全(quán)程(chéng)請戴手套(tào)操(cāo)作，以免汙(wū)染伯樂(lè)bio-rad轉印槽！

　　1）電(diàn)泳後(hòu)SDS-PAGE 膠片浸在轉印(yìn)緩(huǎn)衝液(yè)中(zhōng)，洗(xǐ)2~3 次，每次(cì)10min.

　　2）取出伯樂bio-rad轉(zhuǎn)印(yìn)槽(cáo)，先小(xiǎo)心放(fàng)一攪拌(bàn)子(zǐ)在(zài)底部，再倒一半轉印(yìn)緩衝液。

　　3）取轉(zhuǎn)印(yìn)紙切成約如(rú)膠片大小(xiǎo)，先在方形培(péi)養皿(mǐn)中以少許甲醇(chún)浸(jìn)濕(shī)數(shù)秒(miǎo)鐘(zhōng)，再(zài)置入(rù)伯(bó)樂bio-rad轉(zhuǎn)印槽中的(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液10 min 後(hòu)使用。 另(lìng)取(qǔ)兩張濾紙(zhǐ)，以及(jí)兩片方形海(hǎi)綿(mián)墊(diàn)，都放(fàng)在伯樂轉印槽的緩衝(chōng)液中(zhōng)備用(yòng)。

　　4）取(qǔ)出(chū)轉印(yìn)夾打開平放(fàng)，先(xiān)墊(diàn)一(yī)張方(fāng)形海(hǎi)棉墊，鋪上(shàng)一(yī)張濕濾(lǜ)紙(zhǐ)，小心(xīn)平鋪(pū)SDS-PAGE膠上(shàng)去，然(rán)後小(xiǎo)心(xīn)迭上(shàng)已(yǐ)潤(rùn)濕(shī)的轉印(yìn)紙(zhǐ)，用塗菌玻璃棒(bàng)趕出氣泡(pào)；轉印紙再滴上數(shù)滴(dī)緩衝液後，加蓋一層濾(lǜ)紙，及(jí)另(lìng)一(yī)張(zhāng)海(hǎi)綿(mián)，也(yě)都(dū)不可陷入氣泡，即(jí)可(kě)把整(zhěng)個(gè)轉印三明治(zhì)卡(qiǎ)夾裝(zhuāng)好。

　　膠(jiāo)迭(dié)到(dào)轉印(yìn)紙(zhǐ)時(shí)，一(yī)次成功，不(bù)要重(zhòng)作(zuò)，否則蛋白質(zhì)色帶可能會印上去(qù)，產生重迭(dié)影像。

　　5）將轉(zhuǎn)印(yìn)三明治置(zhì)入已經放有一(yī)半轉印緩衝(chōng)液的伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中，注意(yì)有(yǒu)轉印(yìn)紙(zhǐ)的那(nà)一麵向(xiàng)正極(jí)（紅(hóng)色），膠片(piàn)那(nà)麵(miàn)向(xiàng)負(fù)極(jí)（黑色(sè)）。

　　6）當(dāng)三明治(zhì)都放入(rù)伯樂bio-rad轉印槽後(hòu)，以轉印緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)蓋(gài)滿(mǎn)所有的三(sān)明治，小(xiǎo)心(xīn)動(dòng)一動(dòng)卡夾，除(chú)去附(fù)在卡(qiǎ)夾內(nèi)外(wài)的氣泡(pào)，蓋(gài)上蓋(gài)子(zǐ)，放(fàng)到一(yī)攪拌器上，打開(kāi)攪拌器開(kāi)始(shǐ)攪拌(bàn)，同時接好電(diàn)源，裝(zhuāng)置完成(chéng)後(hòu)放置(zhì)10 min.

　　7）以(yǐ)300mA開始轉(zhuǎn)印(yìn)，溫(wēn)度會漸(jiàn)漸上升，轉印(yìn)1.5 h左(zuǒ)右 後中止轉(zhuǎn)印，取出轉印三明(míng)治，打開後依(yī)次取出轉(zhuǎn)印紙(zhǐ)及(jí)膠。

　　具(jù)體轉印條件(jiàn)要根(gēn)據蛋白的(dí)大(dà)小進行(háng)優化，注(zhù)意低溫。

　　8）轉(zhuǎn)印後的膠片可以(yǐ)繼續(xù)進(jìn)行(háng)染(rǎn)色(sè)，看有無蛋白(bái)質殘留(liú)。若(ruò)電泳時(shí)加有藍色標準蛋白質marker（SeeBlue），則可在(zài)轉印紙上(shàng)看到(dào)藍(lán)色的(dí)色帶(dài)，確(què)定(dìng)轉(zhuǎn)印(yìn)成功，並(bìng)可(kě)評(píng)估轉(zhuǎn)印效(xiào)率。