大鼠 （Rat） P53蛋白ELISA 檢(jiǎn)測試劑盒(hé)
本試(shì)劑(jì)僅供研究(jiū)使(shǐ)用 標本(běn)：血(xiě)清(qīng)或(huò)血(xiě)漿(jiāng)

試驗原理(lǐ)：
p53試劑(jì)盒是固相(xiāng)夾(jiā)心法(fǎ)酶聯免疫吸(xī)附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知p53濃(nóng)度(dù)的標(biāo)準品，未知濃(nóng)度的樣品(pǐn)加入微孔酶標板內(nèi)進行檢(jiǎn)測(cè)。先將p53和(hé)生(shēng)物素標記的(dí)抗(kàng)體同時溫(wēn)育(yù)。洗滌(dí)後，加入親和素標(biāo)記過(guò)的(dí)HRP。再(zài)經(jīng)過溫(wēn)育(yù)和洗滌(dí)，去除未結(jié)合(hé)的(dí)酶(méi)結(jié)合物，然後加入底(dǐ)物(wù)A，B，和(hé)酶(méi)結(jié)合物(wù)同時(shí)作用。產(chǎn)生顏(yán)色。顏(yán)色的深淺和樣品(pǐn)中p53的濃度呈(chéng)比例(lì)關係(xì)。

試(shì)劑盒(hé)內(nèi)容及(jí)其配製
試劑盒成份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配(pèi)置(zhì) 48孔(kǒng)配(pèi)置(zhì) 配(pèi)製(zhì)
96/48人(rén)份酶標(biāo)板(bǎn) 1塊板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊板(bǎn)（48T） 即(jí)用(yòng)型
塑(sù)料膜板(bǎn)蓋(gài) 1塊(kuài) 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：400pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按(àn)說明書(shū)進行稀(xī)稀
空(kōng)白(bái)對照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型(xíng)
標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型(xíng)
生物素標(biāo)記的抗p53抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
親和鏈(liàn)酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗(xǐ)滌緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按(àn)說明書(shū)進行稀釋(shì)
底物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
底(dǐ)物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止(zhǐ)液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

自備(bèi)材料
1． 蒸餾(liù)水。
2． 加(jiā)樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200ul，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁(cí)力(lì)攪(jiǎo)拌器(qì)等。

安(ān)全(quán)性
1． 避免直接(jiē)接觸(chù)終止液和(hé)底(dǐ)物A，B。一(yī)旦接(jiē)觸(chù)到這些(xiē)液(yè)體，請盡快(kuài)用水衝(chōng)洗。
2． 實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)要吃喝(hē)，抽(chōu)煙(yān)或使(shǐ)用化妝(zhuāng)品。
3． 不要(yào)用嘴吸取(qǔ)試(shì)劑盒(hé)裏的(dí)任(rèn)何成份(fèn)。

操作(zuò)注(zhù)意事項
1． 試劑(jì)應(yīng)按(àn)標(biāo)簽(qiān)說(shuō)明書(shū)儲存(cún)，使(shǐ)用(yòng)前恢復(fù)到(dào)室(shì)溫(wēn)。稀稀過後(hòu)的(dí)標(biāo)準品應丟棄(qì)，不(bù)可(kě)保存(cún)。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用(yòng)的(dí)板(bǎn)條應立即(jí)放回包(bāo)裝袋(dài)中(zhōng)，密(mì)封(fēng)保存，以免變(biàn)質(zhì)。
3． 不用的(dí)其它試(shì)劑應(yīng)包裝好或蓋(gài)好。不同批號(hào)的試劑(jì)不要混(hùn)用。保(bǎo)質(zhì)前(qián)使(shǐ)用。
4． 使用(yòng)一(yī)次性(xìng)的吸頭以免(miǎn)交叉汙染(rǎn)，吸取終止液和底物A，B液時，避免使用(yòng)帶金屬部分的加樣器。
5． 使(shǐ)用(yòng)幹(gān)淨的(dí)塑料(liào)容器(qì)配置洗滌液。使用(yòng)前(qián)充分混匀試劑(jì)盒(hé)裏的各種成份(fèn)及樣品。
6． 洗(xǐ)滌酶標(biāo)板(bǎn)時(shí)應(yīng)充分拍幹(gān)，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水紙(zhǐ)直接(jiē)放(fàng)入(rù)酶標(biāo)反應孔中吸(xī)水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物A應揮發(fā)，避免(miǎn)長(cháng)時間打開(kāi)蓋(gài)子(zǐ)。底(dǐ)物B對(duì)光(guāng)敏感(gǎn)，避免長(cháng)時間暴(bào)露(lòu)於光下(xià)。避免(miǎn)用手(shǒu)接(jiē)觸，有(yǒu)毒(dú)。實驗完成後應(yīng)立即(jí)讀(dú)取OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入(rù)試劑的順序應(yīng)一(yī)致，以保證(zhèng)所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照(zhào)說明(míng)書中(zhōng)標明的時間，加(jiā)液的量及(jí)順序進行溫(wēn)育操(cāo)作(zuò)。

