伯(bó)樂bio-rad轉(zhuǎn)印槽的優(yōu)點(diǎn):
1小時(shí)內轉印2塊(kuài)10x7.5cm凝(níng)膠(jiāo);也可以進行(háng)低(dī)強度的(dí)隔(gé)夜轉(zhuǎn)印。
電(diàn)極絲相(xiāng)距4cm以產(chǎn)生強電場保證高效的蛋(dàn)白(bái)轉(zhuǎn)印。
彩(cǎi)色標(biāo)記(jì)的(dí)轉印(yìn)夾和(hé)電極確保轉印(yìn)過程中凝膠的正確定(dìng)向(xiàng)。
藍色(sè)致冷(lěng)芯可*置於bio-rad轉印(yìn)槽(cáo)內,在快(kuài)速(sù)轉印過(guò)程中(zhōng)吸收熱量。
既(jì)可(kě)作為(wéi)完(wán)整的(dí)獨立設(shè)備,也可作(zuò)為一個(gè)模(mó)塊(kuài)與緩(huǎn)衝(chōng)液槽和蓋兼容。
伯樂bio-rad轉(zhuǎn)印(yìn)槽使(shǐ)用前後(hòu)的(dí)注(zhù)意事項(xiàng):
1,轉印前準備(bèi):在電泳結(jié)束前30分(fēn)鐘應開始準(zhǔn)備工作在電泳(yǒng)過(guò)程中(zhōng),提前準(zhǔn)備(bèi)轉(zhuǎn)印所需物(wù)品:根(gēn)據轉印所(suǒ)用膠的大(dà)小,剪一(yī)稍(shāo)比膠大一些的厚濾紙(zhǐ)和一剛(gāng)好大小的(dí)厚(hòu)濾(lǜ)紙,將此兩(liǎng)張(zhāng)膜浸入電轉印液(yè)中;再剪(jiǎn)四張大小為(wéi)5cm×2cm的PVDF膜(mó),左下(xià)角剪去(qù)一角(jiǎo),將(jiāng)此(cǐ)膜(mó)浸泡在(zài)甲(jiǎ)醇溶(róng)液(yè)中不超(chāo)過1min後取出浸入ddH2O中1min,取出(chū)浸入(rù)轉印液中(切濾紙和(hé)膜時一(yī)定要(yào)戴手套,因為手(shǒu)上的蛋(dàn)白會汙染膜)(如(rú)果(guǒ)是NC膜,則用鑷(niè)子捏住(zhù)膜的(dí)一邊(biān)輕輕置(zhì)於有(yǒu)超(chāo)純水的平皿(mǐn)裏(lǐ),要使(shǐ)膜浮於水上(shàng),隻(zhī)有下層(céng)才與(yǔ)水接(jiē)觸。這樣(yàng)由於毛(máo)細管(guǎn)作用可(kě)使(shǐ)整(zhěng)個膜(mó)浸濕(shī)。若(ruò)膜沉入(rù)水(shuǐ)裏,膜(mó)與(yǔ)水(shuǐ)之間(jiān)形成一層空氣膜(mó),這(zhè)樣(yàng)會阻止膜(mó)吸(xī)水,靠毛(máo)細作用(yòng)自(zì)然(rán)吸(xī)水(shuǐ)後再*浸(jìn)入水(shuǐ)中10min以排(pái)除氣泡,隨後浸泡入轉移(yí)液(yè)中(zhōng))
2,轉(zhuǎn)印結(jié)束(shù),將膜(mó)從(cóng)電(diàn)轉槽(cáo)中取(qǔ)出,TBST稍(shāo)加(jiā)漂(piāo)洗3次,每次(cì)5-10min;爾後(hòu)浸(jìn)沒(méi)於(yú)封閉液中緩慢(màn)搖蕩1h。封(fēng)閉是將(jiāng)轉印(yìn)膜上坑坑窪窪(wā)的(dí)地方用BSA或脫脂奶粉(fěn)填平,降(jiàng)低抗體的(dí)非特(tè)異性(xìng)吸(xī)附(fù)產生很濃(nóng)的背景(jǐng)。常用(yòng)5%BSA和脫(tuō)脂(zhī)奶封(fēng)閉(bì),若是做磷(lín)酸化蛋白(bái),隻能用BSA,因為(wéi),奶中(zhōng)含(hán)有(yǒu)磷酸(suān)化蛋白(bái)。而(ér)封閉(bì)液濃(nóng)度,可(kě)根據實(shí)驗需(xū)摸索條件。蛋(dàn)白(bái)麵(miàn)朝(zhāo)上(shàng),封閉2h,搖(yáo)床(chuáng)速(sù)度不超過40,結束後直(zhí)接進一(yī)抗。