試劑空白吸(xī)光度(dù)是反映試劑質(zhì)量的(dí)指(zhǐ)標之(zhī)一(yī)，但(dàn)不(bù)能(néng)反(fǎn)映試(shì)劑質量的(dí)全部。試劑成份(fèn)，純(chún)度(dù)，用(yòng)量(liáng)及穩(wěn)定(dìng)性(xìng)，才是(shì)保證試劑質(zhì)量的關鍵所(suǒ)在。目前市(shì)售(shòu)的一(yī)些(xiē)試(shì)劑具有(yǒu)抗(kàng)幹擾(rǎo)作用(yòng)，主(zhǔ)要(yào)是通(tōng)過(guò)加(jiā)入抗幹擾(rǎo)物質或使用新(xīn)的色(sè)素原以(yǐ)避免(miǎn)內源性物質的(dí)幹(gān)擾(rǎo)。但值(zhí)得注(zhù)意的(dí)是(shì)：一些(xiē)試(shì)驗(yàn)項目在消(xiāo)除內源性(xìng)物質幹擾(rǎo)的(dí)同時，會(huì)帶來(lái)樣品含量(liáng)真(zhēn)實(shí)性(xìng)的(dí)變(biàn)化。
1 試(shì)劑(jì)空白(bái)
試劑空白(bái)吸光度是反(fǎn)映(yìng)試劑質(zhì)量的(dí)指標之一(yī)。每種試劑(jì)都有(yǒu)一定的空白(bái)吸光度範(fàn)圍(wéi)，試(shì)劑(jì)空白(bái)吸光(guāng)度的改變往(wǎng)往提示該(gāi)試劑的變質(zhì)；如(rú)利用Trinder反應為(wéi)原理的(dí)檢測試劑會(huì)因含酚類物質(zhì)被(bèi)氧化(huà)為(wéi)醌(kūn)而(ér)變為紅色。鹼性磷(lín)酸酶(méi)，r一穀氨酰轉(zhuǎn)肽酶(méi)，澱粉(fěn)酶(méi)等檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑會(huì)因(yīn)基質分解出(chū)硝(xiāo)基酚(fēn)或(huò)酚(fēn)基(jī)苯(běn)胺(àn)而(ér)變黃。有(yǒu)些(xiē)試劑久置後變(biàn)渾(hún)濁(zhuó)。這些情(qíng)況均(jūn)可使(shǐ)空白吸光(guāng)度(dù)升高(gāo)。丙(bǐng)氨(ān)酸(suān)氨基轉(zhuǎn)移(yí)酶(méi)，天(tiān)冬氨酸(suān)氨基(jī)轉移(yí)酶(méi)等負反應，在放(fàng)置(zhì)過程中(zhōng)其(qí)試劑(jì)空(kōng)白吸光(guāng)度(dù)會因NADH自(zì)行(háng)氧(yǎng)化為(wéi)NAD+而下(xià)降。原(yuán)則上，吸光度(dù)上(shàng)升的(dí)反應，其(qí)試(shì)劑空白吸光度越(yuè)低(dī)越好(hǎo)，不(bù)能(néng)超過一個(gè)高限；相反(fǎn)，吸光度(dù)下(xià)降(jiàng)的反應(yīng)，其(qí)試劑空(kōng)白吸(xī)光(guāng)度不(bù)能低於一(yī)個低限。因(yīn)此(cǐ)，試劑空(kōng)白吸光度限(xiàn)值，常作為(wéi)程序參數(shù)輸(shū)入儀器(qì)，如經(jīng)核查(chá)超(chāo)限，儀(yí)器會(huì)自動報警(jǐng)，提示(shì)更(gēng)換試(shì)劑。需要指出(chū)的是(shì)，還(huán)原(yuán)型(xíng)輔酶I（或II）等(děng)投料量不(bù)足或劣質(zhì)的原(yuán)料(liào)，往往需要(yào)加(jiā)大(dà)用量，才(cái)使“表觀”吸光度上升，湊合過試(shì)劑空白核對(duì)的“關(guān)”，其後果為(wéi)如下(xià)情況：
