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ABA ELISA試(shì)劑(jì)盒(hé)用(yòng)於(yú)植物(wù)提取(qǔ)液ABA

更新(xīn)時(shí)間:2010-11-16  |  點(diǎn)擊(jī)率(shuài):6210

 

詳細(xì)介紹(shào):
用 途
ABA ELISA試劑盒用於(yú)植(zhí)物(wù)提取液ABA 。本試(shì)劑(jì)盒(hé)可以(yǐ)檢測(cè)天然和重(zhòng)組的ABA 。
本試劑盒於科研,而(ér)非(fēi)用(yòng)於(yú)臨床診斷。
試(shì)驗原(yuán)理
ABA 試(shì)劑盒(hé)是固相(xiāng)夾(jiā)心法酶(méi)聯(lián)免(miǎn)疫吸附實驗(ELISA).已(yǐ)知ABA 濃度(dù)的(dí)標準(zhǔn)品,未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的(dí)樣(yàng)品加入(rù)微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢(jiǎn)測(cè)。先將(jiāng)ABA 和(hé)生(shēng)物素(sù)標(biāo)記(jì)的(dí)抗(kàng)體同(tóng)時溫育。洗(xǐ)滌後,加入親和(hé)素(sù)標記(jì)過的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結合的(dí)酶結(jié)合(hé)物,然(rán)後加(jiā)入底物A,B,和酶(méi)結(jié)合(hé)物(wù)同(tóng)時(shí)作用。產(chǎn)生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏色(sè)的深淺(qiǎn)和樣品(pǐn)中ABA 的濃(nóng)度呈(chéng)比例關(guān)係(xì)。
試劑(jì)盒(hé)內容及(jí)其(qí)配(pèi)製

試(shì)劑(jì)盒成(chéng)份(2-8保(bǎo)存(cún))
96孔配(pèi)置
48孔(kǒng)配(pèi)置(zhì)
配製
96/48人(rén)份(fèn)酶標板(bǎn)
1塊板(bǎn)(96T)
半(bàn)塊(kuài)板(bǎn)(48T)
即用(yòng)型(xíng)
塑料(liào)膜板(bǎn)蓋
1塊(kuài)
半(bàn)塊(kuài)
即用(yòng)型
標準(zhǔn)品:40nmol/L
1瓶(0.6ml)
1瓶(0.3ml)
按說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行稀稀
空(kōng)白對照(zhào)
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
即(jí)用型(xíng)
標準品稀釋緩衝(chōng)液(yè)
1瓶(5ml)
1瓶(píng)(2.5ml)
即用型
生物素標(biāo)記(jì)的抗ABA抗體(tǐ)
1瓶(píng)(6ml)
1瓶(píng)(3.0ml)
即用型
親和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP
1瓶(píng)(10ml)
1瓶(5.0ml)
即用(yòng)型(xíng)
洗滌緩(huǎn)衝液
1瓶(60ml)
1瓶(píng)(30ml)
按(àn)說明書進(jìn)行稀(xī)釋
底物(wù)A
1瓶(6.0ml)
1瓶(píng)(3.0ml)
即(jí)用(yòng)型
底(dǐ)物B
1瓶(píng)(6.0ml)
1瓶(píng)(3.0ml)
即用型
終止(zhǐ)液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即(jí)用型(xíng)

