聚合物。
4， 保存------如(rú)果樣品(pǐn)不立即使用(yòng)，應將其分(fēn)成(chéng)小部(bù)分-70 ℃保存(cún)，避免反(fǎn)復冷(lěng)凍。盡可(kě)能(néng)的不要使(shǐ)用(yòng)溶血或高血(xiě)脂(zhī)血(xiě)。如果血清中大(dà)量顆粒，檢測前先離心或過濾。不(bù)要在37℃或更(gēng)高(gāo)的(dí)溫(wēn)度加(jiā)熱(rè)解凍。應在室溫下(xià)解(jiě)凍並確(què)保樣(yàng)品(pǐn)均(jūn)匀地(dì)充分解(jiě)凍。

試劑的(dí)準備
1． 標準品：標準(zhǔn)品(pǐn)的(dí)係(xì)列稀釋(shì)應在(zài)實(shí)驗時準備，不(bù)能儲(chǔ)存。稀釋前將(jiāng)標準品振蕩混(hùn)匀(yún)。稀(xī)釋(shì)比例(lì)按(àn)下表(biǎo)中(zhōng)進行：
800 pg/ml （6號(hào)標準品(pǐn)） 原倍濃度(dù)不(bù)用稀釋直接加(jiā)入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入(rù)100ul的(dí)標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
200 pg/ml （4號標準品(pǐn)） 100ul的5號標(biāo)準品加入100ul的(dí)標準品稀(xī)釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
50 pg/ml （2號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的3號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液
25 pg/ml （1號(hào)標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對(duì)照） 原(yuán)始(shǐ)濃度(dù)不(bù)用稀釋(shì)直(zhí)接(jiē)加入50ul。

2． 洗滌緩衝(chōng)液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍(bèi)稀(xī)釋。

操作步(bù)驟
1． 使(shǐ)用(yòng)前，將所有試劑(jì)充分(fēn)混匀。不要使(shǐ)液(yè)體產生大量(liáng)的泡沫，以免加(jiā)樣時(shí)加(jiā)入(rù)大量(liáng)的氣泡，產(chǎn)生加(jiā)樣(yàng)上(shàng)的誤差。
2． 根據待(dài)測樣(yàng)品數量加上(shàng)標準(zhǔn)品的(dí)數量決定所需的板(bǎn)條數(shù)。每(měi)個標準(zhǔn)品(pǐn)和(hé)空白(bái)孔建議(yì)做(zuò)復孔。每(měi)個(gè)樣品(pǐn)根(gēn)據(jù)自(zì)己的(dí)數(shù)量來定(dìng)，能使(shǐ)用復(fù)孔的盡(jìn)量(liáng)做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入稀(xī)釋(shì)好後的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品50ul於反(fǎn)應孔，加(jiā)入待(dài)測(cè)樣(yàng)品50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)內(nèi)。立即加入50ul的生(shēng)物素(sù)標(biāo)記(jì)的(dí)抗體(tǐ)。蓋(gài)上(shàng)膜板，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌液(yè)，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去(qù)洗滌(dí)液(yè)，用吸(xī)水紙拍幹。重(zhòng)復此(cǐ)操作(zuò)3次(cì)。如果用(yòng)洗(xǐ)板機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌次數增(zēng)加一次(cì)。
5． 每孔(kǒng)加入(rù)80ul的(dí)親和(hé)鏈(liàn)酶素-HRP，輕輕振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫育30分鐘。
6． 甩(shuǎi)去(qù)孔內(nèi)液體(tǐ)，每(měi)孔加(jiā)滿洗滌(dí)液，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去洗滌(dí)液(yè)，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹。重(zhòng)復(fù)此(cǐ)操作3次(cì)。如果用(yòng)洗板機洗(xǐ)滌，洗滌次(cì)數增加(jiā)一次。
7． 每(měi)孔加(jiā)入底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫(wēn)育10分(fēn)鐘(zhōng)。避免光(guāng)照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶標板(bǎn)，迅速(sù)加入50ul終止液，加入終止液後(hòu)應立(lì)即(jí)測(cè)定結(jié)果。
9． 在450nm波(bō)長處(chǔ)測定各(gè)孔的OD值。

建議使(shǐ)用(yòng)的實驗(yàn)方案
 標準品(pǐn)濃(nóng)度（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
C 200 200 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
D 100 100 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
E 50 50 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
F 25 25 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品
H 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品

局(jú)限(xiàn)
6號(hào)標準品以上(shàng)的結(jié)果(guǒ)為非(fēi)綫性的，根(gēn)據此標(biāo)準曲綫無法(fǎ)得到(dào)的(dí)結果(guǒ)。

試劑盒性能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度：zui小的檢測(cè)濃度(dù)小於1號標(biāo)準品。稀釋(shì)度的(dí)綫(xiàn)性(xìng)。樣(yàng)品(pǐn)綫性(xìng)回歸(guī)與(yǔ)預(yù)期濃度(dù)相關(guān)係(xì)數R值(zhí)為0.990。
2. 特(tè)異性(xìng)：不與其它細胞(bāo)因子反(fǎn)應(yīng)。
3. 重(zhòng)復(fù)性：板內，板間變(biàn)異(yì)係(xì)數均小於(yú)10%。

結(jié) 果(guǒ) 判 斷 與(yǔ) 分 析
1，儀(yí)器(qì)值(zhí)：於(yú)波(bō)長450nm的(dí)酶標(biāo)儀上(shàng)讀(dú)取各孔的OD值

2，以(yǐ)吸光度OD值(zhí)為縱坐(zuò)標(biāo)（Y），相應(yīng)的(dí)IL-1標(biāo)準(zhǔn)品濃(nóng)度(dù)為橫坐標（X），做得(dé)相應的曲(qū)綫(xiàn)，樣品的IL-1含(hán)量可根據(jù)其(qí)OD值由(yóu)標準(zhǔn)曲(qū)綫換算(suàn)出(chū)相(xiāng)應(yīng)的濃度。

3，檢(jiǎn)測(cè)值範圍(wéi)：0-800pg/ml

4，敏(mǐn)感度(dù)： 1.0 pg/ml