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葡聚糖(táng)凝(níng)膠柱

更(gēng)新(xīn)時(shí)間：2011-03-09 | 點(diǎn)擊率：3259

（1）預處理(lǐ)
稱(chēng)取(qǔ)葡(pú)聚糖凝(níng)膠（有不(bù)同型號(hào)）若幹(gān)克(kè)，加入洗(xǐ)脫劑（通常為甲(jiǎ)醇(chún)或(huò)者水，這裏(lǐ)以(yǐ)甲(jiǎ)醇為(wéi)例(lì)）約20倍凝膠(jiāo)量，置(zhì)室(shì)溫(wēn)下(xià)3h進行溶脹，溶脹(zhàng)必(bì)須(xū)*，否(fǒu)則(zé)會使(shǐ)上柱後流速變(biàn)慢(màn)，凝膠斷(duàn)裂等(děng)。
（2）裝柱
凝膠(jiāo)層(céng)析(xī)柱(zhù)的(dí)直(zhí)徑(jìng)與柱長之比(bǐ)一(yī)般為(wéi)1:15。柱(zhù)的(dí)底部(bù)用裝(zhuāng)有細(xì)玻璃管的(dí)橡皮塞(sāi)塞緊，用洗淨的玻(bō)璃絲（約(yuē)200目(mù)尼(ní)龍布）墊(diàn)底或購買類(lèi)似規格(gé)的商(shāng)品柱(zhù)。然(rán)後(hòu)將(jiāng)柱(zhù)垂直安裝好(hǎo)，接(jiē)著將(jiāng)溶脹好的(dí)凝膠邊攪(jiǎo)匀(yún)邊(biān)緩緩連(lián)續裝入，色(sè)譜(pǔ)柱的出口流速m維持在5~10ml/min。凝膠顆粒沉積到柱(zhù)底(dǐ)後關緊色譜柱，等沉(chén)降(jiàng)到(dào)1-2cm時(shí)再(zài)2打開色(sè)譜柱(zhù)。直至降(jiàng)到(dào)滿意高(gāo)度(dù)為止，等凝(níng)膠柱內(nèi)的(dí)液(yè)體留(liú)的與凝膠(jiāo)高度(dù)差(chà)不(bù)多時，用較(jiào)小的(dí)濾紙(zhǐ)蓋住凝(níng)膠床(chuáng)表麵(miàn)，再用(yòng)洗脫(tuō)劑洗(xǐ)脫過夜。裝(zhuāng)柱後的凝膠必須均(jūn)匀，不(bù)能有(yǒu)氣泡或(huò)明顯條紋。否(fǒu)則，必(bì)須到(dào)出重(zhòng)裝。
（3）加(jiā)樣(yàng)
裝好的色(sè)譜(pǔ)柱至(zhì)少要用相當於3倍保留體積的(dí)洗(xǐ)脫劑(jì)平(píng)衡(héng)，待(dài)洗脫劑流至與凝膠柱(zhù)液(yè)麵(miàn)相平時（不能(néng)流幹，否則(zé)會(huì)帶入氣(qì)泡），用滴管吸取(qǔ)樣品溶液，在(zài)高(gāo)於(yú)凝膠(jiāo)表(biǎo)麵約1cm處(chǔ)，沿(yán)管壁四(sì)周緩緩(huǎn)滴加樣品(pǐn)液(yè)，加(jiā)完後打(dǎ)開下麵(miàn)的出(chū)口，使樣品滲入(rù)凝(níng)膠(jiāo)內。再關(guān)閉出口(kǒu)，用少量洗脫(tuō)液(yè)將管壁殘留的(dí)樣(yàng)品洗(xǐ)下，再打(dǎ)開出口，至溶液滲入柱(zhù)內，再關(guān)閉出(chū)口。可以考(kǎo)慮(lǜ)再(zài)加(jiā)一(yī)層薄薄的脫脂棉以(yǐ)保護柱表麵（我(wǒ)一般(bān)不加），然後即可進(jìn)行洗脫。
（4）洗(xǐ)脫與收(shōu)集
洗脫(tuō)時，用甲醇(chún)作(zuò)洗(xǐ)脫(tuō)劑(jì)，並且(qiě)要連(lián)續(xù)不(bù)斷地進(jìn)行(háng)，使(shǐ)凝(níng)膠柱上端保持一(yī)定(dìng)的液(yè)層(céng)，防止凝(níng)膠柱表麵的液體流幹(gān)。一(yī)般酸(suān)性(xìng)洗(xǐ)脫劑(jì)中(zhōng)鹼(jiǎn)性(xìng)物質(zhì)容(róng)易洗(xǐ)脫，鹼性(xìng)洗脫劑(jì)中(zhōng)酸性(xìng)物(wù)質容易洗脫(tuō)。多糖(táng)類(lèi)物質等極性大(dà)的(dí)物(wù)質考慮用水(shuǐ)洗(xǐ)脫(tuō)，常用(yòng)的洗脫劑是(shì)水-甲(jiǎ)醇(chún)，水-乙醇(chún)，水(shuǐ)-丙(bǐng)酮(tóng)等(děng)，一般(bān)根(gēn)據自己樣(yàng)品的(dí)性(xìng)質選(xuǎn)擇(zé)洗脫液(yè)，洗脫液(yè)可一直用(yòng)單(dān)一梯度。凝膠(jiāo)色(sè)譜的共性是(shì)流速慢，每份一般(bān)體(tǐ)積(jī)較小。（內徑1.3cm左右(yòu)，長(cháng)80cm左右的(dí)柱子(zǐ)我一般(bān)每(měi)份(fèn)收集液(yè)為8ml）
（5）凝膠(jiāo)的(dí)再生(shēng)和回(huí)收(shōu)
凝(níng)膠柱多(duō)次(cì)使用(yòng)後(hòu)，若汙染嚴重(zhòng)，則(zé)考(kǎo)慮用(yòng)50度左右(yòu)的(dí)2%的NaOH和(hé)0.5mol/LNaCl混合液浸泡後(hòu)，再用水洗淨即(jí)可。
通常(cháng)層(céng)析柱(zhù)經洗脫劑再生，平衡後(hòu)，就可反(fǎn)復使(shǐ)用。但使用過多次(cì)後凝(níng)膠床體(tǐ)積(jī)變(biàn)小，流速降低(dī)，凝膠(jiāo)汙(wū)染(rǎn)雜質(zhì)過多，甚(shèn)至變色，需(xū)經(jīng)再生後(hòu)才(cái)可使(shǐ)用(yòng)。再生方法(fǎ)有多種：如(rú)（1）用(yòng)水進行逆向(xiàng)衝(chōng)洗(xǐ)，再用洗(xǐ)脫(tuō)劑(jì)平衡(héng)，便可重新使用(yòng)。又(yòu)如(rú)（2）把(bǎ)凝(níng)膠(jiāo)倒(dǎo)出，用(yòng)6mol/L脲浸泡凝膠半小時，抽濾(lǜ)，再(zài)用(yòng)水漂(piāo)洗(xǐ)數(shù)次(cì)，除淨脲，必要時重復(fù)上述操(cāo)作(zuò)即(jí)可重新使用。

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