伯樂(lè)bio-rad轉印槽(cáo)可快(kuài)速(sù),高(gāo)質量地(dì)轉印小(xiǎo)型凝(níng)膠。作(zuò)為(wéi)Mini-PROTEAN 3 電(diàn)泳(yǒng)係(xì)統(tǒng)的一(yī)個組件,伯樂(lè)bio-rad轉印(yìn)槽能(néng)容納2 個凝(níng)膠支(zhī)架轉(zhuǎn)印(yìn)夾(jiā),用(yòng)於在Mini-PROTEAN 3 電泳槽(cáo)內(nèi)電轉(zhuǎn)印兩種小凝膠(jiāo)(Mini-PROTEAN 3 凝膠(jiāo)和(hé)ReadyGel 預製膠)。
伯(bó)樂(lè)bio-rad轉印槽(cáo)特(tè)點(diǎn)包括(kuò):
1.1小時內轉(zhuǎn)印2 塊(kuài)7.5 x 10 cm 凝膠(jiāo);也(yě)可進(jìn)行低強 度的(dí)過夜轉(zhuǎn)印
2.電(diàn)極絲相距(jù)4cm,以產生強電(diàn)場保證有效(xiào)的(dí)蛋白轉印(yìn)
3.顏(yán)色標(biāo)記的(dí)轉印夾和電極(jí),確保轉印過(guò)程中(zhōng)凝(níng)膠 的正(zhèng)確定向
4.內置bio-rad冷卻(què)裝置,快速吸(xī)收(shōu)轉(zhuǎn)移(yí)過(guò)程中產生(shēng) 的熱量
5.既(jì)可(kě)作為完整(zhěng)的(dí)獨立(lì)設備,又可作為一個模塊與 Mini-PROTEAN 3 轉(zhuǎn)印槽的緩衝液(yè)槽和蓋兼容
伯(bó)樂bio-rad轉印槽(cáo)使用(yòng)方(fāng)法(fǎ)步驟:
全(quán)程(chéng)請戴手套(tào)操(cāo)作(zuò),以免汙染伯樂(lè)bio-rad轉印槽!
1)電泳(yǒng)後SDS-PAGE 膠片(piàn)浸(jìn)在(zài)轉(zhuǎn)印緩衝液(yè)中,洗2~3 次,每次10min.
2)取出伯樂(lè)bio-rad轉印(yìn)槽,先小(xiǎo)心(xīn)放一攪拌子(zǐ)在(zài)底部,再倒一半(bàn)轉印(yìn)緩(huǎn)衝(chōng)液。
3)取轉印紙切成(chéng)約如(rú)膠片大(dà)小,先在方形培養(yǎng)皿中(zhōng)以少許甲醇浸(jìn)濕數(shù)秒鐘,再置入(rù)伯(bó)樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中的(dí)緩(huǎn)衝液10 min 後(hòu)使(shǐ)用。 另取(qǔ)兩張濾紙,以及(jí)兩片方形海(hǎi)綿墊,都放(fàng)在伯(bó)樂轉(zhuǎn)印槽的緩(huǎn)衝液(yè)中(zhōng)備(bèi)用。
4)取出轉(zhuǎn)印夾打(dǎ)開(kāi)平放,先(xiān)墊(diàn)一(yī)張方(fāng)形海(hǎi)棉(mián)墊(diàn),鋪(pū)上一張濕(shī)濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上(shàng)去,然(rán)後小(xiǎo)心迭上已潤濕(shī)的轉印紙,用塗菌玻(bō)璃(lí)棒趕出氣泡(pào);轉印(yìn)紙(zhǐ)再滴上(shàng)數(shù)滴(dī)緩衝液後,加(jiā)蓋(gài)一(yī)層濾紙(zhǐ),及另一張海(hǎi)綿,也(yě)都(dū)不(bù)可陷(xiàn)入氣泡(pào),即(jí)可把整個轉印三(sān)明(míng)治(zhì)卡夾裝好(hǎo)。
膠(jiāo)迭到轉印紙(zhǐ)時(shí),一次成功,不(bù)要(yào)重作(zuò),否(fǒu)則蛋白(bái)質(zhì)色帶可(kě)能(néng)會印(yìn)上去,zui後(hòu)產生重(zhòng)迭影(yǐng)像(xiàng)。
5)將轉印(yìn)三(sān)明(míng)治置入已經(jīng)放(fàng)有一半轉印緩(huǎn)衝(chōng)液的伯樂(lè)bio-rad轉印槽中,注意(yì)有轉(zhuǎn)印紙的那(nà)一麵向正極(jí)(紅色),膠片那麵向負極(jí)(黑色(sè))。
6)當(dāng)三(sān)明治(zhì)都放入伯(bó)樂bio-rad轉印槽後(hòu),以轉印緩衝(chōng)液蓋滿所(suǒ)有的三(sān)明(míng)治,小心動一動(dòng)卡夾(jiā),除(chú)去附在卡夾(jiā)內外的氣(qì)泡,蓋上蓋子(zǐ),放到(dào)一攪拌(bàn)器上(shàng),打開(kāi)攪拌(bàn)器開始攪拌(bàn),同時(shí)接好(hǎo)電源,裝置完(wán)成後放(fàng)置10 min.
7)以300mA開始轉印,溫度(dù)會漸(jiàn)漸(jiàn)上升(shēng),轉印1.5 h左(zuǒ)右 後中止(zhǐ)轉印,取(qǔ)出轉印三(sān)明治,打開後(hòu)依(yī)次取(qǔ)出(chū)轉(zhuǎn)印紙及膠。
具體(tǐ)轉印條(tiáo)件(jiàn)要根據蛋(dàn)白(bái)的(dí)大(dà)小進行(háng)優化,注意(yì)低溫。
8)轉印(yìn)後的(dí)膠片可以繼續(xù)進(jìn)行(háng)染色,看有(yǒu)無蛋(dàn)白(bái)質殘留。若(ruò)電(diàn)泳(yǒng)時(shí)加有(yǒu)藍色標準(zhǔn)蛋白質marker(SeeBlue),則可在轉印紙上(shàng)看到藍(lán)色(sè)的色帶,確定轉印成功,並可評估轉(zhuǎn)印效(xiào)率。