自備材(cái)料
1. 蒸餾(liù)水。
2. 加樣(yàng)器:5ul,10 ul,50 ul,100 ul,200,500 u,1000lul。
3. 振(zhèn)蕩器(qì)及(jí)磁(cí)力攪(jiǎo)拌(bàn)器(qì)等(děng)。
安全性
1. 此(cǐ)試劑(jì)盒(hé)的人(rén)血製品(pǐn)中(zhōng)的(dí)HbsAg,和抗HIV為(wéi)陰(yīn)性,但沒(méi)有(yǒu)實(shí)驗(yàn)室可*保證(zhèng)此血(xiě)製品(pǐn)不會傳(chuán)染肝炎,AIDS或(huò)其(qí)它傳染病(bìng),依據當(dāng)地的(dí)安全(quán)條例處理(lǐ)本(běn)試(shì)劑(jì)盒裏(lǐ)的成份及(jí)血清和血漿等(děng)樣品。
2. 避免直接接觸(chù)終止(zhǐ)液和底物A,B。一(yī)旦接觸到(dào)這(zhè)些(xiē)液體(tǐ),請盡快(kuài)用水(shuǐ)衝洗(xǐ)。
3. 實(shí)驗中不要吃喝,抽煙(yān)或使用化妝(zhuāng)品。
4. 不要用(yòng)嘴(zuǐ)吸(xī)取試劑(jì)盒(hé)裏的任何(hé)成(chéng)份(fèn)。
操作注意事項
1. 試劑應按(àn)標簽(qiān)說明書儲存(cún),使用前(qián)恢復(fù)到(dào)室溫(wēn)。稀稀過後的(dí)標準品應(yīng)丟棄,不可(kě)保存。
2. 實(shí)驗中(zhōng)不用(yòng)的板條應(yīng)立(lì)即放回包裝袋中(zhōng),密(mì)封保(bǎo)存(cún),以免(miǎn)變質。
3. 不用的其(qí)它試劑應(yīng)包(bāo)裝好或蓋(gài)好(hǎo)。不同批號的試劑不要混用。保質前(qián)使用(yòng)。
4. 使用一(yī)次性的吸頭以免(miǎn)交叉汙染,吸取終止液和底物A,B液時(shí),避(bì)免使用帶金(jīn)屬部(bù)分(fēn)的加(jiā)樣器。
5. 使(shǐ)用(yòng)幹淨的(dí)塑(sù)料(liào)容(róng)器(qì)配(pèi)置洗(xǐ)滌(dí)液(yè)。使(shǐ)用前充分混匀試劑盒裏(lǐ)的各種成(chéng)份及(jí)樣(yàng)品。
6. 洗滌(dí)酶標板(bǎn)時(shí)應(yīng)充(chōng)分(fēn)拍(pāi)幹(gān),不要將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙(zhǐ)直(zhí)接放入(rù)酶標(biāo)反(fǎn)應孔中(zhōng)吸水(shuǐ)。
7. 底(dǐ)物A應(yīng)揮發,避(bì)免(miǎn)長(cháng)時間(jiān)打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避(bì)免長(cháng)時(shí)間暴露(lòu)於光(guāng)下(xià)。避免用手(shǒu)接觸,有(yǒu)毒。實驗(yàn)完(wán)成後應(yīng)立即(jí)讀取(qǔ)OD值。
8. 加入(rù)試(shì)劑的順序(xù)應一致,以(yǐ)保證所有反應板(bǎn)孔溫育(yù)的時(shí)間一(yī)樣(yàng)。
9. 按照說明(míng)書中(zhōng)標(biāo)明的時(shí)間,加(jiā)液的量及(jí)順(shùn)序(xù)進行溫(wēn)育操(cāo)作。
試劑的(dí)準備(bèi)
1. 標準品(pǐn):標(biāo)準(zhǔn)品的係(xì)列(liè)稀釋應在實(shí)驗時準備,不(bù)能儲(chǔ)存(cún)。稀釋(shì)前(qián)將標(biāo)準品(pǐn)振(zhèn)蕩(dàng)混匀。稀(xī)釋(shì)比例(lì)按下(xià)表(biǎo)中(zhōng)進行:

40 nmol/L
(6號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn))
原倍濃度(dù)不用稀釋直(zhí)接加入50ul。
20 nmol/L
(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的(dí)原倍標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入(rù)100ul的(dí)標(biāo)準品稀釋液
10 nmol/L
(4號(hào)標準品)
100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的(dí)標準品稀(xī)釋(shì)液
5.0 nmol/L
(3號標準品(pǐn))
100ul的4號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準品(pǐn)稀釋液
2.5 nmol/L
(2號標準(zhǔn)品(pǐn))
100ul的(dí)3號標準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀釋液
1.25 nmol/L
(1號(hào)標準(zhǔn)品)
100ul的(dí)2號標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液(yè)
0 nmol/L
(空(kōng)白(bái)對照(zhào))
原始(shǐ)濃度(dù)不用稀釋直接(jiē)加入(rù)50ul。