1．1 綫(xiàn)性範圍(wéi)變窄 現(xiàn)象(xiàng)：高(gāo)值測不高。原(yuán)因(yīn)：生產試劑時(shí)有效成分(fēn)投(tóu)料(liào)量不足；試劑(jì)成份(fèn)穩定(dìng)性(xìng)較差。
1．2 靈敏度(dù)變低現象：酶(méi)促(cù)反應速度曲綫斜(xié)率下(xià)降(jiàng)，測(cè)定結果(guǒ)有(yǒu)嚴重(zhòng)係統誤差(chà)。原因(yīn)：試劑(jì)底(dǐ)物濃度(dù)不足(zú)。
1．3 低值偏(piān)高 現(xiàn)象：試(shì)劑空(kōng)白的(dí)變化曲(qū)綫（吸光度VS時間(jiān)）明顯波動。原(yuán)因(yīn)：試(shì)劑自(zì)身不穩(wěn)定(dìng)，自行分(fēn)解；工(gōng)具酶純度
不夠(gòu)，雜酶含量超限，導(dǎo)致幹擾(rǎo)作(zuò)用。
2 樣品(pǐn)信(xìn)息
樣品的(dí)溶血(xiě)，脂血，黃(huáng)疸(dǎn)等會(huì)對(duì)測定結果(guǒ)產(chǎn)生非(fēi)化學反(fǎn)應(yīng)的幹(gān)擾(rǎo)。因此，應根據溶血(xiě)，脂(zhī)濁，黃疸(dǎn)的光譜吸(xī)收特性(xìng)，采用(yòng)雙波(bō)長或多(duō)波長(cháng)的(dí)檢測(cè)模式(shì)，並在(zài)結(jié)果計算中(zhōng)扣(kòu)除因(yīn)溶(róng)血(xiě)，脂血，黃疸引起的(dí)影響，減少幹擾程(chéng)度。
3 測(cè)定範圍(wéi)
每種(zhǒng)待(dài)測物都有一個(gè)可(kě)測定的(dí)濃度或(huò)活性(xìng)範圍(wéi)，樣品結果(guǒ)若超(chāo)過此(cǐ)範(fàn)圍(wéi)，分析儀將顯示結果超(chāo)過範圍(wéi)的提示。表示(shì)試(shì)劑已經變(biàn)質，應(yīng)更(gēng)換合(hé)格(gé)試劑。
4 底物耗(hào)盡
使(shǐ)用連續監測法(fǎ)，兩點法(fǎ)測定酶活性(xìng)時(shí)，若(ruò)酶活(huó)性非常(cháng)高(gāo)，底物(wù)接近(jìn)被(bèi)耗(hào)盡(jìn)，吸光(guāng)度上升(shēng)或(huò)下(xià)降(jiàng)會超過某一吸光度(dù)變化範圍(wéi)，監測期(qī)的(dí)吸光(guāng)度將(jiāng)偏(piān)離綫(xiàn)性(xìng)，使測定結果不可(kě)靠(kào)。
5 酶(méi)的(dí)預活(huó)化
測(cè)定血清中的某些(xiē)酶，如CK，離體(tǐ)（采血(xiě)）後很(hěn)容易失活(huó)。失(shī)活的(dí)原因(yīn)是酶活(huó)性(xìng)中心的(dí)活性(xìng)基(jī)因(yīn)巰基(jī)（一SH）被(bèi)氧化造成(chéng)的(dí)。隻有通過(guò)適當(dāng)的還原作用(yòng)才(cái)能(néng)重新(xīn)激活(huó)。如CK—NAC試(shì)劑(jì)盒即(jí)含有CK活化劑(jì)，名為(wéi)N一乙酰半(bàn)胱(guāng)氨酸(suān)。實驗研(yán)究證明，NAC對(duì)血清(qīng)中已(yǐ)失活(huó)的(dí)CK活化過(guò)程(chéng)約需180 S。這就是(shì)CK測定(dìng)為什麼要(yào)延(yán)遲(chí)時間(jiān)較長的理(lǐ)論(lùn)依據(jù)。在AST，ALT采用(yòng)IFCC推薦方法(fǎ)測定(dìng)時(shí)需要(yào)磷(lín)酸吡哆醛(quán)預活化。需要(yào)強調：含有活(huó)化劑(jì)的(dí)生化試劑，其測定(dìng)酶活性的(dí)結果要(yào)高些(xiē)。
