試驗原理：
BAX試劑(jì)盒是固相夾(jiā)心法酶(méi)聯免疫(yì)吸附(fù)實驗(yàn)（ELISA）.已知(zhī)BAX濃(nóng)度的(dí)標準品，未(wèi)知濃(nóng)度的(dí)樣(yàng)品加入微(wēi)孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先(xiān)將BAX和(hé)生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗(xǐ)滌後(hòu)，加入親和(hé)素(sù)標記(jì)過的(dí)HRP。再(zài)經過溫育和(hé)洗(xǐ)滌，去除(chú)未結(jié)合的酶(méi)結合物，然後(hòu)加(jiā)入底(dǐ)物A，B，和(hé)酶結合(hé)物同時(shí)作用。產生顏色(sè)。顏(yán)色(sè)的(dí)深(shēn)淺和(hé)樣品(pǐn)中BAX的濃(nóng)度(dù)呈比例(lì)關(guān)係。

試劑盒(hé)內容(róng)及其配(pèi)製(zhì)
試(shì)劑(jì)盒成份（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配(pèi)置 48孔配置 配製
96/48人份(fèn)酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用(yòng)型(xíng)
塑料膜板(bǎn)蓋(gài) 1塊 半塊(kuài) 即(jí)用型
標準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白(bái)對(duì)照(zhào) 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即用型
標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)緩衝液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即(jí)用型(xíng)
生物(wù)素(sù)標(biāo)記的抗BAX抗(kàng)體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
親(qīn)和鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即用型(xíng)
洗滌(dí)緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明(míng)書進行(háng)稀釋(shì)
底物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
終止(zhǐ)液 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

自(zì)備材料
1． 蒸餾(liù)水。
2． 加(jiā)樣(yàng)器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁力(lì)攪拌器(qì)等(děng)。

安全性(xìng)
1． 避免(miǎn)直接(jiē)接觸終止(zhǐ)液和(hé)底物A，B。一旦(dàn)接觸到(dào)這(zhè)些(xiē)液(yè)體，請(qǐng)盡(jìn)快用(yòng)水衝(chōng)洗(xǐ)。
2． 實(shí)驗中(zhōng)不要吃喝(hē)，抽煙(yān)或(huò)使用(yòng)化(huà)妝品。
3． 不要用嘴吸(xī)取試(shì)劑盒(hé)裏的任何成份。

操作(zuò)注(zhù)意(yì)事項
1． 試劑(jì)應按標(biāo)簽(qiān)說(shuō)明(míng)書(shū)儲存，使用(yòng)前(qián)恢(huī)復到室(shì)溫(wēn)。稀(xī)稀(xī)過(guò)後的(dí)標準品應(yīng)丟棄(qì)，不可(kě)保存(cún)。
2． 實驗中不(bù)用的(dí)板(bǎn)條應立即(jí)放回包裝袋(dài)中，密封保(bǎo)存(cún)，以免(miǎn)變質。
3． 不用的其它試(shì)劑(jì)應包(bāo)裝好或(huò)蓋好(hǎo)。不同批(pī)號的(dí)試劑(jì)不(bù)要(yào)混(hùn)用。保(bǎo)質前使用。
4． 使(shǐ)用一(yī)次性的吸頭以免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染，吸取(qǔ)終止(zhǐ)液和(hé)底(dǐ)物A，B液時(shí)，避(bì)免使用帶金屬(shǔ)部(bù)分的加樣(yàng)器。
5． 使用幹(gān)淨(jìng)的塑料(liào)容器(qì)配置洗(xǐ)滌(dí)液。使(shǐ)用前充(chōng)分(fēn)混匀試劑盒裏(lǐ)的各(gè)種(zhǒng)成(chéng)份及樣(yàng)品。
6． 洗(xǐ)滌酶標板時應(yīng)充分拍(pāi)幹(gān)，不要將吸(xī)水(shuǐ)紙直接放入(rù)酶(méi)標(biāo)反應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng)吸水。
7． 底物(wù)A應(yīng)揮發，避免長時間打開蓋子。底(dǐ)物B對光敏(mǐn)感(gǎn)，避免長時間暴(bào)露於光下(xià)。避(bì)免用(yòng)手接觸，有毒。實(shí)驗完(wán)成後(hòu)應立(lì)即讀(dú)取(qǔ)OD值。
8． 加入試劑的順序(xù)應一(yī)致(zhì)，以保(bǎo)證所(suǒ)有(yǒu)反(fǎn)應(yīng)板孔溫(wēn)育的時(shí)間一(yī)樣(yàng)。
9． 按(àn)照說(shuō)明(míng)書中標明的時(shí)間，加液(yè)的量及(jí)順序(xù)進行(háng)溫育(yù)操作(zuò)。