2. 洗(xǐ)滌緩衝(chōng)液(yè)(20×)的稀(xī)釋:蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)20倍稀(xī)釋(shì)。
操(cāo)作步(bù)驟
1. 使用(yòng)前,將所有試劑(jì)充分(fēn)混匀。不要使(shǐ)液體(tǐ)產生大(dà)量的泡沫,以(yǐ)免(miǎn)加(jiā)樣時加(jiā)入大量的(dí)氣泡(pào),產(chǎn)生(shēng)加樣上(shàng)的(dí)誤差。
2. 根據待測樣品(pǐn)數量加上(shàng)標準(zhǔn)品(pǐn)的數(shù)量決定(dìng)所需(xū)的(dí)板條數。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔(kǒng)建議做復孔。每(měi)個樣(yàng)品根(gēn)據(jù)自己的數(shù)量來定,能(néng)使(shǐ)用(yòng)復(fù)孔的盡量(liáng)做復(fù)孔。
3. 加入稀釋(shì)好後(hòu)的標準品(pǐn)50ul於反應(yīng)孔,加入待測樣(yàng)品(pǐn)50ul於反應孔內。立即加入50ul的(dí)生(shēng)物(wù)素標記(jì)的抗體。蓋上膜板,輕輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún),37℃溫(wēn)育(yù)1小時。
4. 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內液(yè)體,每孔(kǒng)加滿洗滌液(yè),振蕩(dàng)30秒,甩去(qù)洗(xǐ)滌液,用吸水紙拍幹。重復此(cǐ)操(cāo)作(zuò)四次(cì)。如果(guǒ)用洗板機洗(xǐ)滌,洗滌次(cì)數(shù)增(zēng)加(jiā)一次(cì)。
5. 每(měi)孔加(jiā)入(rù)80ul的親(qīn)和鏈(liàn)酶(méi)素(sù)-HRP,輕輕振(zhèn)蕩(dàng)混匀,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去(qù)孔內(nèi)液體(tǐ),每孔加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液,振蕩30秒,甩去洗(xǐ)滌液,用(yòng)吸水紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重復此(cǐ)操作四次(cì)。如(rú)果用洗板(bǎn)機洗滌(dí),洗滌(dí)次(cì)數(shù)增加(jiā)一(yī)次。
7. 每孔加(jiā)入(rù)底(dǐ)物A,B各(gè)50ul,輕(qīng)輕(qīng)振(zhèn)蕩混匀(yún),37℃溫(wēn)育(yù)15分(fēn)鐘。避免(miǎn)光照。
8. 取(qǔ)出(chū)酶(méi)標板,迅速(sù)加(jiā)入50ul終止液,加(jiā)入終止液(yè)後(hòu)應(yīng)立(lì)即測(cè)定結果(guǒ)。
9. 在450nm波長處測(cè)定(dìng)各孔(kǒng)的OD值。
建議使用的(dí)實驗(yàn)方(fāng)案

 
標(biāo)準品(pǐn)濃度(dù)(nmol/L)
 
A
40
40
樣(yàng)品(pǐn)
樣品(pǐn)
樣(yàng)品(pǐn)
樣(yàng)品
樣品
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品
B
20
20
樣品(pǐn)
樣(yàng)品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
樣品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品(pǐn)
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
C
10
10
樣(yàng)品
樣品(pǐn)
樣品(pǐn)
樣(yàng)品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
樣品
樣品
樣(yàng)品
樣品
D
5.0
5.0
樣品
樣品(pǐn)
樣品
樣品
樣品
樣(yàng)品
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣(yàng)品(pǐn)
樣品(pǐn)
E
2.5
2.5
樣(yàng)品
樣(yàng)品
樣品(pǐn)
樣品
樣品
樣(yàng)品
樣品
樣品(pǐn)
樣品(pǐn)
樣(yàng)品(pǐn)
F
1.25
1.25
樣(yàng)品(pǐn)
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品
樣品
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
樣品
樣品(pǐn)
G
0
0
樣(yàng)品
樣品
樣品
樣品(pǐn)
樣品
樣品(pǐn)
樣品
樣品(pǐn)
樣(yàng)品
樣品
H
樣品(pǐn)
樣(yàng)品
樣品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品
樣品(pǐn)
樣品
樣(yàng)品(pǐn)
樣(yàng)品
樣品

結果(guǒ)分(fēn)析
以(yǐ)吸(xī)光度(dù)OD值為縱坐標(Y),相(xiāng)應的ABA 標準品濃度為橫坐標(X),做(zuò)得(dé)相應(yīng)的(dí)曲綫(xiàn),樣品(pǐn)的(dí)ABA 含量可根(gēn)據其OD值(zhí)由標準曲綫換(huàn)算(suàn)出(chū)相應的濃度(dù)。
局(jú)限(xiàn)
6號標(biāo)準品以上的結果為(wéi)非(fēi)綫(xiàn)性的,根據此標(biāo)準曲(qū)綫無(wú)法得到的(dí)結果(guǒ)。
試劑盒性(xìng)能(néng)
1. 靈敏(mǐn)度(dù):zui小的檢(jiǎn)測濃(nóng)度(dù)小於(yú)1號(hào)標(biāo)準品(pǐn)。稀釋度的綫(xiàn)性。樣(yàng)品綫(xiàn)性(xìng)回歸與(yǔ)預(yù)期濃度相(xiāng)關係數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其(qí)它細胞因(yīn)子(zǐ)反應(yīng)。
3. 重(zhòng)復性:板內,板間變(biàn)異係(xì)數(shù)均小於10%。
 
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