6 校(xiào)準(zhǔn)與結果溯(sù)源性(xìng)
酶(méi)的(dí)校正(zhèng)：要滿(mǎn)足在(zài)同一方(fāng)法學，同一(yī)測(cè)定條件，與(yǔ)理(lǐ)論計算的FACTOR值差(chà)異不(bù)大，沒(méi)有發現有明顯(xiǎn)影響因素，方可
進行(háng)校(xiào)正。
檢(jiǎn)驗(yàn)結(jié)果(guǒ)溯(sù)源性(xìng)，得(dé)建立(lì)一(yī)個可(kě)靠的參考(kǎo)係統作為(wéi)準確性基礎(chǔ)，然後將準(zhǔn)確(què)性轉(zhuǎn)移到(dào)常規方法測定中(zhōng)去(qù)，使常(cháng)規方(fāng)法測定(dìng)結果(guǒ)可溯源到(dào)參考係(xì)統(tǒng)所提(tí)供(gōng)的(dí)準確(què)性基(jī)礎(chǔ)上來。在實現溯源(yuán)性(xìng)目(mù)標過程中，永遠以患者新鮮標(biāo)本為實驗(yàn)對(duì)象，以(yǐ)方(fāng)法學對比試驗方法為驗證手段(duàn)。方法(fǎ)學(xué)對比試(shì)驗常(cháng)采用(yòng)回歸方程(chéng)進行(háng)統計分(fēn)析(xī)，假如斜率(shuài)接近1，截距(jù)較小，這意味著實驗(yàn)室(shì)常(cháng)規(guī)方法(fǎ)對標(biāo)本測定結果和溯源(yuán)目標(biāo)參(cān)考(kǎo)係統對標本檢測結果(guǒ)非常(cháng)接近。
臨(lín)床(chuáng)化學中(zhōng)參考標準（二(èr)級標準）要(yào)有通用(yòng)性，但(dàn)生產廠(chǎng)家提供(gōng)的校(xiào)準(zhǔn)液並非通用的，隻(zhī)適用(yòng)於(yú)某一(yī)特(tè)定(dìng)的(dí)分析係(xì)統。
校(xiào)準(zhǔn)液標示值往(wǎng)往是按(àn)其(qí)基(jī)質(zhì)偏(piān)差(chà)修(xiū)正的(dí)，所以(yǐ)標(biāo)示值(zhí)並(bìng)非(fēi)實際值。校準(zhǔn)液，質(zhì)控血(xiě)清通常是(shì)經過處理的混合人(rén)或(huò)動物血(xiě)清(qīng)，這種製備物在特(tè)定(dìng)分析(xī)係統(tǒng)中(zhōng)往往與人(rén)新鮮(xiān)血清(qīng)反(fǎn)應性不(bù)同而產(chǎn)生基(jī)質(zhì)偏(piān)差。如總(zǒng)膽(dǎn)固醇(chún)測定基質(zhì)效應(yīng)研究指出：校準液(yè)酶(méi)法測定回(huí)收(shōu)結(jié)果偏低可(kě)達5%~7%。
7 試劑抗(kàng)幹擾(rǎo)作用的合理性有些液體(tǐ)雙試劑，其實質並(bìng)不真正具(jù)備抗(kàng)幹擾(rǎo)的(dí)能(néng)力(lì)而隻(zhī)是解決了試劑的(dí)液(yè)體(tǐ)化(huà)和(hé)穩定(dìng)性問(wèn)題。如，ALT試(shì)劑(jì)盒中(zhōng)，NADH在(zài)pH7.5~7.8水溶液中極(jí)不(bù)穩定，在(zài)pH>8.7時(shí)才(cái)能(néng)穩定保存。因此(cǐ)，為了(liǎo)保證試(shì)劑穩定(dìng)性(xìng)，液體雙試劑的(dí)R1需要(yào)維持pH>8.7，但此時(shí)LDH活(huó)性大大下降，就失去消(xiāo)除內源性丙酮(tóng)酸的功能，隻(zhī)有(yǒu)加入試(shì)劑R2後，反(fǎn)應混(hùn)合液(yè)的(dí)pH下(xià)降至LDHzui適(shì)pH，在(zài)經過延遲(chí)時(shí)間60 S後(hòu)，才(cái)能消除內源(yuán)性(xìng)丙酮酸(suān)的(dí)幹(gān)擾(rǎo)。