樣品收(shōu)集，處(chǔ)理及保存方(fāng)法
1， 血(xiě)清-----操作過(guò)程中(zhōng)避免任何(hé)細胞刺激。使用(yòng)不(bù)含熱原(yuán)和(hé)內毒素(sù)的(dí)試(shì)管(guǎn)。收(shōu)集(jí)血(xiě)液後(hòu)，1000×g離(lí)心10分鐘將(jiāng)血清(qīng)和紅細胞(bāo)迅速小心地分(fēn)離。
2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸(níng)檬(méng)酸鹽(yán)，肝素(sù)血(xiě)漿可用(yòng)於檢(jiǎn)測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆粒(lì)。
3， 細(xì)胞上清(qīng)液(yè)---1000×g離心10分(fēn)鐘去除顆粒和聚(jù)合物。
4， 保存------如果樣品不(bù)立即使(shǐ)用，應(yīng)將(jiāng)其(qí)分成小(xiǎo)部(bù)分-70 ℃保存(cún)，避(bì)免反復(fù)冷(lěng)凍。盡(jìn)可能的(dí)不(bù)要(yào)使用(yòng)溶血(xiě)或(huò)高血脂血。如果血(xiě)清(qīng)中(zhōng)大量(liáng)顆粒(lì)，檢(jiǎn)測(cè)前(qián)先離心(xīn)或過濾。不要(yào)在(zài)37℃或更(gēng)高(gāo)的溫度加(jiā)熱解凍。應(yīng)在室溫(wēn)下解凍並(bìng)確保樣品(pǐn)均匀(yún)地充分解(jiě)凍。

試劑的(dí)準(zhǔn)備
1． 標準(zhǔn)品：標準(zhǔn)品的(dí)係列稀(xī)釋應在(zài)實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備，不(bù)能(néng)儲(chǔ)存(cún)。稀釋(shì)前將標(biāo)準品(pǐn)振蕩(dàng)混匀(yún)。稀釋比例(lì)按(àn)下表中(zhōng)進(jìn)行：
800 pg/ml （6號標準品(pǐn)） 原倍濃度不(bù)用稀(xī)釋直接(jiē)加(jiā)入50ul。
400 pg/ml （5號標準品） 100ul的(dí)原倍標準品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品稀(xī)釋(shì)液(yè)
200 pg/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)5號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液(yè)
100 pg/ml （3號標準(zhǔn)品） 100ul的4號標準(zhǔn)品加(jiā)入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀(xī)釋液
50 pg/ml （2號(hào)標準品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的(dí)2號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml （空白(bái)對(duì)照） 原始濃度(dù)不用稀釋(shì)直接(jiē)加入50ul。