樣(yàng)品收集，處理及(jí)保(bǎo)存方法
1， 血清(qīng)-----操(cāo)作過程中避免任何(hé)細(xì)胞刺激(jī)。使用不(bù)含(hán)熱(rè)原和(hé)內毒(dú)素(sù)的(dí)試(shì)管。收集(jí)血(xiě)液後，1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘(zhōng)將血清和紅細(xì)胞迅速(sù)小心地(dì)分(fēn)離。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸檬(méng)酸鹽，肝素血漿(jiāng)可用於(yú)檢(jiǎn)測(cè)。1000×g離心30分(fēn)鐘(zhōng)去(qù)除(chú)顆粒。
3， 細胞(bāo)上(shàng)清(qīng)液(yè)---1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘(zhōng)去除(chú)顆粒(lì)和聚(jù)合物(wù)。
4， 保(bǎo)存------如(rú)果樣品不立即(jí)使(shǐ)用，應將其分成小(xiǎo)部分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反復冷(lěng)凍。盡(jìn)可能(néng)的不要使(shǐ)用(yòng)溶血或(huò)高(gāo)血脂(zhī)血。如果(guǒ)血清(qīng)中(zhōng)大(dà)量顆(kē)粒，檢(jiǎn)測前先離(lí)心或過(guò)濾。不要在37℃或更高(gāo)的溫(wēn)度加(jiā)熱解(jiě)凍。應(yīng)在(zài)室(shì)溫下(xià)解凍(dòng)並(bìng)確保樣(yàng)品(pǐn)均匀地充(chōng)分(fēn)解(jiě)凍。

試劑(jì)的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標準品(pǐn)：標(biāo)準品的係列(liè)稀釋應在實驗(yàn)時(shí)準備，不(bù)能儲(chǔ)存(cún)。稀(xī)釋(shì)前將(jiāng)標(biāo)準品振蕩混(hùn)匀。稀釋(shì)比例按(àn)下(xià)表中(zhōng)進行：
400 pg/ml （6號標(biāo)準品） 原(yuán)倍(bèi)濃度不用稀釋直(zhí)接加入(rù)50ul。
200 pg/ml （5號(hào)標準品） 100ul的原倍(bèi)標準(zhǔn)品加入100ul的標準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （4號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)5號標準(zhǔn)品加入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋液
50 pg/ml （3號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準品加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液
25 pg/ml （2號標(biāo)準品） 100ul的(dí)3號標(biāo)準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的標準品稀釋(shì)液
12.5 pg/ml （1號標準品(pǐn)） 100ul的(dí)2號標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液
0 pg/ml （空白(bái)對照） 原(yuán)始濃度(dù)不用(yòng)稀釋直(zhí)接加(jiā)入50ul。

2． 洗滌(dí)緩衝液（50×）的稀釋(shì)：蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)50倍(bèi)稀(xī)釋(shì)。