再如，Tfinder反(fǎn)應中(zhōng)抗Vc幹(gān)擾問題：由於維(wéi)生素(sù)c易(yì)氧(yǎng)化(huà)，樣(yàng)品中(zhōng)Vc會競(jìng)爭反應生成的*，而產(chǎn)生(shēng)負幹(gān)擾。因此，在試(shì)劑(jì)R1中加(jiā)入(rù)抗(kàng)壞(huài)血(xiě)酸(suān)氧化酶(méi)，這(zhè)種方法(fǎ)是有效的，但不(bù)一(yī)定有很(hěn)大(dà)的(dí)意義(yì)。因(yīn)為(wéi)Vc幹擾(rǎo)必須同時具(jù)備二個條件(jiàn)：a）Vc攝(shè)入量較多；b）采血(xiě)後立(lì)即測定。實驗表明(míng)離(lí)體(tǐ)血(xiě)清中Vc在90 min後(hòu)會全(quán)部被氧(yǎng)化。又如，使(shǐ)用(yòng)胺(àn)類(lèi)新色(sè)原(yuán)。a）分子共軛(è)結構特性(xìng)使得靈(líng)敏度(dù)提(tí)高(gāo)，相(xiāng)應可(kě)以(yǐ)減(jiǎn)少(shǎo)樣本(běn)用(yòng)量(liáng)，zui終(zhōng)能(néng)有(yǒu)效地(dì)降低幹(gān)擾物的(dí)量．b）使生成胺類(lèi)色素原(yuán)zui大吸(xī)收(shōu)峰(fēng)由500~520 nm移(yí)至(zhì)550 nm以上(shàng)，以(yǐ)避開(kāi)黃(huáng)疸，溶血(xiě)幹(gān)擾。如：亞鐵氰化(huà)鉀(jiǎ)一H 0 ，能(néng)有(yǒu)效(xiào)避免(miǎn)黃(huáng)疸(dǎn)幹擾的(dí)理(lǐ)論依據是亞鐵氰(qíng)化鉀與(yǔ)H。0。親和(hé)力遠遠大(dà)於膽紅素。
甘(gān)油(yóu)三酯(zhǐ)測定(dìng)，有人主張選(xuǎn)用(yòng)雙試(shì)劑方法消(xiāo)除內源性甘(gān)油(yóu)，這個方(fāng)法是(shì)可(kě)行(háng)的，但(dàn)忽視(shì)了一(yī)個化學(xué)平(píng)衡理論。因為所(suǒ)有的酯在水溶液(yè)中都(dū)不是(shì)簡單(dān)地以(yǐ)酯(zhǐ)的形式存在，而是(shì)以水解與酯化(huà)相平(píng)衡(héng)的(dí)形式(shì)存(cún)在。在(zài)一(yī)個平衡(héng)體(tǐ)係中，如果去除遊(yóu)離甘(gān)油，這個(gè)平衡就(jiù)向(xiàng)生成(chéng)甘油(yóu)方(fāng)向移動，甘油三(sān)酯(zhǐ)就(jiù)會重新水(shuǐ)解(jiě)，生(shēng)成(chéng)新(xīn)的(dí)甘(gān)油(yóu)，達(dá)到新的平衡(héng)，因此樣品(pǐn)與R1試劑孵育時間越長(cháng)，測得甘(gān)油三(sān)酯值(zhí)就越(yuè)低。甘(gān)油(yóu)三酯(zhǐ)測定(dìng)，不僅(jǐn)要(yào)去除遊(yóu)離(lí)甘油，而且(qiě)還要(yào)克(kè)服樣本(běn)含量真實性發生(shēng)的(dí)變(biàn)化，試劑中必須(xū)加入(rù)甘(gān)油激(jī)酶，並(bìng)且延(yán)遲時間(jiān)要標(biāo)準化。所以(yǐ)，一(yī)些(xiē)試驗(yàn)項(xiàng)目在消除(chú)內(nèi)源性物質幹擾的同時(shí)，會帶來(lái)樣品(pǐn)含量真實性的(dí)變化。