2． 洗(xǐ)滌(dí)緩衝(chōng)液（50×）的(dí)稀(xī)釋(shì)：蒸(zhēng)餾(liù)水50倍稀釋。

操(cāo)作(zuò)步(bù)驟(zhòu)
1． 使用(yòng)前，將所有(yǒu)試(shì)劑充分混匀。不(bù)要使(shǐ)液(yè)體產(chǎn)生大量的泡(pào)沫，以免(miǎn)加樣(yàng)時(shí)加入(rù)大量的氣泡(pào)，產(chǎn)生加樣(yàng)上的誤(wù)差。
2． 根據(jù)待(dài)測(cè)樣(yàng)品數(shù)量加上標(biāo)準品(pǐn)的數量(liáng)決定(dìng)所(suǒ)需的板(bǎn)條(tiáo)數。每(měi)個標準(zhǔn)品和空(kōng)白(bái)孔(kǒng)建議做復孔。每個樣品(pǐn)根據(jù)自己的(dí)數(shù)量(liáng)來定(dìng)，能(néng)使(shǐ)用(yòng)復孔(kǒng)的(dí)盡量做復(fù)孔。
3． 加入稀(xī)釋(shì)好後(hòu)的(dí)標準品50ul於反應(yīng)孔，加入(rù)待(dài)測樣品50ul於反應孔內。立即(jí)加(jiā)入50ul的(dí)生(shēng)物素(sù)標記(jì)的抗(kàng)體(tǐ)。蓋上膜(mó)板，輕輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育(yù)1小時。
4． 甩去(qù)孔(kǒng)內液體，每(měi)孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗(xǐ)滌(dí)液，用吸(xī)水(shuǐ)紙拍幹(gān)。重(zhòng)復(fù)此操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如果(guǒ)用洗(xǐ)板機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌次數(shù)增加(jiā)一(yī)次。
5． 每(měi)孔加(jiā)入80ul的親和鏈酶素(sù)-HRP，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混(hùn)匀，37℃溫育30分鐘(zhōng)。
6． 甩去(qù)孔(kǒng)內(nèi)液體，每(měi)孔(kǒng)加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，振蕩30秒，甩去(qù)洗(xǐ)滌液，用(yòng)吸(xī)水紙拍幹(gān)。重復此操作3次。如果(guǒ)用(yòng)洗(xǐ)板(bǎn)機洗滌(dí)，洗(xǐ)滌(dí)次數增加(jiā)一次。
7． 每孔(kǒng)加(jiā)入底(dǐ)物(wù)A，B各(gè)50ul，輕輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育(yù)10分鐘(zhōng)。避免光照(zhào)。
8． 取出(chū)酶標(biāo)板，迅速(sù)加(jiā)入(rù)50ul終(zhōng)止液，加入終止(zhǐ)液後(hòu)應(yīng)立即(jí)測定(dìng)結(jié)果(guǒ)。
9． 在(zài)450nm波(bō)長(cháng)處測定(dìng)各(gè)孔的(dí)OD值(zhí)。

建(jiàn)議使用的(dí)實(shí)驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(dù)（pg/ml） 
A 800 800 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品
B 400 400 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn)
C 200 200 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
E 50 50 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
F 25 25 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品
H 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)

局限
6號(hào)標準品以(yǐ)上的(dí)結果(guǒ)為非綫(xiàn)性的，根(gēn)據此標準曲(qū)綫(xiàn)無(wú)法得到的(dí)結(jié)果(guǒ)。

試劑(jì)盒(hé)性能
1. 靈敏度：zui小的檢(jiǎn)測(cè)濃(nóng)度小(xiǎo)於1號(hào)標(biāo)準品(pǐn)。稀釋度的(dí)綫性。樣品綫性回(huí)歸(guī)與預期濃(nóng)度相關(guān)係數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異性(xìng)：不與(yǔ)其它(tā)細(xì)胞(bāo)因子反(fǎn)應。
3. 重復(fù)性：板(bǎn)內，板間變異係數均小(xiǎo)於10%。

結(jié) 果(guǒ) 判(pàn) 斷 與(yǔ) 分(fēn) 析(xī)
1，儀器值：於(yú)波(bō)長450nm的酶標儀(yí)上讀(dú)取(qǔ)各(gè)孔的OD值(zhí)

2，以(yǐ)吸(xī)光度OD值(zhí)為(wéi)縱坐標（Y），相(xiāng)應(yīng)的BAX標(biāo)準品(pǐn)濃度為橫坐標（X），做得相(xiāng)應(yīng)的曲綫，樣(yàng)品的BAX含(hán)量(liáng)可根據其OD值(zhí)由(yóu)標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)換(huàn)算出相應的濃度。

3，檢測(cè)值範圍：0-800pg/ml

4，敏感度： 1.0 pg/ml