操(cāo)作步驟
1． 使(shǐ)用前(qián)，將所(suǒ)有試劑充分混(hùn)匀(yún)。不要使液(yè)體(tǐ)產生大(dà)量(liáng)的泡(pào)沫，以(yǐ)免加(jiā)樣(yàng)時加(jiā)入大(dà)量的(dí)氣(qì)泡(pào)，產生加樣(yàng)上(shàng)的誤差。
2． 根據待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)數(shù)量(liáng)加上(shàng)標準品(pǐn)的數(shù)量(liáng)決定所需的板條數。每(měi)個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)和空白孔(kǒng)建議做復(fù)孔。每個樣(yàng)品(pǐn)根據(jù)自(zì)己的(dí)數(shù)量來(lái)定，能(néng)使用復孔的盡(jìn)量(liáng)做復孔。
3． 加入稀(xī)釋好(hǎo)後(hòu)的(dí)標(biāo)準品(pǐn)50ul於(yú)反應(yīng)孔，加(jiā)入待測(cè)樣品(pǐn)50ul於反應孔內(nèi)。立即加入(rù)50ul的(dí)生(shēng)物(wù)素標(biāo)記的(dí)抗體。蓋(gài)上膜(mó)板，輕(qīng)輕振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫育(yù)1小時。
4． 甩去孔(kǒng)內液體，每(měi)孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液，振(zhèn)蕩30秒，甩去洗(xǐ)滌液(yè)，用吸(xī)水紙(zhǐ)拍幹。重復此操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如果用(yòng)洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌(dí)次數(shù)增加(jiā)一次。
5． 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)80ul的親和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP，輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育(yù)30分鐘。
6． 甩去(qù)孔內(nèi)液體，每(měi)孔(kǒng)加(jiā)滿(mǎn)洗滌液(yè)，振蕩(dàng)30秒，甩去(qù)洗滌液，用吸(xī)水紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如果用(yòng)洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔(kǒng)加入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育10分鐘。避免光(guāng)照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶(méi)標板，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止(zhǐ)液(yè)，加入終(zhōng)止液(yè)後應(yīng)立即(jí)測(cè)定結果。
9． 在(zài)450nm波長(cháng)處(chǔ)測(cè)定各(gè)孔的(dí)OD值。

建議(yì)使(shǐ)用的(dí)實(shí)驗(yàn)方案
 標準(zhǔn)品(pǐn)濃度(dù)（pg/ml） 
A 400 400 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 200 200 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
C 100 100 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品
D 50 50 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)
E 25 25 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
F 12.5 12.5 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
G 0 0 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品
H 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn)

局限(xiàn)
6號標(biāo)準品以上的(dí)結果(guǒ)為(wéi)非(fēi)綫性(xìng)的(dí)，根據此標準曲綫(xiàn)無法(fǎ)得到的(dí)結果。

試劑(jì)盒性能
1. 靈敏度：zui小(xiǎo)的檢(jiǎn)測(cè)濃(nóng)度(dù)小於1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)。稀釋(shì)度(dù)的綫性。樣(yàng)品(pǐn)綫性回(huí)歸與(yǔ)預期濃(nóng)度相(xiāng)關係數(shù)R值(zhí)為0.990。
2. 特異(yì)性：不(bù)與其(qí)它(tā)細胞(bāo)因子反(fǎn)應。
3. 重復性(xìng)：板內，板間變異係(xì)數(shù)均(jūn)小(xiǎo)於(yú)10%。

結(jié) 果 判 斷(duàn) 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀器(qì)值：於波長(cháng)450nm的(dí)酶標(biāo)儀上(shàng)讀(dú)取各孔的OD值

2，以吸光度OD值(zhí)為縱(zòng)坐(zuò)標（Y），相應(yīng)的(dí)p53標準品(pǐn)濃(nóng)度為橫坐標(biāo)（X），做(zuò)得相應的曲綫，樣品的p53含量(liáng)可(kě)根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲綫換(huàn)算(suàn)出相應的(dí)濃度。

3，檢(jiǎn)測值範圍：0-400pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml